高效液相色谱仪验证方案Word格式文档下载.docx
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1．概述
2．验证目的
3．验证依据及判断标准
4．验证工作小组
5.相关文件
6．人员培训
7．安装确认
8．运行确认
9．性能确认
10．偏差记录
11．结论
12.
再验证
1.概述
高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱法。
注入供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
岛津LC-20AT型高效液相色谱仪是根据质量控制的目的和要求，结合目前仪器使用的情况，在调研的基础上，公司于2015年2月购置的精密仪器，其生产厂为岛津（中国）有限公司，由输液泵、检测器、自动进样器、柱温箱组成。
应用软件为Labsolutions工作站。
2.验证目的
通过对岛津LC-20AT高效液相色谱仪的安装、运行、性能确认，确认新购进岛津LC-20AT高效液相色谱仪是否符合设计规范要求，是否能达到该仪器所设置的性能指标，是否符合产品检验需求。
3.验证依据及判断标准
3.1验证依据
3.1.1《药品GMP指南》2010年版
3.1.2国家标准GB/T26792-2011
3.1.3《岛津LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》
3.1.4《中国药典》2010年版二部附录
3.2验证评判标准
3.2.1安装环境确认判断标准
确认安装符合《岛津LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》要求和公司用户需求。
3.2.2运行确认判断标准
安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。
3.2.3性能确认判断标准
使用样品检测符合《中国药典》2010年版二部附录要求、国家标准和岛津LC-20AT型高效液相色谱仪性能指标。
4.验证工作小组
姓名
职务
部门
职责与分工
王秋菊
组长
质量保证部
全面组织确认工作，负责小组的协调工作。
牛兆杰
成员
起草确认方案，实施确认，确认资料的归档管理，会签确认报告。
孙妹
起草确认方案，会签确认报告。
徐智
工程设备部
协助确认，会签确认报告。
文件名称
文件编号
备注
高效液相色谱法检验操作规程
岛津高效液相色谱仪操作、维护规程
6.人员培训确认
方案实施人员应接受相关培训，确保正确实施本方案。
培训内容
被培训人
培训人
日期
7.安装确认
7.1基本资料检查
项目
结果
存放地
齐备
缺失
使用说明书
设备的合格证书
装箱单
保修卡
检查人：
复核人：
日期：
部件
设备型号
设备编号
结论
应为
实为
输液泵
自动进样器
柱温箱
检测器
7.2公用设施确认
设计要求
实际情况
电压
220V±
22V
频率
50Hz±
0.5Hz
电源适配
三孔插座、接地良好
7.3硬件环境与安装确认
项目
结论
仪器安装于精密仪器室
室内应避免易燃易爆和强腐蚀性气体及强烈的震动、电磁干扰和空气对流等
安放的工作台应水平
环境温度：
15℃～35℃
环境湿度：
35%～75%
外表光洁平整、字迹清晰、色泽均匀，不应有划伤、露底、裂纹、起泡等现象。
各调节旋钮、按键、开关等工作正常，无松动；
指示、显示清晰完整
检测器、输液泵、自动进样器、柱温箱、计算机、打印机和电源之间线路连接正确
检测器、输液泵、自动进样器、柱温箱等管路连接正确
7.4软件配置确认
打开电源开关，启动WindowsXP，电脑开机正常
打开高效液相色谱仪各部件电源开关，各部件面板显示正常
在桌面上双击LCsolutionLite图标，进入软件操作系统，启动正常
打开检测器，有信号出现
单击LC所对应的分析图标，听见LC发出“哔”的声音，表示工作站与LC联机正常
8.运行确认
8.1软件运行确认的内容
双击LCsolutionLite图标，单击LC所对应的分析图标，进入软件操作系统，设定仪器流速为ml/min，柱温为℃，波长nm，分析时间min，点击“下载”，检查是否按设定运行。
重新设定仪器流速为ml/min，柱温为℃，波长nm，分析时间min，及批处理等，点击“下载”，检查是否按设定运行。
在再分析下处理色谱图，手动积分、参数调整等设置变化后的图谱显示是否正常。
8.2硬件运行确认内容
8.2.1工具
名称
型号/编号
校验期/有效期
秒表
电子天平
数字探针温度计
8.2.2流量确认
先将准备好的5ml容量瓶在电子天平上精密称定（W1），以水为流动相，设定泵A流量为0.5ml/min，泵B流量为0ml/min，待流速稳定后，用秒表计时10min，将流出的流动相用容量瓶接收，计时结束后将容量瓶进行第二次称重（W2），（W2-W1）即为接收到的水重量，折算出体积即为（W2-W1）/ρ，流量即为流出体积/时间。
同法测定泵B，设置流量5.0ml/min，计时为1min，每个流量测定6次，计算6次流量及流量的SD%与RSD%值，并计算流量输出误差及稳定性。
SS流量输出误差=
流量平均值-设定值
×
100%
流量设定值
SR流量稳定性=
流量最大值-最小值
流量平均值
流速（ml/min）
重量（g）
0.5
W1
W2
5.0
设定流速
（ml/min）
测定流量（ml/min）
SD%
（≤5%）
RSD%
（≤0.5%）
SS
（±
3%）
SR
1.5%）
1
2
3
4
5
6
8.2.3柱温的准确性与稳定性确认
将数字探针温度计固定在色谱柱恒温箱放置色谱柱处，选择室温加10℃和最高可控温度的90%两点进行测量。
按温度从低到高顺序升温，当温度显示值稳定后，每隔5min记录一次温度计显示温度，共七次。
平均值与设定值之差为该温度下的设定值误差（ΔT），七次中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。
设定温度
（℃）
测定温度（℃）
（≤1.0%）
ΔT
2）
TC
（≤1.0）
7
8.2.4检测器波长的确认
紫外波长标准空白溶液：
0.05mol/L硫酸溶液
紫外波长标准溶液：
将重铬酸钾放在110℃烘箱内烘约2小时至恒重，取出后于干燥器内冷却半小时，准确称取0.0600g，放入1000ml容量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液溶解并定容，即得。
打开检测器和工作站，开机预热稳定后，选取合适带宽，用1ml注射器向检测池内注入空白溶液（充满检测池），待检测器示数稳定后，在（235±
5）nm、（257±
5）nm、（313±
5）nm、（350±
5）nm的各波长下均将检测器示数归零。
之后再用1ml注射器向检测池内注入标准溶液（充满检测池）至示数稳定，例如检定257nm时，从252nm开始到262nm。
每0.5min改变1nm，得到最高（或最低）值对应的波长与标准溶液特征波长示值之差，即为波长示值误差。
特征吸收波长
测定波长
波长示值误差（±
2nm）
235nm
257nm
313nm
350nm
8.2.5基线噪音和漂移的确认
选用阻尼管（2000×
0.12nm）代替柱子，以正己烷-正戊醇（997:
3）为流动相，流速为2.0ml/min，波长254nm，开机预热，待稳定后记录基线65min，测得3min至23min内基线波动幅度作为基线噪音，用检测器自身的物理量（mAU）作单位表示，基线漂移用1小时内基线偏离原点的值（mAU/h）作单位表示。
测定结果
可接受标准
基线噪音
≤0.1mAU
基线漂移
≤0.5mAU/h
8.2.6前后进样残留量的确认
标准溶液：
0.0025mg/ml维生素D3溶液
空白溶液：
流动相
3）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长为254mn，进样量100μl，按下列样品进样。
空白/标准溶液
标准溶液
空白溶液
计算结果
峰面积
≤0.2%
峰高
≤0.4%
9.性能确认
9.1重现性确认
使用一根阻尼管（2000×
3）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长254nm，进样量100μl，待柱子充分平衡且检测器基线稳定，噪音和基线符合规定要求后，取0.0025mg/ml维生素D3溶液，连续进样6次，计算6针峰高与峰面积的重现性，即RSD%值。
RSD%（≤1.5%）
9.2线性确认
3）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长254nm，进样量100μl，待柱子充分平衡且检测器基线稳定，噪音和基线符合规定要求后，进维生素D3溶液0.0015mg/ml、0.0020mg/ml、0.0025mg/ml、0.0030mg/ml、0.0035mg/ml，每个样品进样1次，求各浓度样品的响应因子，计算响应因子的RSD%值及所做回归曲线的相关系数。
浓度mg/ml
0.0015
0.0020
0.0025
0.0030
0.0035
—
响应因子
RSD%≤5.0%
回归曲线
R＞0.9990
10.偏差记录
记录在验证过程中发现的偏差事项。
偏差描述
整改措施
记录人
11.结论：
12.再验证
12.1正常情况下验证周期为五年。
12.2高效液相色谱仪搬动或大修后需要再验证。
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