常见缓冲液的配方.docx

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常见缓冲液的配方

一•常用贮液与溶液

lmol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体

积为lOmL分装成小份贮存于-20°Co

lmol儿精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10mL

分装成小份贮存于-20°Co

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.lg乙酸胺溶解于水中，加

水定容至1L后，用0・22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加lOOmg的牛血清蛋白（组分V或分子生物

学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20°Co

lmol/L-1硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20°Co或转移lOOmg的二硫苏糖醇至微量离心管，力口0.65ml的水配制成lmol儿二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，

加水定容到100mlo

lmol/L氯化钾（KCI）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到lOOmL

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L）,混合，

NaOH的20g和2H2O?

Na2EDTA的186.1g或称取的三钠盐。

EDTA后形

成.

并溶于水中，定容至1L。

lmol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH

（6.8-8.2）,然后用水定容至100mlo

lmol/LHCI：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代・B・D•半乳糖昔）于10ml

水中，分成小份贮存于-20°Co

lmol/LMgCI2:

洛解20.3gMgCI2?

6H2O于足量的水中，定容到lOOmL

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙

醇中，定容到lOmL分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20°Co

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml

水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于・20°Co

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase—freeRNase）：

溶解lOmg的胰蛋白

RNA酶于iml的lOmmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴

中煮沸15min,使DNA酶失活。

用lmol/L的Tris—HCI调pH至7.5,于

・20°C贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至lOOmL

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的饶杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至

10%SDS（十二烷基硫酸钠）:

称取lOOgSDS慢慢转移到约含0.9L的水的。

1L烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至.

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36・4g山梨（糖）醇于足量水中使

终体积为100ml。

100%三氯乙酸（TCA）潅装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁

力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2.5%X-gal（5•漠・4・氯・3"弓|喙一卩・半乳糖昔）：

溶解25mg的X-gal

于lml的二甲基甲酰胺（DMF），用铝箔包裹装液管，贮存于-20°Co

lOOXDenhardt试剂（Denhardt'sregent）

成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖（Ficoll,400型）

2%聚乙烯毗咯烷酮（PVP・40）

2%BSA（组分V）

水2g

2g

2g

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于・20°C贮存。

10X标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端

连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/LTris-HCI

lOOmmol/LMgCl2

lOOmmol/LDTT

2mmol/LATP

5mmol/L盐酸亚精胺（可选）

0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）

水5mllmol/L贮液

lmllmol/L贮液

lmllmol/L贮液

200ul100mmol/L贮液

50ul1mmol/L贮液

0.5ml10mg/mL贮液

2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于・20°C。

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）

可以购买到lOOmmol/L纯dNTPs贮液，・80°C可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液

成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/LdATP

10mmol/LdCTPlOmmol/LdGTPlOmmol/LdTTP

贮液2ul100mmol/LdATP水.

2ul100mmol/LdCTP贮液

2ul100mmol/LdGTP贮液

2ul100mmol/LdTTP贮液

12ul

20%PEG8000/2.5MNaCI

成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20%聚乙二醇

2.5mol/L氯化钠

水20g

50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。

20XSSC

成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L柠檬酸三钠（二水）

3mol/L氯化钠

水88.2g175.3g

补足IL

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加儿滴IONNaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0・1%。

在37°C温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）

直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌lh,可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于・80°C贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）

按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和lmol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4?

H2O）贮液：

溶解138g于足量水中，使终体积为lL;lmol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

lmol/L磷酸二氢钠（ml）lmol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值

877

775

735

685

625

565

510

450

390

330

280123

150

185

225

265

315

375

435

490

550

610

7206.0

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

6.9

7.0

7.17.2

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris—HCI

lmmol/LEDTA

水lmllmol/LTris-HCl（pH7.4・8.0,25°C）

200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

98.8ml

Tris缓冲液（Tris・HCIbuffer）

将121g的Tris碱溶解于约0・9L水中，再根据所要求的pH（25°C下）加一定量的浓盐酸（11.6N）,用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）pH

8.6

14

21

28.5

38

46

56

66

71.3

769.0

8.8

8.6

8.4

8.2

8.0

7.8

7.6

7.4

7.2

二•电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液

50XTris-乙酸（TAE）缓冲液

溶液各成分的用量IL配制成分及终浓度.

2mol/LTris碱

lmol/L乙酸

100mmol/LEDTA

水242g

57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）

200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足IL

5XTris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度配制IL溶液各成分的用量

445mmol/LTris碱

445mmol/L硼酸盐

10mmol/LEDTA

水54g

27.5g硼酸

20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足IL

染料

臭酚蓝（bromophenolblue）

加lg水溶性钠型澳酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全洛解。

1%二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）

溶解Ig二甲苯青FF于足量水中，定容到100mlo

）ethidiumbromide的漠化乙锭（10mg/ml

小心称取lg漠化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4°C贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）

6X碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.3N氢氧化钠

6mmol/LEDTA

18%聚蔗糖（400型）

0.15%漠甲酚绿

0.25%二甲苯青FF

水300ul10N氢氧化钠

120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.8g

15mg

25mg

补足到10ml

6X聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15%二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

型）400%聚蔗糖（15.

水l・5ml1%溟酚蓝

1.5ml1%二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.5g

补足到10ml

6X澳酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.25%漠酚蓝

0.25%二甲苯青FF

15%聚蔗糖（400型）

水2.5ml1%溟酚蓝

2.5ml1%二甲苯青FF

1.5g

补足到10ml

6X甘油凝胶上样液（4°C贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0・15%7臭酚蓝

0.15%二甲苯青FF

5mmol/LEDTA50%甘油

水l・5ml1%溟酚蓝

FF

%二甲苯青1.5ml1.

lOOul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

3ml

3.9ml

6X蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15%溟酚蓝

0.15%二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

40%聚蔗糖

水l・5ml1%溟酚蓝

1.5ml1%二甲苯青FF

lOOul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

4g

补足到10ml

10X十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.2%漠酚蓝

200mmol/LEDTA

O・1%SDS

50%甘油

20mg

水.

20mg

4ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）

lOOul10%SDS

5ml

补足到10ml

三•常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在0・9L水中：

蛋白陈10g

酵母提取物5g

氯化钠10g

如果需要用INNaOH（〜lml）调整pH至7.0,再补足水至1L。

注：

琼

脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g儿。

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白）1东20g

酵母提取物5g

氯化钠0.5g

1mol/L氯化钾2.5ml

用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温氯

化镁。

lmol/L灭过菌的lml的小份中加100ml后,再在每

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加lml灭过菌的lmo"L氯化镁外，再加2ml灭菌的lmol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌）。

TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白腺12g

酵母提取物24g

甘油4ml

各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60°C,再加100ml灭菌的170mmo"L

KH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12・54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100mlo高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2XYT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白陈16g

酵母提取物10g

氯化钠4ml

如果需要用INNaOH（〜lml）调整pH至7.0,再补足水至1L。

注：

琼

脂平板需添加琼脂粉12g/Lz±层琼脂平板添加琼脂粉7g儿。

培养基YPD.

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白陈20g

酵母提取物10g

葡萄糖20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加l・6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四•常用抗生素

氨节青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解lg氨节青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至lOmL分装成小份于

・20°C贮存。

常以25ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

竣节青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0・5g竣节青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至lOmL分装成小

份于・20°C贮存。

常以25ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

溶解lg甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至lOmL分装成小份于・20°C贮存。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨节青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解lOOmg卡那霉素于足量的水中，最后定容至lOmL分装成小份于・20°C贮存。

常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

）25mg/ml（）chloramphenicol氯霉素（.

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10mL分装成小份于

・20°C贮存。

常以12.5ug/mH25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解0・5g链爲素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至lOmL分装成小份于・20°C贮存。

常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

蔡喘酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）

溶解50mg蔡喘酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至lOmL分装成小份于・2（TC贮存。

常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解lOOmg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至lOmL分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于・20°C的终浓度添加于生长培养基。

50ug/ml〜10ug/ml常以贮存。

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