培养基适用性检查报告Word格式文档下载.docx

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接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或琼脂斜面培养基中，33℃培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂斜面培养基中，26℃培养48小时。

上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液。

接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，26℃培养7天，加入4ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，用管口带有薄的无菌棉花吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；

若保存在2~8℃，可在24小时内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存期内使用。

3.1.3.适应性检查

3.1.3.1.细菌计数用培养基适应性检查

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml（50～100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置33℃培养48小时，计数。

用被检培养基和对照培养基（若无对照培养基可用其他厂家生产的培养基）按上述方法进行试验，并记录。

试验结果报告见表1。

检测日期

报告日期

被检培养基名称

生产厂家

批号

对照培养基名称

菌落数：

单位（cfu）

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

1

2

平均

被检培养基

对照培养基

平均菌落数比值

菌落形态大小

结果判定

备注

表1细菌计数用培养基适用性检查

检验人：

复核人：

3.1.3.1.霉菌及酵母菌计数用培养基适应性检查

取白色念珠菌、黑曲霉各1ml（50～100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置26℃培养72小时，计数。

3.1.4.结果判定

若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，（或与其他厂家生产培养基上菌落平均数相互比值不小于70%），且菌落形态大小与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。

试验结果报告见表2。

表2霉菌及酵母菌计数用培养基适用性检查

白色念珠菌

黑曲霉

3.2.控制菌（大肠埃希菌）培养基的适用性检查

3.2.1.菌种：

3.2.2.菌液制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，33℃培养24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10~100cfu的菌悬液。

3.2.3.适用性检查

控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。

大肠埃希菌培养基的检测项目及所用菌株见表3。

表3大肠埃希菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查

培养基

特性

试验菌株

胆盐乳糖培养基（BL）

促生长能力

抑制能力

4-甲基伞形酮葡萄苷酸培养基（MUG）

促生长能力+指示能力

曙红亚甲基蓝琼脂培养基（EMB）或麦康凯琼脂培养基（MacC）

⑴胆盐乳糖培养基（液体培养基促生长能力检查）

分别接种1ml（不大于100cfu）的大肠埃希菌于100ml胆盐乳糖被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中，33℃培养18小时，与对照培养基管（或与其他厂家生产培养基）比较，被检培养基管大肠埃希菌应生长良好。

⑵胆盐乳糖培养基（培养基抑制能力检查）

接种3ml（不少于100cfu）的金黄色葡萄球菌于100ml胆盐乳糖被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中，33℃培养24小时，金黄色葡萄球菌不得生长。

⑶4-甲基伞形酮葡萄苷酸培养基（液体培养基促生长能力、指示能力检查）

分别接种0.2ml（不大于100cfu）的大肠埃希菌至5mlMUG被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）的试管内，33℃培养，于5小时、24小时在366nm紫外光下观察，被检培养基应与对照培养基管（或与其他厂家生产培养基）大肠埃希菌生长情况一致，并呈现荧光。

观察后，分别沿被检培养基与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）的管壁加入数滴靛基质试液，液面均应呈玫瑰红色。

⑷曙红亚甲蓝琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）

取大肠埃希菌各0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布于曙红亚甲蓝琼脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上，33℃培养18小时，被检培养基上大肠埃希菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。

在曙红亚甲蓝琼脂培养基上，大肠埃希菌的菌落特征：

紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽。

⑸麦康凯琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）

取大肠埃希菌各0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布于麦康凯琼脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上，33℃培养18小时，被检培养基上大肠埃希菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。

在麦康凯琼脂培养基上，大肠埃希菌的菌落特征：

鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。

表4大肠埃希菌检查用培养基适用性检查

培养基名称

胆盐乳糖培养基

培养温度

培养时间

被检培养基厂家

生长情况

对照培养基厂家

MUG

促生长能力、指示能力

5小时观察

24小时观察

靛基质指示

曙红亚甲蓝琼脂培养基

菌落大小

菌落形态

麦康凯琼脂培养基

3.3.控制菌（乙型副伤寒沙门菌）培养基的适用性检查

3.3.1.菌种：

乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094]

3.3.2.菌液制备

接种乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，33℃培养24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10~100cfu的菌悬液。

3.3.3.适用性检查

沙门菌培养基的检测项目及所用菌株见表5。

表5沙门菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查

营养肉汤培养基

乙型副伤寒沙门菌

四硫磺酸钠亮绿培养基

胆盐硫乳琼脂培养基或沙门、志贺菌属琼脂培养基

曙红亚甲基蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基

三糖铁琼脂培养基

指示能力

⑴营养肉汤培养基（液体培养基促生长能力检查）

分别接种1ml（不大于100cfu）的乙型副伤寒沙门菌于200ml营养肉汤被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中，33℃培养18小时，与对照培养基管（或与其他厂家生产培养基）比较，被检培养基管沙门菌应生长良好。

⑵四硫磺酸钠亮绿培养基（液体培养基促生长能力检查）

分别接种1ml（不大于100cfu）的乙型副伤寒沙门菌于10ml四硫磺酸钠亮绿被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中，33℃培养18小时，与对照培养基管（或与其他厂家生产培养基）比较，被检培养基管乙型副伤寒沙门菌应生长良好。

⑶四硫磺酸钠亮绿培养基（培养基抑制能力检查）

接种3ml（不少于100cfu）的金黄色葡萄球菌于100ml胆盐乳糖培养基被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中，33℃培养24小时，金黄色葡萄球菌不得生长。

⑷胆盐硫乳琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）

取乙型副伤寒沙门菌各0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布于胆盐硫乳琼脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上，33℃培养18小时，被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。

在胆盐硫乳琼脂培养基上，乙型副伤寒沙门菌的菌落特征：

无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色。

⑸沙门、志贺琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）

取乙型副伤寒沙门菌各0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布于沙门、志贺琼脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上，33℃培养18小时，被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。

在沙门、志贺琼脂培养基上，乙型副伤寒沙门菌的菌落特征：

无色至淡红色，半透明或不透明，菌落中心有时带黑褐色。

⑹曙红亚甲蓝琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）

取乙型副伤寒沙门菌各0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布于曙红亚甲蓝琼脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上，33℃培养18小时，被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。

在曙红亚甲蓝琼脂培养基上，乙型副伤寒沙门的菌落特征：

无色至浅橙色，透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落。

⑺麦康凯琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）

取乙型副伤寒沙门菌各0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布于麦康凯琼脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上，33℃培养18小时，被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。

在麦康凯琼脂培养基上，乙型副伤寒沙门的菌落特征：

无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。

⑻三糖铁琼脂培养基（固体培养基指示能力检查）

取乙型副伤寒沙门菌各0.1ml（不大于100cfu）分别涂布于三糖铁被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，33℃培养18小时，被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。

在三糖铁琼脂培养基斜面见红色、底层见黄色；

或斜面黄色、底层黑色。

表6乙型副伤寒沙门菌检查用培养基适用性检查

胆盐硫乳琼脂培养基

沙门、志贺菌属琼脂培养基