实验动物 寄生虫检测.docx
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实验动物寄生虫检测
ICS65.020.30
CCSB44
DB11
北京市地方标准
DB11/T1806—2020
代替DB11/T828.2—2011,DB11/T1053.2—2013,DB11/T1460.1—2017,DB11/T1460.2—2017,DB11/T
1460.3—2017,DB11/T1460.4—2018,DB11/T1460.5—2018
实验动物寄生虫检测
Laboratoryanimal——Parasitologicaltesting
2020-12-24发布2021-04-01实施
北京市市场监督管理局发布
目次
前言II
1范围1
2规范性引用文件1
3术语和定义1
4等级分类2
5检测要求2
6检测程序7
7检测方法8
8检测规则11
9结果判定12
10结论与报告12
附录A（规范性）实验鸡的组织滴虫检测13
附录B（规范性）实验鹅的毛滴虫检测14
附录C（规范性）实验鸽的疟原虫检测15
附录D（规范性）实验鱼的寄生虫检测16
参考文献17
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:
标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件代替DB11/T828.2—2011《实验用小型猪第2部分:
寄生虫学等级及监测》、DB11/T1053.2—2013《实验用鱼第2部分：
寄生虫学等级及监测》、DB11/T1460.1—2017《实验动物寄生虫学等级及监测第1部分:
实验用猪》、DB11/T1460.2—2017《实验动物寄生虫学等级及监测第2部分：
实验用牛》、DB11/T1460.3—2017《实验动物寄生虫学等级及监测第3部分:
实验用羊》、DB11/T
1460.4—2018《实验动物寄生虫检测与评价第4部分:
实验用狨猴》、DB11/T1460.5—2018《实验动物寄生虫检测与评价第5部分:
实验用长爪沙鼠》，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：
a）增加了“实验雪貂、实验猫、实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽”寄生虫检测相关内容（见6.2.5、6.2.6、6.2.7、6.2.8）。
本文件由北京市科学技术委员会提岀并归口。
本文件由北京市科学技术委员会组织实施。
本文件起草单位：
中国农业大学、中国食品药品检定研究院、国家卫生健康委科学技术研究所、中国科学院水生生物研究所、中国动物疫病预防控制中心、首都医科大学、浙江省医学科学院、中国医学科学院医学实验动物研究所、北京康蓝生物技术有限公司、北京市实验动物管理办公室、北京实验动物行业协会、北京市标准化研究院、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、北京华阜康生物科技股份有限公司、吉林大学。
本文件主要起草人：
刘贤勇、李冠民、贺争鸣、田克恭、巩薇、陈洪岩、姜洪杰、索勋、李根平、王锡乐、刘文菊、齐静、刘云波、魏强、向志光、刘先菊、黄澜、李长龙、付瑞、岳秉飞、萨晓婴、王吉、杜小燕、陈振文、肖冲、冯育芳、袁宝、胡进平、任文陟、樊子风、宫鹏涛、杨利峰、钟景川、樊晨茹、向碧琪、毕側、王棒堂、李文祥、崔宗斌、孙德明等。
本文件及其所代替文件单历次脚本发布情况为：
——首次发布分别为DB11/T够：
/—-2011、DB11/T1053.2—2013>DB11/T1460.1一2017、DB11/T1460.2—2017>DB11/T1460.8—2"丄7、T）B11/T1460.4—2018、DB11/T1460.5—2018；
——本次为第一次修订。
实验动物寄生虫检测
1范围
本文件规定了实验动物的寄生虫学等级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则、结果判定、结论与报告。
本文件适用于实验小型猪、实验猪、实验牛、实验羊、实验狨猴、实验长爪沙鼠、实验雪貂、实验猫、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鸽、实验鱼（斑马鱼和剑尾鱼）的寄生虫检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
GB/T
NY/T
NY/T
NY/T
SN/T
SN/T
SN/T
SN/T
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
实验动物laboratoryanimal
经人工饲育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。
[来源:
GB14925—2010,3.1]
3.2
普通级实验动物conventional（CV）laboratoryanimal
不携带所规定的人兽共患病病原、动物烈性传染病病原和对科学实验有重大干扰的病原的实验动物。
3.2.1
无特定抗原抗体普通级实验动物specificantigen&antibody-freeconventional（CV）laboratoryanimal
普通級实验动物中未免疫特定的疫苗，且经检测不携带实验要求排除的特定病原微生物抗原抗体的实验动物，称为无特定抗原抗体普通級实验动物。
3.3
无特定病原体级实验动物specificpathogenfree（SPF）laboratoryanimal
除普通級实验动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的实验动物。
3.4
无菌级实验动物germfree（GF）laboratoryanimal
无可检岀的一切生命体的实验动物。
4等级分类
根据对微生物和寄生虫控制的程度，实验动物分为普通级实验动物、无特定病原体級实验动物和无菌级实验动物三个等级。
5检测要求
5.1外观检查
对待检实验动物的精神状态、行为、被毛、天然孔分泌物进行外观检查。
5.2寄生虫检测项目
5.2.1实验猪和实验小型猪各等级寄生虫检测项目按照表L板庆定执行，
表1实验猪和实验小型猪各等级寄生虫检测项目
动物等级
寄生虫
检测要求
普通级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
旋毛虫（Trichinella）
•
猪囊尾蝴（Cysticercus）
•
无特定病原体
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
旋毛虫（Trichinella）
•
猪囊尾蝴（Cysticercus）
•
球虫（Coccidia）
•
小袋纤毛虫（Balantidium）
•
贾第虫（Giardia）
•
阿米巴原虫（Amoeba）
•
隐孢子虫（Cryptosporidium）
•
蠕虫（Helminths）
•
无菌级
任何可检出的生命体
•
注：
表示必检项，要求阴性。
5.2.2实验牛和实验羊各等级寄生虫检测按照表2的规定执行。
表2实验牛和实验羊各等级寄生虫检测项目
动物等级
寄生虫
实验牛检测要求
实验羊检测要求
普通级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
•
棘球蝴（Echinococcus）
•
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
•
无特定病原体级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
•
棘球蝴（Echinococcus）
•
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
•
球虫（Coccidia）
•
•
新抱子虫（Neospora）
•
•
梨形虫（Piroplasma）
•
O
贾第虫（Giardia）
•
•
锥虫（Trypanosome）
•
O
蠕虫（Helminths）
•
•
隐抱子虫（Cryptosporidium）
•
O
无菌级
任何可检出的生命体
•
•
注：
“•”表示必检项，要求阴性；表示需要时检测项目，要求阴性。
5.2.3实验狨猴各等级寄生虫检测项目按照表3的规定执行。
表3实验狨猴各等级寄生虫检测项目
动物等级
寄生虫
检测要求
普通级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
无特定病原体级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
鞭毛虫（Flagellates）
•
蠕虫（Helminths）
•
球虫（Coccidia）
•
疟原虫（Plasmodium）
•
无菌级
任何可检出的生命体
•
注：
表示必检项目，要求阴性。
5.2.4实验长爪沙鼠各等级寄生虫检测项目按照表4的规定执行。
表4实验长爪沙鼠各等级寄生虫检测项目
动物等级
寄生虫
检测要求
普通级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
无特定病原体级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
纤毛虫（Ciliates）
•
鞭毛虫（Flagellates）
•
蠕虫（Helminths）
•
卡氏肺抱子虫（Pneumocystiscarinii）
•
兔脑原虫（Encephalitozooncuniculi）
•
无菌级
任何可检出的生命体
•
注：
“•”表示必检项，要求阴性。
5.2.5实验雪貂各等级寄生虫检测项目按照表5的规定执行。
表5实验雪貂各等级寄生虫检测项目
动物等级
寄生虫
检测要求
普通级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
无特定病原体级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
蠕虫（Helminths）
•
球虫（Coccidia）
•
鞭毛虫（Flagellates）
•
无菌级
任何可检出的生命体
•
注：
表示必检项，要求阴性。
5.2.6实验猫各等级寄生虫检测项目按照表6的规定执行。
表6实验猫各等级寄生虫检测项目
动物等级
寄生虫
检测要求
普通级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
华支睾吸虫（Clonorchissinensis）
•
无特定病原体级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
华支睾吸虫（Clonorchissinensis）
•
纤毛虫（Ciliates）
•
鞭毛虫（Flagellates）
•
蠕虫（Helminths）
•
兔脑原虫（Encephalitozooncunicili）
•
球虫（Coccidia）
•
无菌级
任何可检出的生命体
•
注：
表示必检项，要求阴性。
5.2.7实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽各等级寄生虫检测项目按腰尋］的规定执行。
表7实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽各等级寄生虫检测项目
动物等级
寄生虫
实验鸡
实验鸭’
瑚系鹅
实验鸽
检测要求
检测要求
检测要求
检测要求
普通级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
•
•
•
蠕虫（Helminths）
•
•
•
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
•
•
•
表7实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽各等级寄生虫检测项目（续）
动物等级
寄生虫
实验鸡检测要求
实验鸭检测要求
实验鹅检测要求
实验鸽检测要求
无特定病原体级
体外寄生虫（Ectoparasites）
•
•
•
•
蠕虫（Helminths）
•
•
•
•
弓形虫（Toxoplasma）
•
•
•
•
住白细胞虫（Leucocytozoon）
•
O
•
O
阿米巴原虫（Ameba）
•
O
O
O
隐孢子虫（Cryptosporidium）
•
•
O
O
组织滴虫（Histomonas）
•
O
O
O
球虫（Coccidia）
•
•
•
•
毛滴虫（Trichomonas）
O
O
•
O
疟原虫（Plasmodium）
O
O
O
•
无菌级
任何可检出的生命体
•
•
•
•
注：
表示必检项，要求阴性；表示需要时检测项目，要求阴性。
5.2.8实验鱼各等级寄生虫检测项目按照表8的规定执行。
表8实验鱼各等级寄生虫检测项目
动物等级
寄生虫
检测要求
普通级
微泡子虫（Pseudolomaneurophilia）
•
卵圆鞭毛虫（Piscinoodiniumpillulare）
•
多子小瓜虫（Ichthyophthiriusmultifiliis）
•
头槽绦虫（Bothriocephalidae）
•
无特定病原体级
微抱子虫（Pseudolomaneurophilia）
•
卵圆鞭毛虫（Piscinoodiniumpillulare）
•
多子小瓜虫（Ichthyophthiriusmultifiliis）
•
头槽绦虫（Bothriocephalidae）
•
斜管虫（Chilodonella）
•
车轮虫（Trichodina）
•
杯体虫（Apiosoma）
•
粘泡子虫（Myxozoan）
•
指环虫（Dactylogyrus）
•
绒毛伪毛纟田线虫（Pseudocapillariatomentosa）
•
三代虫（Gyrodactylus）
•
驼形线虫（Carnal1anidae）
•
锚头鲤（Lernaea）
•
无菌级
任何可检出的生命体
•
注：
“•”表示必检项，要求阴性。
6检测程序
6.1实验小型猪、实验猪、实验牛、实验羊、实验狨猴、实验长爪沙鼠、实验雪貂、实验猫、实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽检测程序
6.1.1实验小型猪、实验猪、实验牛、实验羊、实验狨猴、实验长爪沙鼠、实验雪貂、实验猫、实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽检测程序按照图1的规定执行。
图1实验动物寄生虫检测程序
6.1.2麻醉应根据不同动物种类、采集部位决定是否需要麻醉。
需荽麻薛时，应考虑不同种类实验动物的耐受剂量，可采用吸入性麻醉或注射麻醉，麻醉过程中应随时注意实验动物的反应。
实施麻醉人员应经过相应培训并具备相应的能力。
6.1.3釆血方法以及毛发、羽毛或皮屑、新鲜粪便的采样方法参照NY/T541进行。
6.1.4检测结果存疑，需要进一步确诊时，应结合临床症状和前期检测结果，可采集动物组织或特定样本进行进一步检测。
6.2实验鱼检测程序
实验鱼检测程序按照图2的规定执行。
实验鱼的麻醉应方便于检查、采用和满足动物福利伦理的要求。
表9实验猪和实验小型猪寄生虫学检测方法
寄生虫
检测方法
体外寄生虫
GB/T18448.1
旋毛虫
GB/T18642
弓形虫
GB/T18448.2
猪囊尾拗
GB/T18644
球虫
GB/T18647
小袋纤毛虫
GB/T18448.10
贾第虫
GB/T18448.10
阿米巴原虫
GB/T18448.9
隐孢子虫
NY/T1949
蠕虫
GB/T18448.6
7.2实验牛和实验羊寄生虫学检测方法按照表10的规定执行。
表10实验牛和实验羊寄生虫学检测方法
寄生虫
检测方法
体外寄生虫
GB/T18448.1
棘球蝴
NY/T1466
弓形虫
GB/T18448.2
隐抱子虫
NY/T1949
球虫
GB/T18647
梨形虫
SN/T3485
新抱子虫
SN/T3499
贾第虫
GB/T18448.10
锥虫
GB/T23239
蠕虫
GB/T18448.6
7.3实验狭猴寄生虫学检测方法按照表11的规定执行*•
表11实验賊猴寄生虫学检测方法
寄生虫
椅测方法
体外寄生虫
GB/T18448.1
弓形虫
GB/T18448.2
疟原虫
GB/T18448.7
蠕虫
GB/T18448.6
鞭毛虫
GB/T18448.10
球虫
GB/T18647
7.4实验长爪沙鼠寄生虫学检测方法按照表12的规定执行。
表12实验长爪沙鼠寄生虫学检测方法
寄生虫
检测方法
体外寄生虫
GB/T18448.1
弓形虫
GB/T18448.2
兔脑原虫
GB/T18448.3
蠕虫
GB/T18448.6
鞭毛虫和纤毛虫
GB/T18448.10
卡氏肺孢子虫
GB/T18448.4
7.5实验雪貂寄生虫学检测方法按照表13的规定执行。
表13实验雪貂寄生虫学检测方法
寄生虫
检测方法
体外寄生虫
GB/T18448.1
弓形虫
GB/T18448.2
蠕虫
GB/T18448.6
鞭毛虫
GB/T18448.10
球虫
GB/T18647
7.6实验猫寄生虫学检测方法按照表14的规定执行。
表14实验猫寄生虫学检测方法
寄生虫
检测方法
体外寄生虫
GB/T18448.1
华支睾吸虫
SN/T2975
弓形虫
GB/T18448.2
鞭毛虫和纤毛虫
GB,T8448.10
蠕虫
G聴1844f.<
兔脑原虫
GB/T18448*
球虫
GB/T18647
7.7实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽寄生虫检测方法按照表15的规定执行c
表15实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽寄生虫检测方法
寄生虫
检测方法
体外寄生虫
GB/T18448.1
弓形虫
GB/T18448.2
球虫
GB/T18647
表15实验鸡、实验鸭、实验鹅和实验鸽寄生虫检测方法（续）
寄生虫
检测方法
阿米巴原虫
GB/T18448.9
蠕虫
GB/T18448.6
隐孢子虫
NY/T1949
住白细胞虫
SN/T1225
组织滴虫
附录A
毛滴虫
附录B
疟原虫
附录C
7.8实验鱼寄生虫学检测按照附录D的规定执行。
8检测规则
8.1检测频率
每3个月应至少检测1次。
8.2抽样
8.2.1抽样要求
按寄生虫和微生物采样要求联合抽样。
抽样月龄符合表16的要求。
表16实验动物抽样月龄
动物种类
抽样月龄
实验小型猪
36
实验猪
32
实验牛
36
实验羊
A2
实验穢猴
N6
实验长爪沙鼠
32
实验猫
36
实验雪貂
36
实验鸡
N1
实验鸭
31
实验鹅
31
实验鸽
31
实验鱼
应选择3月龄以上的成鱼，必要时同时取饲养环境水样用于检测；应在不同的水环境内随机抽样。
8.2.2抽样方法
抽样方法按照NY/T541的规定执行。
8.2.3抽样数量
实验鱼抽样数量：
同一水环境实验鱼数量少于100尾，则抽样5尾；大于等于100尾，则按5%比例抽取，最大抽样量为30尾。
其他动物抽样数量符合表17的要求。
表17实验动物抽样数量
群体大小（只/头/羽）
抽样数量（只/头/羽）
<100
100〜500
。
10
>500
。
15
8.3送检要求
样品和送检单一同送达具备检测能力的实验室，送检单应写明检品名称、品系、等级、数量及检测项目等内容。
9结果判定
9.1抗体检测
血清样品经间接血凝实验（IndirectHemagglutinationAssay，IHA）、酶联免疫吸附测定（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）或间接免疫荧光（IndirectFluorescenceAssay，IFA）检测，血清抗体阴性判为合格。
9.2虫体和虫卵检查
经检测，未检岀虫体、虫卵，判为合格。
9.3病原体核酸聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction,PGR）检测
经检测，未见阳性结果判为合格。
10结论与报告
10.1结论
按照检测规则，检测指标均合格，依据表1〜表8,判为符合相应等级的实验动物。
按照检测规则，若检测指标有1项（含）以上不合格，依据表1〜表8,判为不符合相应等级的实验动物。
10.2报告
根据检测结果岀具检测报告。
附录A
（规范性）
实验鸡的组织滴虫检测
A.1仪器设备和材料
显微镜，PCR仪，凝胶电泳仪，凝胶成像仪，测序仪，载玻片，盖玻片，生理盐水，15%的甲醛固定液，乙醇，二甲苯，苏木素，盐酸，伊红，中性树脂，石蜡，姬姆萨染液，动物组织基因组提取试剂盒，DNA聚合酶，dNTP，聚合酶缓冲液，琼脂糖等。
A.2检查步骤
A.2.1外观检查
从精神状态、行为、被毛和天然孔分泌物对实验鸡进行外观检查。
A.2.2剖检和病理检查
剖检实验鸡，进行病理学大体观察。
观察肝脏是否肿大，表面是否有黄褐色坏死灶；观察盲肠是否肿胀，肠腔内是否有干酪样物。
A.2.3虫体检查
宜米用以下三种方法：
——取剖检的实验鸡盲肠，除去内容物后取盲肠粘膜表面的刮取物于载玻片上，滴加4CTC的生理盐水稀释，显微镜下观察是否有活动的组织滴虫虫体存在。
——取剖检的实验鸡的肝组织涂片进行姬氏染色，显微镜下观察是否有组织滴虫虫体存在。
——取剖检的实验鸡的肝脏和盲肠组织制作组织切片并进行H.E.染色，显微镜下观察是否有组织滴虫虫体存在。
A.2.4核酸检测
取剖检的实验鸡寐脏或盲肠组织样品，提取基因组DNA,用针对火鸡组织滴虫18S
rRNA基因序列（GenBank:
HG0080Ei）的特异性引物对（5，-GGCGAAAGCATCTATCAAGTGG-3';5'-CTCGTCGGCATAGTTTAAGGTAGG-35）进行PCR检测，扩增产物进行凝胶电泳并测序分析。
A.3检测结果
若有火鸡组织滴虫感染，典型病理变化为肝脏肿大，呈深紫褐色，表面有大小不一的黄褐色坏死灶，坏死灶中央稍有下陷，有的坏死灶周围有岀血带；盲肠外观明显肿大，触之坚硬，呈香肠状，粗细不均，肠腔内有干酪样物充塞，可怀疑为阳性，需通过下列任意二韓方法曷适
——若有火鸡组织滴虫感染，盲肠粘膜刮取物或肝脏抹片在显微镜油镜下可见单个或成簇分布的虫体，大小为6呻〜20呻。
或组织切片中发现虫体，呈不规则圆形或椭圆形，胞质中有囊泡状核。
虫体呈圆形，淡玫瑰色，有细胞质和细胞核，判为阳性。
反之则为阴性。
——若有火鸡组织滴虫感染
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