动物细胞工程试题及详解文档格式.doc

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2、动物细胞培养液的成分：

葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。

3、动物细胞培养液的特点：

液体培养基含动物血清。

4、动物细胞培养需要满足以下条件

（1）充足的营养供给——微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。

（2）适宜的温度：

36.5℃±

0.5℃；

适宜的pH：

7.2～7.4。

（3）无菌、无毒的环境：

培养液应进行无菌处理。

通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。

此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

（4）气体环境：

95%空气+5%CO2。

O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。

5、动物细胞培养的过程：

取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。

2下列关于细胞工程的叙述，错误的是（D）

A.电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合

B.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理

C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体

D.某种植物甲乙两品种的体细胞杂交与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同

A正确诱导原生质体融合的方法有物理法（离心振动电刺激）化学法（聚乙二醇PEG）生物方法（灭活的病毒）.B正确去除植物细胞壁需要纤维素酶和果胶酶，将动物组织分散成单个细胞需要胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间。

C正确小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合既可以无限增殖，又可产生特异性抗体。

D错误，假设甲植物体细胞是2N,乙植物体细胞是2M，甲乙体细胞杂交染色体数目为2N+2M；

而甲乙品种杂交染色体数目是N+M。

3制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括（A）

①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植

A．①②B．①③C．②③D．③④

单克隆抗体的制备过程是人工诱导经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，再经筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，经过培养获得的杂交瘤细胞获得单克隆抗体。

4利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。

下列相关叙述正确的是（D）

A.用纯化的核衣蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体

B.体外培养单个浆细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体

C.将等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞

D.利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者

A错误一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。

从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差；

B错误单克隆抗体是杂交瘤细胞合成并分泌的，杂交瘤细胞是由浆细胞与骨髓瘤细胞融合形成的；

C错误制备单克隆抗体过程中的筛选：

筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。

筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。

因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。

5用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）

A.将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞

B.用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞

C.用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合

D.筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体

动物细胞没有细胞壁，所以不需要纤维素酶去除细胞壁

6某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。

供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。

请回答下列有关动物细胞培养的问题：

（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。

一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量_多___。

（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是血清可以补充合成培养基中缺乏的物质____。

细胞培养应在含5%的CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是_维持培养液pH_______。

（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长__停止___。

药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更___多___。

若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用_胰蛋白酶____消化处理。

（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的__抗生素_______。

（5）已知癌细胞X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入__Y_____，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的__mRNA____或____蛋白质___合成水平的差异，确定Y的药效。

7回答下列有关细胞培养的问题

（1）在动物细胞培养过程中。

当贴壁细胞分裂生长到细胞表面__相互接触____时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的__接触抑制______。

此时，瓶壁上形成的细胞层数是__单层_______。

要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是___胰蛋白酶_____________。

（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现_衰老甚至死亡____现象；

但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成__不死性______细胞，该种细胞的黏着性__降低______，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量___减少_________。

（3）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是_由于死细胞膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色_____。

（4）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到_中____期的细胞用显微镜进行观察。

（5）在细胞培养过程中，通常在__超低温______条件下保存细胞。

因为在这种条件下，细胞中__酶_____的活性降低，细胞_新陈代谢_________的速率降低。

（6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作__抗原______进行攻击。

8如图所示为单克隆抗体制备过程示意图。

（1）淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“融合”在一起，说明细胞膜___具有一定的流动性_______。

此过程，常用_聚乙二醇____作为诱导剂，杂交瘤细胞繁殖进行的是有丝分裂。

该细胞的特点（遗传性状）是___既能大量增殖又能产生特异性抗体__。

（2）筛选出杂交瘤细胞的方法是__培养液中加入氨基蝶呤，收集增殖的细胞______________。

（3）杂交瘤细胞的体外培养与植物组织培养的培养基相比有何主要不同？

_液体培养基含有葡萄糖和动物血清___。

（4）单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原（病原体或癌变细胞等）并与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为“生物导弹”，这是利用了___抗原与抗体之间结合的高度特异性__。

（5）在单克隆抗体制备过程中，还应用了细胞工程中的_动物细胞融合________和__动物细胞培养______两大技术。

9现有甲、乙两种可能有一定毒性的化学物质，实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性并比较二者毒性的强弱。

请你以一个研究人员的身份参与此项研究，完成下列有关问题：

（1）实验原理：

__有毒物质能诱导细胞产生染色体变异_______。

根据这种变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。

（2）材料用具：

活的小白鼠胚胎、胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、适宜浓度的化学物质甲溶液、适宜浓度的化学物质乙溶液、蒸馏水、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、恒温箱、载玻片、盖玻片、显微镜、小白鼠正常有丝分裂各时期的高倍显微照片。

（3）实验步骤：

Ⅰ．制备细胞悬浮液。

把活的小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入胰蛋白酶液处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬浮液。

Ⅱ．进行细胞培养。

①．取A、B、C3个洁净的培养瓶，_消毒灭菌加入等量的细胞悬浮液_____________；

②．向A、B两个培养瓶中分别加入等量的甲、乙溶液，C瓶中加入等量的蒸馏水，摇匀；

③．把3个培养瓶放在37℃的恒温箱中培养。

Ⅲ．制作临时装片。

①．当细胞增殖到大约8代左右时，同时从恒温箱中取出3个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，加入动物细胞固定液，迅速杀死细胞并固定细胞分裂相；

②．静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬浮液，滴在与培养瓶有相同编号的载玻片的中央，_用适宜浓度龙胆紫进行染色___，3～5min后，盖上盖玻片。

Ⅳ．镜检和统计。

把临时装片放在显微镜下，先用低倍镜后用高倍镜，寻找处于_有丝分裂中_____期的细胞，并与__C_______进行对比，统计并计算变异的细胞占该期细胞总数的百分数（Q值）。

（4）结果分析与结论：

①．经研究人员实验得知，A、B、C三个培养瓶的Q值依次为：

QA=1.3%，QB=12.5%，QC=0.1%，由此可知该实验的结论是____甲乙都是有毒性的且乙的毒性大于甲______。

②．在实验中，C培养瓶起___对照_____作用，C瓶的Q值说明_动物细胞在正常培养状态下染色体变异频率非常低__。

10下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是__动物细胞培养________。

（2）图甲中①注射病原入小鼠体内后，要经过___吞噬细胞_______细胞处理后，才能被免疫细胞识别。

②过程常在___灭火的病毒________诱导下完成，④过程与体外培养相比，其优点是__不需特定的培养基，不需严格的外界环境条件___________。

（3）单克隆抗体能定向攻击癌细胞，主要是利用其_特异性___________。

（4）图乙过程常选择_____MⅡ中______期的卵母细胞做受体细胞，原因是__MⅡ期卵母细胞体积大，易操作，含有促使细胞核全能性表达的物质和营养添加________。

若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗？

_____不是________。

原因是_卵细胞细胞质的遗传物质也能控制某些性状___________。

（5）图乙过程的技术具有多种用途，但是不能___D________。

A．有选择地繁殖某一性别的家畜B．繁殖家畜中的优良个体C．用于保存物种D．改变动物的核基因

（6）在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是____C______。

A．卵细胞大，便于操作 

B．卵细胞含有的营养物质多

C．卵细胞细胞质可使体细胞核全能性得到表达 

D．重组细胞才具有全能性