蛋白质工程整合版1.docx
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蛋白质工程整合版1
蛋白质工程
考试题型：
英翻中10题共10分
填空20题共20分
判断15题共15分
单选30题或20题共30分
简答5题共25分
部分简答题和英翻中的范围：
1、第一章第一节——第三节考1题简答题、还会考英翻中
2、第三章第三届考1题简答题
3、第六章英翻中
4、第七章第四节第五节每一节考一题简答题
5、第九章考英翻中第三节考一道简答题
6、第十章考英翻中
第一章
蛋白质分类：
纤维状蛋白质（胶原、角蛋白）球状蛋白质（酶类）膜蛋白（膜内、膜锚定蛋白）
蛋白质功能：
调节信息传递支架作用防御与进攻其他特定功能催化结构成分贮存运动转运
氨基酸多肽链名称：
丙氨酸
Ala A
甲硫氨酸
MetM
半胱氨酸
CysC
天门冬酰胺
AsnN
天门冬氨酸
Asp D
脯氨酸
ProP
谷氨酸
GluE
谷氨酰胺
Gln Q
苯丙氨酸
PheF
精氨酸
ArgR
甘氨酸
Gly G
丝氨酸
SerS
组氨酸
HisH
苏氨酸
ThrT
异亮氨酸
IleI
缬氨酸
ValV
赖氨酸
Lys K
色氨酸
TrpW
非蛋白质氨基酸在哪出现
目前认为有些非蛋白质氨基酸是某些代谢过程的中间产物或重要代谢物的前体。
如：
瓜氨酸和鸟氨酸——精氨酸前体
刀豆氨酸和5—羟基色氨酸——杀虫杀菌。
多巴胺——神经递质
构象与构型的区别：
构型：
一个分子中各原子的特定空间排布。
当一种构型改变为另一种构型时必须有共价键的断裂和重新形成，最基本的分子构型是L-型和D-型。
构象（conformation）是组成分子的原子或基团绕单键旋转而形成的不同空间排布。
一种构象转变为另一种构象，不会有共价键的断裂与形成。
氨基酸的分类
a.按照R基的化学结构进行分类：
脂肪族（①中性氨基酸、②含羟基或硫氨基酸、③酸性氨基酸及其酰胺、④碱性氨基酸）、芳香族和杂环族氨基酸3类；
b.按照R基的极性性质进行分类：
疏水氨基酸（非极性R基氨基酸）；不带电的极性R基氨基酸；带正电的R基氨基酸；带负电的R基氨基酸。
c.非天然蛋白质氨基酸
肽：
肽是氨基酸的线性聚合物，也称为肽链（peptidechain）
肽键：
氨基酸同时含有氨基和羧基，他们能以首尾相连的方式进行缩合反应，一个氨基酸的α-NH2与另一个氨基酸的α-COOH缩合脱去一份子水，可以形成一个共价酰胺键或称肽键。
多肽：
多个氨基酸连接就会形成多肽。
多肽链：
通过肽键将多个氨基酸连接着在一起构成多肽链。
二硫键：
由肽链中相应部位上两个半胱氨酸残基脱氢连接而成的
巯基：
巯基又称氢硫基。
是由一个硫原子和一个氢原子相连组成的一价原子团，结构式为：
—SH
遗传密码：
遗传密码又称密码子、遗传密码子、三联体密码。
指信使RNA（mRNA）分子上从5'端到3'端方向，由起始密码子AUG开始，每三个核苷酸组成的三联体。
它决定肽链上每一个氨基酸和各氨基酸的合成顺序，以及蛋白质合成的起始、延伸和终止。
基因：
一段特定的DNA核苷酸序列负责编码一段多肽链，称为基因。
密码子：
64起始密码子：
AUG（Met）终止密码子：
UAA、UAG、UGA
转录：
按照碱基互补配对的原则，将DNA核苷酸序列转变为与其互补的RNA序列。
（原核细胞：
RNA聚合酶只有一种；真核细胞：
RNA聚合酶I/II/III）
翻译：
核糖体首先结合在mRNA模板上，特定的经活化的转移核糖核酸（氨酰t-RNA）带来需要的20种天然氨基酸，按照密码子的顺序，将氨基酸连成多肽链，在这一过程中有多个因子协同作用。
线状和环状寡聚多肽的非核糖体生物合成：
在微生物中存在的酶催化的氨基酸缩合系统，可以通过酶促反应合成线状、环形多肽，如短杆菌肽、青霉素、分支菌素、博来霉素等；真核生物中也可能存在和原核生物高度相似的非核糖体多肽合成系统，能催化氨基酸底物的活化、顺序缩合、各种侧链基团的修饰等。
5、蛋白质的结构：
一级结构（线性结构）：
蛋白质的一级结构（primarystructure）指它的蛋白质分子中各个氨基酸残基的排列顺序（包括:
多肽链的氨基酸顺序和数目，以及多肽链内或链间二硫键（disulfidebond）的数目和位置）维持蛋白质一级结构的作用力是:
肽键、二硫键（都属于共价键）
二级结构：
蛋白质多肽链本身的折叠与盘绕方式，包括:
α—螺旋、β—折叠片、β—转角、自由回转（没有一定规律的松散的肽链结构）等。
维持蛋白质二级结构的作用力是氢键
三级结构：
多肽链上的所有原子，包括主链和残基的侧链，在三维空间上的分布
疏水键对维持蛋白质的三级结构起着重要的意义，主要靠次级键：
氢键、疏水键、盐键、范德华力等。
四级结构：
由两条或两条以上的具有三级结构的多肽链聚合而成特定构象的蛋白质分子叫蛋白质的四级结构。
其中每一条肽链称为亚基，由亚基构成的蛋白质为寡聚蛋白。
第二章
1、蛋白质定位突变的设计目标及解决方法
设计目标
解决办法
设计目标
解决方案
热稳定性
1、引入二硫桥
2、增加内氢键数目
3、改善内疏水堆积
4、增加表面盐桥
PH稳定性
1、替换表面荷电基团
2、His、Cys以及Tyr的置换
3、内离子对的置换
对氧化的稳定性
1、把Cys转换为Ala或Ser
2、把Met转换为Gln、Val、Ile或Leu
3、把Trp转换为Phe或Tyr
提高酶学性质
1、专一性的改变
2、增加逆转数
3、改变酸碱度
对重金属的稳定性
1、把Cys转换为Ala或Ser
2、把Met转换为Gln、Val、Ile或Leu替代表面羧基
2、序列设计
设计α-螺旋时，选择Leu、Glu等易于形成a-螺旋的残基。
设计β-结构时，选择Val、Ile等易于形成β-折叠的残基
设计转角时，选择Pro-Asn残基对
3．二级结构的设计原则
α螺旋β折叠片转角
第三章蛋白质的修饰与表达
1、化学方法修饰侧链
2、偶联不考
3、固定化，分子生物学的改造
4、重叠延伸PCR（了解）P77筛选展示技术不考
5、基因融合（重）亲和标签和洗脱条件，接头及特点P83
6、报告分子P84内含肽不考重组蛋白质的表达（原核、酵母几个系统）的核心及特点
一、修饰
1、蛋白质的化学修饰：
通过活性基团的引入或去除使蛋白质化学（一级）结构发生改变的过程。
蛋白质化学修饰的主要部位是蛋白质的侧链基团。
非必需部分的修饰：
不影响蛋白质的生物活性。
必需部分的修饰：
影响蛋白质的生物活性。
2、蛋白质侧链基团的化学修饰：
是通过选择性试剂或亲和标记试剂与蛋白质分子侧链上特定的功能基团发生化学反应而实现的。
巯基、氨基和羧基特别容易产生有用的取代。
1）巯基的化学修饰
N-乙基马来酰亚胺是一种有效的巯基修饰试剂，该反应具有较强的专一性并伴随光吸收的变化，可以很容易通过光吸收的变化确定反应的程度。
巯基的DTNB修饰
2）氨基的化学修饰
三硝基苯磺酸（TNBS）能够与赖氨酸残基的ε-氨基发生反应形成一种三硝基苯基化的氨基磺酸复合物，该复合物呈黄色，在420nm下有最大吸收峰。
3）羧基的化学修饰
蛋白质分子中的羧基可以通过碳二亚胺法、混合酸酐法等与氨基形成酰胺键，其中水溶性碳二亚胺法在这类化合物的偶联反应中的应用最为广泛，它在比较温和的条件下就可以进行。
4）其它侧链基团的修饰
①二硫键的化学修饰
②组氨酸残基的咪唑基修饰
③酪氨酸残基的酚羟基修饰
④精氨酸残基强碱性的胍基修饰
3、蛋白质的聚乙二醇修饰
聚乙二醇分子两端各有一个羟基，若一端以甲基封闭则得到单甲氧基聚乙二醇（mPEG）,在多肽和蛋白质的聚乙二醇修饰研究中应用最多的是mPEG的衍生物。
常用的聚乙二醇类修饰剂：
三嗪类、琥珀酰胺类、环氧类
优点：
1）聚乙二醇即PEG具有高度的亲水性，在水溶液中有较大的水动力学体积，并且没有免疫原性。
2）改变药物分子在水溶液中的生物分配行为和溶解性。
3）在其修饰的药物周围产生空间屏障，减少药物的酶解。
4）分子量大，肾小球滤过减少，避免在肾脏的代谢中很快消除。
5）聚乙二醇类修饰剂分子量越大，半衰期越长。
经过细胞色素P450系统的氧化作用，PEG分解成小分子的PEG，经胆汁排泄。
二、蛋白质分子的固定化
方法
优点
缺点
吸附法
条件温和，操作简单，成本低，载体可再生，反复使用
结合力弱，对pH、离子强度、温度等因素敏感，酶易脱落，酶的装载容量少
包埋法
包埋材料、包埋方法可选余地大，固定化酶的使用面广，包埋条件温和
仅用于低分子量的底物，不适用于柱系统，常有扩散限制问题
共价结合法
载体与偶联方法可选择性大，酶的结合力强，非常稳定
偶联条件激烈，易引起酶失活，成本高，某些偶联剂有一定的毒性
交联法
可用交联剂多，技术简易，酶的结合力强，稳定性高
交联条件激烈，机械性能差
三、蛋白质的分子生物学改造
蛋白质工程设计可以采用定点突变和体外分子定向进化两种方式对天然酶分子进行改造。
1、定点突变可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。
该方法与使用化学因素、自然因素导致突变的方法相比，具有突变率高、简单易行、重复性好的特点。
Ps：
需要知道酶蛋白的一级结构及编码序列，并根据蛋白质空间结构知识来设计突变位点。
重叠延伸PCR技术：
采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的片段重叠拼接起来。
（P77）
定点突变的应用：
①通过特殊氨基酸的改变提高蛋白的稳定性
②通过引入二硫键提高蛋白的稳定性
③通过改变活性中心附近的氨基酸提高酶的催化活性
然而，定点突变技术只能对天然酶蛋白中少数的氨基酸残基进行替换，酶蛋白的高级结构基本维持不变，因而对酶功能的改造较为有限。
2、体外定向进化是在尚不知道蛋白质的空间结构，或者根据现有的蛋白质结构知识尚不能进行有效的定点突变时，借鉴实验室手段在体外模拟自然进化的过程，使基因发生大量变异，并定向选择出所需性质或功能。
其可分为突变体的产生、合适的筛选系统
1）突变体的产生：
易错PCR（ErrorpronePCR）、DNA搅乱重组（DNAshuffling）
易错PCR（ErrorpronePCR）是一种相对简单、快速、廉价的随机突变方法。
它通过改变PCR反应条件使碱基在一定程度上随机错配而引入多点突变。
DNAshuffling不仅可以对从随机突变文库中筛选出来一组突变基因人为进化，还可以将具有结构同源性的几种基因进行体外重组（Familyshuffling），共同进化出一种新的蛋白质。
通过这种方法产生的多样性文库，可以有效积累有益突变，排除有害突变和中性突变，同时也可实现目的蛋白质多种特性的共进化。
当DNAshuffling用来重组一系列进化上相关的基因时，就称为Familyshuffling。
四、基因融合：
P82-83
1、基本原则：
将第一个蛋白基因的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白或多肽基因，即可实现两个基因的融合表达，融合蛋白具有衍生因子的双重活性。
2、利用基因融合技术表达外源基因的缘由：
1）可是表达产物得到有效的回收、纯化；
2）产生新的多功能蛋白；
3）与报告分子结合的融合蛋白，应用于蛋白定位及转基因动物；
4）产生融合蛋白避免目的产物被快速降解，稳定表达产物的产率；
5）改变在细胞内的溶解性，防止包涵体的产生
6）将表达的外源蛋白质定向的定位在宿主的不同区位；
7）获得蛋白的可靠和可重复性的方法；
8）是对基因进行改造的手段。
3、融合蛋白标签：
1）目的：
是目的蛋白可以用亲和层析的方法快速简便地分离纯化出来。
2）功能：
a蛋白纯化
b蛋白质的检测和定向固定
c体内生物事件的可视化
d提高重组蛋白质的产量
e增强重组蛋白质的可溶性及稳定性
3）洗脱条件：
poly-argine：
碱性PH>8.0，NaCl线性梯度0-400mM
Poly-his：
150mM咪唑或低PH
FLAG：
PH3.0或2-5mMEDTA
Strep-tagⅡ：
2.5mM脱硫生物素
GST：
5-10mM还原谷胱甘肽
SBP：
2mM生物素
纤维素结合结构域：
Ⅰ型盐酸胍或大于4摩尔尿素、2/3型乙二醇
麦芽糖结合蛋白：
10mM麦芽糖
4、融合蛋白与融合酶：
1）为蛋白质的表达和纯化提供方便
2）研究蛋白质的定位及移动
3）控制蛋白质固定的空间取向
4）构建具有双催化活性的融合蛋白或融合酶
5）防止外源蛋白被宿主的蛋白水解酶降解
6）改变胞内溶解性：
硫氧还蛋白，GST
7）蛋白表达的空间定位：
信号肽
五、接头（linker）的设计和选择P83
1、特点
1）长度：
10~15个氨基酸左右。
过长对蛋白裂解敏感，导致产量下降，同时免疫原性增加；过短则影响蛋白折叠，导致蛋白功能丧失；
2）避免二级结构产生：
常用非极性的疏水氨基酸，其优点是构象广泛，有利于运动；体积小有利于堆积；
3）融合蛋白中常用的linker序列：
（GGGGS）3，单链抗体中就采用了该序列。
六、融合蛋白报告分子P84
1、用途&定义：
将易于检测的蛋白质与目的分子融合表达，可显示目标分子的存在和定位，广泛应用于启动子分析、监控转基因及其表达、细胞的信号转导与药物的筛选。
2、优点：
高灵敏度、检测方便且适合大规模检测。
3、报告分子必须具有的特点：
①报告分子应不存在于宿主中或易于和内源性基因相区别；②应该有一个简单、快速、灵敏及经济的分析方法来检测报告分子；③报告分子的分析结果应该具有很宽的线形范围，以便于分析启动子活性的幅度变化；④报告基因的表达必须不改变受体细胞或生物的生理活动。
5、举例：
绿色荧光蛋白
七重组蛋白质的表达
1、目标蛋白质在大肠杆菌中的表达
1）大肠杆菌表达体系是目前应用最广的一个外源基因表达体系。
优点：
遗传学和生理学背景清楚易培养
外源基因常可高效表达
不足：
不可进行典型的真核细胞所具有的翻译后修饰。
2）表达载体的的构建：
（１）复制起始点
（２）选择性基因
（３）强的、可诱导的启动子
（４）核糖体结合位点
（５）合适的多克隆位点
（６）强的转录终止序列
3）与外源基因有效表达的相关因素
⑴有效的转录起始与基因的高效表达
（2）有效的翻译与基因的高效表达
（3）密码子偏好性
（4）外源蛋白的表达定位
（5）宿主选择对表达的影响
（6）培养条件的控制表达效率的影响
4）Ps：
真核基因在原核细胞中的表达困难：
①RNA聚合酶不识别启动子；②mRNA不被核糖体结合（无SD序列）；③缺少拼接加工的机制；④缺乏加工酶；⑤蛋白酶降解
原核表达系统的优缺点：
细菌表达系统培养方法简单、增殖快、生产成本低，但缺乏真核细胞特有的加工后处理，外源蛋白大量表达容易形成包涵体，而且在菌体中表达的外源蛋白，在原核细胞中不稳定，易被菌体蛋白酶破坏。
2、目标蛋白质在酵母细胞中的表达
1）优点：
既具有原核细胞的增殖快、操作简单、成本低等优点，又可以象其他真核细胞一样完成对蛋白质转录和翻译后的修饰。
缺点：
它的蛋白水解酶类，可降解异体蛋白质，使产品产量降低。
2）异源蛋白在酵母中表达的一般步骤
①将编码异源蛋白的DNA序列克隆进含有酵母启动子和转录终止序列的表达框中
②转化及在宿主中稳定维持此DNA融合产物
③异源蛋白在特定培养条件下合成
④异源蛋白的纯化及其与天然产物的比较
3）影响外源蛋白在毕赤酵母中高效表达的因素
（1）目的基因的特性
（2）启动子的影响
（3）基因剂量
（4）宿主、整合方式及转化子表型
（5）影响蛋白质稳定性的因素
（6）发酵条件的影响
3、昆虫杆状病毒表达系统
1）原理：
转移载体质粒；
将外源基因克隆至转移载体的合适酶切位点
将重组转移载体与野生型病毒DNA一起共转染昆虫细胞
外源基因通过胞内同源重组而插入病毒基因组中
最后利用空斑形态的差异进行筛选、纯化重组病毒
以纯化的重组病毒感染宿主细胞或幼虫，即可获得大量的外源基因表达产物。
2）特征：
①重组蛋白具有完整的生物学功能；②能进行翻译后的加工修饰：
糖基化、磷酸化、酰基化、信号肽切除及肽段的切割和分解等；③表达水平高：
能获得重组蛋白高水平的表达，最高可使目的蛋白的量达到细胞总蛋白的50％；④能容纳大分子的插入片段；⑤同时表达多个基因；⑥适合表达细胞毒性蛋白；⑦安全
不足：
①非连续性表达；②产物糖基化相对简单
4、重组蛋白质在哺乳动物细胞中的表达
1）优点：
哺乳动物细胞是生产哺乳动物蛋白质最好的场所，其表达真核基因比其他几种表达系统更优越，能对蛋白质进行各种类型的加工和修饰，还能表达有功能的膜蛋白及分泌性蛋白。
缺点是组织细胞培养的技术要求高，培养和筛选细胞株的周期长，成本较高。
2）表达载体的类型：
病毒载体与质粒载体；整合型和附加体型载体
3）表达系统：
瞬时表达系统；稳定表达系统；诱导表达系统
5、外翻译系统：
细胞蛋白质合成系统，是一种相对胞内表达系统而言的开放表达体系。
1）优点：
①翻译系统组分和翻译条件可调；②内源性mRNA干扰很小；
③同时加入多种基因模板可研究多种蛋白质的相互作用
④可以对基因产物进行特异性标记，便于在反应混合物中检测
2）重组蛋白表达的具体步骤
①获得并分析目标基因编码序列
②选择合适的载体及宿主
③构建重组子：
设计引物；PCR扩增目标基因；酶切载体及目标DNA；连接目的基因与载体；转化宿主细胞
④重组子验证
⑤诱导表达
第五章
1、蛋白质三维结构解析过程：
原始基因组数据→筛选目的基因→建立cDNA→插入表达载体→获取大量蛋白→蛋白质结晶→X射线衍射→数据分析→蛋白质结构
↓→蛋白质纯化→核磁共振波谱→↑
2、X-射线晶体结构分析基本原理：
X射线衍射现象
3、X射线衍射现象：
利用X射线的波长和晶体中原子的大小及原子间距同数量级的特性来分析晶体结构。
4、蛋白质X射线晶体结构测定程序：
样品制备→蛋白质结晶和晶体生长→衍射数据收集和处理→位相求解→模型建立和修正
5、蛋白质晶体生长的影响因素：
（1）.物理因素：
温度、压力；
（2）.化学因素：
pH值、沉淀剂，过饱和度
（3）.生化因素：
蛋白质纯度、等电点
6、蛋白质结晶方法：
批量结晶法；透析法；液相扩散法；气相扩散法；蛋白质结晶新方法
7、X-Ray晶体衍射方法的优缺点：
优点：
分辨率高，能精确确定生物大分子中各原子的坐标、键长、键角,给出生物大分子的分子结构和构型,确定活性中心的位置和结构
缺点：
只能测定单晶，反映静态结构信息，无法测定溶液中的信息
8、核磁共振（NMR）：
是唯一可以使试样不经受任何破坏的结构分析方法。
推广速度和发展速度都居首位的一种结构分析方法。
9、核磁共振（NuclearMagneticResonance）原理：
就是处于某个静磁场中的自旋核系统受到相应频率的射频磁场作用时,共振吸收某一特定频率的射频辐射的物理过程。
10、核磁共振法中几个常用的参数：
化学位移、耦合常数、NOE（核欧沃豪斯效应）信号强度、谱峰面积、弛豫时间
4、核磁共振的优缺点：
优点：
可以在水溶液或有机相中研究生物大分子结构，研究溶液条件的改变对生物大分子三维结构的影响以及生物大分子内部动力学的特点
缺点：
分辨率不高。
目前，NMR只能用于测定小分子和中型蛋白质的结构
5、NMR法测定蛋白质结构的基本实验步骤：
样品制备，一般应采用液态样品、一维NMR实验、二维NMR实验、三维NMR实验、有的还要做四维NMR实验
第六章.生物信息学在蛋白质工程中的应用
考点：
生物信息学、如何查询（？
）、比对、分析、预测，三大核酸数据库、蛋白质数据库、NCBI（？
）、一次数据库，p188三级结构（从头计算）天然蛋白质能量低。
生物信息学（ppt）：
广义：
生物体系和过程中信息的存贮、传递和表达，包括细胞、组织、器官的生理、病理药理过程的中各种生物信息，是生命科学中的信息科学。
狭义：
生物分子信息的获取、存贮、分析和利用
生物信息学（课本）：
是生物学、计算机科学和信息学相互渗透形成的交叉学科。
数据库：
核酸数据库（核酸序列数据库、基因组数据库）、蛋白质数据库
一次数据库：
数据直接来源于实验获得的原始数据，仅对原始数据进行简单的归类整理和注释。
（Genbank、EMBL、DDBJ和SWISS-PROT、PIR、PDB等）
二次数据库：
针对不同的研究内容和需要在一次数据库、实验数据和理论分析的基础上对相关生物学知识和信息进行进一步分析和整理。
（GDB、TRANSFAC、SCOP）
三大核酸数据库：
Genbank、EMBL、DDBJ
蛋白质数据库：
1.蛋白质序列数据库：
SWISS-PROT、PIR、TrEMB、LUniProt、GenPept
2.蛋白质序列二次数据库：
PROSITE、PRINTS、BLOCKS
3.蛋白质结构数据库：
PDB、MMDB、
4.蛋白质结构二次数据库：
DSSP、HSSP
5.蛋白质结构分类数据库：
SCOP、CATH、PDBsum
6.蛋白质分类数据库：
ProtoMap
比对：
序列比较的一个基本操作就是比对（Alignment），即将两个序列的各个字符（代表核苷酸或者氨基酸残基）按照对应等同或者置换关系进行对比排列，其结果是两个序列共有的排列顺序，这是序列相似程度的一种定性描述
多重序列比对：
多重序列比对研究的是多个序列的共性。
序列的多重比对可用来搜索基因组序列的功能区域，也可用于研究一组蛋白质之间的进化关系。
蛋白质序列分析：
1.序列比对是生物信息学的基础，通过比较两个或多个蛋白质序列的相似区域和保守性位点，确定相互间具有共同功能的序列模式和分子进化关系，进一步分析其结构和功能。
2.把未知结构的蛋白质序列与已知具有三维结构的蛋白质序列进行序列比对，有助于进一步了解该未知结构蛋白质的空间折叠信息
蛋白质结构预测：
蛋白质的生物功能由蛋白质的结构所决定，蛋白质结构预测成为了解蛋白质功能的重要途径，分为二级结构预测（统计方法、基于已有知识的预测方法、混合方法）、空间结构预测（同源建模、折叠之别、从头计算）。
1.二级结构预测：
立体化学方法、图论方法、统计方法、最邻近决策方法、基于规则的专家系统方、法分子动力学方法、人工神经网络方法。
2.空间结构预测：
在空间结构预测方面，比较成功的理论方法是同源模型法。
该方法的依据是：
相似序列的蛋白质倾向于折叠成相似的三维空间结构。
运用同源模型方法可以完成所有蛋白质10-30%的空间结构预测工作。
蛋白质功能预测：
PPT
课本p188三级结构（从头计算）天然蛋白质能量低。
第七章
蛋白质主要的物理化学特性有以下几点：
蛋白质的大小，带电特性，溶解特性，变性与复性，结晶，蛋白质分子表面的特性，分子形状，紫外吸收，颜色反应。
亲和层析（affinitychromatography）原理：
依赖于蛋白质和它的配体（ligand）之间的
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