化妆品卫生规范2007版.doc
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化妆品卫生规范2007版
第二部分
毒理学试验方法
MethodsofToxicologicalTest
一、总则
GeneralPrinciples
1范围
本规范规定了化妆品原料及其产品安全性评价的毒理学检测要求。
2化妆品原料的检测
化妆品的新原料，一般需进行下列毒理学试验：
（1）急性经口和急性经皮毒性试验；
（2）皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验；
（3）皮肤变态反应试验；
（4）皮肤光毒性和光敏感试验*（原料具有紫外线吸收特性需做该项试验）；
（5）致突变试验（至少应包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试验）；
（6）亚慢性经口和经皮毒性试验；
（7）致畸试验；
（8）慢性毒性/致癌性结合试验；
（9）毒物代谢及动力学试验*；
（10）根据原料的特性和用途，还可考虑其它必要的试验。
如果该新原料与已用于化妆品的原料化学结构及特性相似，则可考虑减少某些试验。
*试验方法参照GB7919-87化妆品安全性评价程序和方法；
OECD化学物质试验指南（OECDGuidelinesforTestingofChemicals）。
3化妆品产品的检测
3.1检测项目
在一般情况下，新开发的化妆品产品在投放市场前,应根据产品的用途和类别进行相应
的试验，以评价其安全性。
3.2检测项目的选择原则
3.2.1由于化妆品种类繁多，在选择试验项目时应根据实际情况确定。
3.2.2每天使用的化妆品需进行多次皮肤刺激性试验，进行多次皮肤刺激性试验者不再进行
急性皮肤刺激性试验，间隔数日使用的和用后冲洗的化妆品进行急性皮肤刺激性试验。
3.2.3与眼接触可能性小的产品不需进行急性眼刺激性试验。
二、急性经口毒性试验
AcuteOralToxicityTest
1范围
本规范规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2规范性引用文件
OECDGuidelinesforTestingofChemicals（No.401,Feb.1987）
USEPAOPPTSHarmonizedTestGuidelines（Series870.1100,Aug.1998）
3试验目的
急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对
健康危害的信息。
试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验
和其它毒理学试验剂量的依据。
4定义
4.1急性经口毒性（Acuteoraltoxicity）：
一次或在24h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。
4.2经口LD50（半数致死量，Mediumlethaldose）：
经口一次给予受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试物的重量（mg/kg或g/kg）来表示。
5试验的基本原则
以管饲法经口给予各试验组动物不同剂量的受试物，每组用一个剂量，染毒剂量的选择可通过预试验确定。
染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行尸检。
本方法主要适用于啮齿类动物的研究，但也可用于非啮齿类动物的研究。
6试验方法
6.1受试物
受试物应溶解或悬浮于适宜的介质中，建议首选水，其次是植物油（如玉米油），或考虑使用其它介质（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）。
对非水溶性介质，应了解其毒理特性，
否则应在试验前先确定其毒性。
每次经口染毒液体的最大容量取决于实验动物的大小，对啮
齿类动物所给液体容量一般为1mL/100g，水溶液可至2mL/100g。
通过调整受试物溶液浓度
使各剂量组经口染毒的容量一致。
6.2实验动物和饲养环境
首选健康成年大鼠和小鼠，也可选用其它敏感动物。
使用雌性动物应是未孕和未曾产仔
的。
实验动物体重之间相差不得超过平均体重的20%。
试验前动物要在实验动物房环境中
至少适应3d～5d时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
6.3剂量水平
根据所选方法的要求，原则上应设4～6个剂量组，每组动物一般为10只，雌雄各半。
各剂量组间距大小以兼顾产生毒性大小和死亡为宜，通常以较大组距和较少量动物进行预
试。
如果受试物毒性很低，也可采用一次限量法，即用10只动物（雌雄各半）口服5000mg/kg
体重剂量，当未引起动物死亡，可考虑不再进行多个剂量的急性经口毒性试验。
6.4试验步骤
6.4.1试验前，实验动物禁食过夜，不限制饮水。
若采用代谢率高的其它动物，禁食时间可
以适当缩短。
6.4.2正式试验时，称量动物体重，随机分组，然后对各组动物用管饲法一次进行染毒，若
估计受试物毒性很低，一次给予容量太大，也可在24h内分2～3次染毒，但合并作为一次剂量计算。
染毒后继续禁食3h～4h。
若采用分批多次染毒，根据染毒间隔长短，必要时可给动物一定量的食物和水。
6.4.3染毒后，对每只动物都应有单独全面的记录，染毒第1d要定时观察实验动物的中毒
表现和死亡情况，其后至少每天进行一次仔细的检查。
详细记录被毛和皮肤、眼睛和粘膜，
呼吸、循环、自主神经和中枢神经系统、肢体活动和行为等改变。
特别注意是否出现震颤、
抽搐、流涎、腹泻、嗜睡和昏迷等症状。
应记录毒作用体征出现和消失的时间和死亡时间。
6.4.4观察期限一般不超过14d，但观察时间并非一成不变，要视动物中毒反应的严重程度、
症状出现快慢和恢复期长短而定。
若有死亡延迟迹象，可延长观察时间。
观察期内存活动物每周称重，观察期结束存活动物应称重，处死后进行尸检。
6.4.5对实验动物进行大体解剖学检查，并记录全部大体病理改变。
对死亡和存活24h和24h以上动物并存在大体病理改变的器官应进行病理组织学检查。
6.4.6可采用多种方法测定LD50，建议采用霍恩氏法、上-下法、概率单位-对数图解法和寇氏法等。
6.5试验结果评价
评价试验结果时，应将LD50与观察到的毒性效应和尸检所见相结合考虑，LD50值是受试物毒性分级和标签标识以及判定受试物经消化道摄入后引起动物死亡可能性大小的依据。
引用LD50值时一定要注明所用实验动物的种属、性别、染毒途径、观察期限等。
评价应包
括动物接触受试物与动物异常表现（包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应
及其它毒性作用）的发生率和严重程度之间的关系。
毒性分级见表1。
7试验报告
试验报告应包括如下内容：
（1）受试物名称、理化性状、配制方法、所用浓度；
（2）实验动物的种属、品系和来源（注明合格证号和动物级别）；
（3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物房合格证号；
（4）所用剂量和动物分组，每组所用动物性别、数量及体重范围；
（5）染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体解剖及病理所见；
（6）计算LD50的方法；
（7）列表报告结果和计算的LD50及其95%可信区间（建议的表格形式见表2）；
（8）结论。
8试验结果的解释
急性经皮毒性试验研究和经皮LD50的确定提供了受试物经皮染毒的毒性。
其结果外推
到人类的有效性很有限。
急性经皮毒性试验的结果应与经其它途径染毒的急性毒性试验结果
相结合进行综合评价。
三、急性经皮毒性试验
AcuteDermalToxicityTest
1范围
本规范规定了动物急性皮肤毒性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2规范性引用文件
OECDGuidelinesforTestingofChemicals（No.402，Feb.1987）
USEPAOPPTSHarmonizedTestGuidelines（Series870.1200，Aug.1998）
3试验目的
急性皮肤毒性试验可确定受试物能否经皮肤吸收和短期作用所产生的毒性反应，可为化
妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其它毒理学试验剂量提供依据。
4定义
4.1急性皮肤毒性（Acutedermaltoxicity）：
经皮一次涂敷受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。
4.2经皮LD50（半数致死量,Mediumlethaldose）：
经皮一次涂敷受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重涂敷受试物的重量（mg/kg或g/kg）来表示。
5试验的基本原则
受试物以不同剂量经皮给予各组实验动物，每组用一个剂量。
染毒后观察动物的毒性反
应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行尸
检。
若已知受试物具有腐蚀性或强刺激性可不进行急性经皮毒性试验。
6试验方法
6.1受试物
液体受试物一般不需稀释。
若受试物为固体，应研磨成细粉状，并用适量水或无毒、无
刺激性、不影响受试物穿透皮肤、不与受试物反应的介质混匀，以保证受试物与皮肤有良好
的接触。
常用的介质有橄榄油、羊毛脂、凡士林等。
6.2实验动物和饲养环境
可选用健康成年大鼠、家兔或豚鼠作为实验动物，也可使用其它种属动物进行试验。
使用雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
建议实验动物体重范围为：
大鼠200g～300g；家兔2kg～3kg；豚鼠350g～450g。
实验动物皮肤应健康无破损。
试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d～5d时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
6.3剂量水平
根据所选用的方法要求，原则上应设4～6个剂量组，每组动物一般为10只，雌雄各半。
各剂量组间距大小以兼顾产生毒性大小和死亡为宜，通常以较大组距和较少量动物进行预试。
如果受试物毒性很低，可采用一次限量法，即用10只动物（雌雄各半）皮肤涂抹2000mg/kg体重剂量，当未引起动物死亡，可考虑不再进行多个剂量的急性经皮毒性试验。
6.4试验步骤
6.4.1试验开始前24h，剪去或剃除动物躯干背部拟染毒区域的被毛，去毛时应非常小心，不要损伤皮肤以免影响皮肤的通透性。
涂皮面积约占动物体表面积的10%，应根据动物体
重确定涂皮面积。
体重为200g～300g的大鼠约为30cm2～40cm2，体重为2kg～3kg的家兔约为160cm2～210cm2，体重为350g～450g的豚鼠约为46cm2～54cm2。
6.4.2将受试物均匀涂敷于动物背部皮肤染毒区，然后用一层薄胶片覆盖，无刺激胶布固定，
防止动物舔食。
若受试物毒性较高，可减少涂敷面积，但涂敷仍需尽可能薄而均匀。
一般封
闭接触24h。
6.4.3染毒结束后，应使用水或其它适宜的溶液清除残留受试物。
6.4.4观察期限一般不超过14d，但要视动物中毒反应的严重程度、症状出现快慢和恢复期
长短而定。
若有延迟死亡迹象，可考虑延长观察时间。
6.4.5对每只动物都应有单独全面的记录，染毒第1d要定时观察实验动物的中毒表现和死
亡情况，其后至少每天进行一次仔细的检查。
包括被毛和皮肤、眼睛和粘膜以及呼吸、循环、
自主神经和中枢神经系统、肢体运动和行为活动等的改变。
特别注意观察动物是否出现震颤、
抽搐、流涎、腹泻、嗜睡、和昏迷等症状。
死亡时间的记录应尽可能准确。
观察期内存活动物每周称重、观察期结束存活动物应称重，处死后进行尸检。
6.4.6对实验动物进行大体解剖学检查，并记录全部大体病理改变。
对死亡和存活24h和24h以上动物并存在大体病理改变的器官应进行病理组织学检查。
6.4.7可采用多种方法测定LD50，建议采用霍恩氏法、上-下法、概率单位-对数图解法和寇氏法等。
6.5试验结果评价
评价试验结果时，应将经皮LD50与观察到的毒性效应和尸检所见相结合考虑，LD50值
是受试物毒性分级和标签标识以及判定受试物经皮肤吸收后引起动物死亡可能性大小的依
据。
引用LD50值时一定要注明所用实验动物的种属、性别、染毒途径、观察期限等。
评价
应包括动物接触受试物与动物异常表现（包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死
效应及其它毒性作用）的发生率和严重程度之间的关系。
毒性分级见表1。
7试验报告
试验报告应包括如下内容：
（1）受试物名称、理化性状、配制方法、所用浓度；
（2）实验动物的种属、品系和来源（注明合格证号和动物级别）；
（3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物房合格证号；
（4）所用剂量和动物分组，每组所用动物性别、数量及体重范围；
（5）染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体解剖及病理所见；
（6）计算LD50的方法；
（7）列表报告结果和计算LD50及其95%可信区间（建议的表格形式见表2）；
（8）结论。
8试验结果的解释
急性经皮毒性试验研究和经皮LD50的确定提供了受试物经皮染毒的毒性。
其结果外推到人类的有效性很有限。
急性经皮毒性试验的结果应与经其它途径染毒的急性毒性试验结果相结合进行综合评价。
四、皮肤刺激性/腐蚀性试验
DermalIrritation/CorrosionTest
1范围
本规范规定了动物皮肤刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。
2规范性引用文件
OECDGuidelinesforTestingofChemicals（No.404，April2002）
USEPAOPPTSHarmonizedTestGuidelines（Series870.2500，Aug.1998）
3试验目的
确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其
程度。
4定义
4.1皮肤刺激性（Dermalirritation）：
皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎性变化。
4.2皮肤腐蚀性（Dermalcorrosion）：
皮肤涂敷受试物后局部引起的不可逆性组织损伤。
5试验的基本原则
将受试物一次（或多次）涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮
肤局部刺激作用的程度并进行评分。
采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。
急性
皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。
动物如果在试验的任何阶段出现严重抑郁、痛苦的表现，则应该给予人道地处死。
依据
试验情况对受试物进行适当评价。
6试验方法
6.1受试物
液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。
若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，
并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
使用其它溶剂，
应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。
需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤
刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮
肤刺激性/腐蚀性试验。
受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。
此外，若已
知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50小于200mg/kg体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000mg/kg体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。
6.2实验动物和饲养环境
多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。
应使用成年、健康、皮肤无损伤的
动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。
实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
6.3急性皮肤刺激性试验步骤
6.3.1试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。
6.3.2取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。
另一侧皮肤作为对照。
采用封闭试验，敷用时间为4h。
对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。
对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h敷用试验。
试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。
如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试物的纱
布块同时或先后敷贴在一只家兔背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min和4h取下
一块纱布，皮肤涂敷部位在任一时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。
6.3.3于清除受试物后的1、24、48和72h观察涂抹部位皮肤反应，按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48和72h各观察时点最高积分均值，
按表2判定皮肤刺激强度。
6.3.4观察时间的确定应足以观察到可逆或不可逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。
6.4多次皮肤刺激性试验步骤
6.4.1试验前将实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围各为3cm×3cm，涂抹面积
2.5cm×2.5cm。
6.4.2取受试物约0.5mL（g）涂抹在一侧皮肤上，当受试物使用无刺激性溶剂配制时，另一侧涂溶剂作为对照，每天涂抹1次，连续涂抹14d。
从第二天开始，每次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物。
一小时后观察结果，按表1评分，对照区和试验区同样处理。
6.4.3结果评价：
按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表2判定皮肤刺激强度。
7试验报告
试验报告应以表格形式总结，包括如下内容：
（1）受试物名称、理化性状、配制方法和用量。
必要时说明受试物的pH值；
（2）实验动物的种属、品系、性别、体重和来源（注明合格证号和动物级别）；
（3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物房合格证号；
（4）每个动物在每一观察时点的皮肤刺激反应积分；
（5）具体描述除刺激性以外的其它毒性作用；
（6）结论。
8试验结果的解释
急性皮肤刺激试验结果从动物外推到人的可靠性很有限。
白色家兔在大多数情况下对有
刺激性或腐蚀性的物质较人类敏感。
若用其它品系动物进行试验时也得到类似结果，则会增
加从动物外推到人的可靠性。
试验中使用封闭式接触是一种超常的实验室条件下的试验，在
人类实际使用化妆品过程中很少存在这种接触方式。
五、急性眼刺激性/腐蚀性试验
AcuteEyeIrritation/CorrosionTest
1范围
本规范规定了动物急性眼刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。
2规范性引用文件
OECDGuidelinesforTestingofChemicals（No405，April2002）
USEPAOPPTSHarmonizedTestGuidelines（Series870.2400，Aug.1998）
3试验目的
确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物的眼睛是否有刺激作用或腐蚀作用及其程
度。
4定义
4.1眼睛刺激性（Eyeirritation）：
眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。
4.2眼睛腐蚀性（Eyecorrosion）：
眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。
5试验的基本原则
受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作
为自身对照。
在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评
价受试物对眼睛的刺激作用。
观察期限应能足以评价刺激效应的可逆性或不可逆性。
动物如果在试验的任何阶段出现严重抑郁、痛苦的表现，则应该给予人道地处死，依据
试验情况对受试物进行适当评价。
动物如出现角膜穿孔、角膜溃疡、角膜4分超过48h、缺乏光反射超过72h、结膜溃疡、坏疽、腐烂等情况，通常为不可逆损伤的症状，也应该给予人道地处死。
6试验方法
6.1受试物
液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液，染毒量为0.1mL。
若受试物为固体或颗粒状，应将其研磨成细粉状，染毒量应为体积0.1mL或重量不大于100mg（染毒量应进行记录）。
受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），或已证实对皮肤有腐蚀性或强刺激性时，
可以不再进行眼刺激性试验。
气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。
6.2实验动物和饲养环境
首选健康成年白色家兔。
至少使用3只家兔。
试验前动物要在实验动物房环境中至少适
应3d时间。
在试验开始前的24h内要对试验动物的两只眼睛进行检查（包括使用荧光素钠检查）。
有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
6.3试验步骤
6.3.1轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑，将受试物0.1mL（100mg）滴入（或涂入）结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1s，以防止受试物丢失。
另一侧眼睛不处理作自身对照。
滴入受试物后24h内不冲洗眼睛。
若认为必要，在24h时可进行冲洗。
6.3.2若上述试验结果显示受试物有刺激性，需另选用3只家兔进行冲洗效果试验，即给家兔眼滴入受试物后30s，用足量、流速较快
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