体外培育牛黄中胆酸去氧胆酸含量检验方法验证方案DOCWord文件下载.docx
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建立体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量的高效液相色谱法检测的方法验证
三、范围
四、职责
1、验证委员会
1.1负责验证管理的日常工作及公司内验证工作总的调度、协调及总结工作;
1.2负责验证任务的下达及验证小组的确定;
1.3负责验证计划和验证方案审核和批准工作;
1.4负责验证报告的评价工作;
1.5负责验证周期的确定工作;
1.6负责发放验证证书;
2、技术质量管理部职责
2.1负责对验证方案和报告的可行性的审核;
3、验证小组职责
3.1负责验证方案起草,并对批准后的验证方案组织实施;
3.2负责验证全过程管理并收集、整理验证数椐;
3.3负责总结、写出验证报告;
3.4负责验证实施过程中的检测,并出具检测报告;
3.5验证小组人员
小组职务
姓名
所在部门
职务
组长
组员
五、验证内容
1、验证依据、验证标准:
《中华人民共和国药典》2015年版
2、验证判断标准:
准确度:
6份样品的平均回收率限度达到:
95-102%
精密度:
6份对照品峰面积的重复性(RSD)达到1.5%
专属性:
将样品分别置于高温、高湿、酸碱水解、氧化降解、强光照射进行加速破坏,再测定其含量
检测限:
将检测限数据使用含量相近的样品进行验证,附图谱及结果
定量限:
将定量限数据使用含量相近的样品进行验证,附图谱及结果,应符合准确度、精密度要求。
线性:
应有回归方程、相关系数、线性图
范围:
对80%-120%供试品溶液浓度的供试液测得的含量应符合准确度、精密度要求。
耐用性:
12小时内分别测得的样品含量的RSD应达到1.5%
3、人员
查阅人员档案,确认已经对有关操作人员进行了相关培训,见下表1:
(一)人员培训确认记录
人员
培训内容
检查结果
检验人员
《中华人民共和国药典》2015年版、《体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案》
(二)人员档案
姓名
学历
职位
入厂时间
培训
结论
□是□否
□符合要求□不符合要求
检查人:
日期:
确认人:
4、验证用文件
文件编号
文件名称
存放位置
体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案
5、实验室环境
项目
可接受标准
结果
结论
温度
18~26℃
□符合要求□不符合要求
湿度
45~65%
其他
干净、整洁
6、实验试剂及仪器:
试剂
批号:
生产厂家:
级别
胆酸对照品
去氧胆酸对照品
甲醇
甲酸
乙腈
盐酸
氢氧化钠
双氧水
仪器
型号
编号
校验有效期
电子天平
高效液相色谱仪
电热鼓风干燥箱
7、实验样品:
批号:
生产厂家
8、验证内容及结果
8.1对照品溶液的制备
取对胆酸、去氧胆酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成含胆酸240ug/ml和去氧胆酸80ug/ml的混合溶液,即得。
8.2供试品溶液制备
取样品适量,研细,取约50mg,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称重,超声处理30min,用甲醇补足减失的重量,摇匀,0.45um滤膜滤过即得。
8.3色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:
WondasilC18(4.6mm*250mm,5um);
柱温:
25℃;
以0.2%甲酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~7min,5%B;
7~15min,5%B→80%B;
15~20min,80%B→90%B;
20~23min90%B→96%B));
流速:
1.0ml/min;
用蒸发光散射检测器;
氮气流速:
2.3ml/min,漂移管温度110℃。
样品中各色谱峰分离度大于1.5,理论板数按胆酸峰计算应不低于5000。
8.4线性关系考察
精密量取对照品溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml,分别置于10ml容量瓶中,用甲醇定容到刻度,得到胆酸浓度分别为48、96、144、192、240ug/ml;
去氧胆酸浓度分别为16、32、48、64、80ug/ml。
精密吸取各级对照品溶液10ul注入液相色谱仪测定峰面积。
以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。
回归方程:
相关系数
胆酸
去氧胆酸
结论:
8.5供试品测定法
取供试品溶液10ul注入液相色谱仪,依法测定峰面积,从标准曲线上读出供试品溶液中胆酸、去氧胆酸的含量,计算,即得。
8.6、精密度
取同对照品溶液10ul连续进样6次,测定峰面积,计算胆酸和去氧胆酸峰面积的RSD
胆酸:
峰面积
RSD
1
2
3
4
5
6
去氧胆酸:
8.7耐用性
取供试品10ul,分别于0、2、4、6、8、10、12h进样,依法测定峰面积,计算得到胆酸和去氧胆酸的平均含量、RSD
供试品称样量:
时间(h)
溶液浓度(ug/ml)
稀释倍数
测定结果
8
10
12
8.8准确度
取已知胆酸和去氧胆酸含量的样品溶液6份,每份约25mg。
精密称定,置于锥形瓶中,分别精密加入对照品溶液10ml,再精密加入甲醇40ml,称重,超声处理30min,甲醇补足减失的重量,滤过,分别取10ul注入液相色谱仪,依法测定,计算胆酸和去氧胆酸的平均回收率(n=6)
胆酸峰面积
胆酸浓度(ug/ml)
去氧胆酸峰面积
去氧胆酸浓度(ug/ml)
胆酸含量
胆酸回收率
去氧胆酸含量
去氧胆酸回收率
胆酸平均回收率:
去氧胆酸平均回收率:
8.9检测限与定量限
将对照品溶液稀释进样,以信噪比3:
1时的进样量为检测限,测出胆酸和去氧胆酸的检测限;
以信噪比10:
1时的进样量为定量限,测处胆酸和去氧胆酸的定量限。
并用含量相近的样品进行验证检测限与定量限,其中定量限要包括准确度(8.7)和精密度(8.5)实验。
检测限图谱:
检测限相似浓度样品图谱:
定量限图谱:
定量限相浓度样品图谱:
定量限相浓度样品准确度:
定量限相浓度样品精密度(取样品溶液10ul):
8.10范围
取样品适量,研细,分别取约40mg、60mg,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称重,超声处理30min,用甲醇补足减失的重量,摇匀,0.45um滤膜滤过,即得80%、120%浓度的供试品,共制得供试品6份。
按照8.5进行测定,应符合准确度、精密度要求。
80%浓度供试品准确度:
80%浓度供试品精密度(取供试品10ul)
20%浓度供试品准确度:
20%浓度供试品精密度(取供试品10ul)
8.11专属性
8.11.1酸降解试验
称取研细样品50mg于50ml容量瓶中,加0.1mol/l的盐酸2ml溶解,超声4小时后用甲醇定容,再超声处理30min,摇匀,0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.2碱降解试验
称取研细样品50m于50ml容量瓶中,加0.1mol/l的氢氧化钠2ml溶解,超声4小时后用甲醇定容,再超声处理30min,摇匀,0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.3氧化降解试验
称取研细样品50mg于50ml容量瓶中,加5%的双氧水2ml溶解,超声4小时后用甲醇定容,再超声处理30min,摇匀,0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.4高温降价
将样品存放在130℃烘箱中考察8个小时,取约50mg,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇适量50ml,称重,超声处理30min,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.5高湿降价
将样品适量存放在相对湿度92.5%,25℃(取干燥器,放入硝酸钾饱和溶液),考察5天,取约50mg,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称重,超声处理30min,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
8.11.6光降解试验
将样品适量置于4500LX照度下照射15天,取约50mg,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇适量50ml,称重,超声处理30min,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤0.45um滤膜滤过得供试品按照8.5测定。
条件
称重(mg)
酸降解
碱降解
氧化降解
高温降解
高湿降解
光降解
六、验证实施
1、验证开始前,应组织验证小组成员进行培训,培训内容主要为:
《体外培育牛黄中胆酸、去氧胆酸含量检验方法验证方案》。
人员培训情况见附件1:
人员培训记录。
2、验证过程中,如果需要修改或完善验证方案,应报验证委员会审批,审批记录见附件2:
验证方案修改申请及批准书
七、验证进度安排
1、验证进度安排:
2016年月日至2016年月日
八、偏差处理及报告汇总
所有偏差的纠正,必需得到QA的批准。
收集所有的偏差报告,对偏差报告进行汇总,在批准最终验证报告之前,所有偏差应得到QA的批准。
偏差处理情况见附件3:
偏差处理记录
偏差报告汇总见附件4:
偏差报告汇总表
九、验证结果评定与结论
1、验证小组负责收集各项验证、试验结果记录,根据验证、试验结果起草验证报告,验证报告见:
2、验证委员会对验证报告进行综合评审,做出验证结论。
如果验证通过,则发放验证证书,见附件5:
验证证书。
十、附件
附件1:
人员培训记录
附件2:
附件3:
附件4:
附件5:
验证证书
附件1:
培训时间
培训讲师
培训负责人
培训人员签名
培训效果评价
□通过
□不通过
不通过处理
评价人
日期
验证方案名称
验证方案编号
修改内容
修改原因及依据
修改后方案
起草人:
验证小组组长:
年月日
验证委员会审批
验证委员会:
偏差编号
解决日期
偏差名称
偏差描述
纠正办法
偏差重要性
评价
记录人
是否关键偏差
(是/否)
检查人
(签名/日期)
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
名称:
_________________
上述检验方法已按验证方案进行验证,各项验证结果符合标准要求,批准投入使用。
验证报告名称:
_______________________________
验证报告编号:
验证完成日期:
有 效 期:
验证委员会
备注:
1.检验设备应当在当前验证条件下使用,使用条件发生变更,应报验证委员会审核,必要时重新验证。
2.检验设备应按批准的标准操作、维护保养程序进行操作、维护和保养。