Selected高效液相色谱仪确认方案docWord文档格式.docx
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设定范围
步进
初始值
备注
Method画面
FLOW
流量
0-5.000(ml/min)
0.001
参数画面
P.MAX
压力上限值
1.0-37.8(Mpa)
0.1
9.8
10-385(Agf/cm2)
1
100
142-5477(Psi)
1422
10-378(bar)
98
P.MIN
压力下限值
0-34.3(Mpa)
0-350(Agf/cm2)
0.0
0-4979(Psi)
0-343(bar)
PORT
使用的流动相通道的选择
1-4
1:
流动相通道A
2:
流动相通道B
3:
流动相通道C
4:
流动相通道D
DEGAS
脱气装置ON/OFF控制
O:
OFF
I:
ON
[GRAD.方式]
A.CONC
A液浓度(%)
0-100.0(%)
A.CONC不能在TimProgram上使用
B.CONC
B液浓度(%)
C.CONC
C液浓度(%)
D.CONC
D液浓度(%)
B.CURV
B液的梯度曲线
-10~10
C.CURV
C液的梯度曲线
D.CURV
D液的梯度曲线
2.3.2柱温箱和外围设备
设定柱温箱和外围设备的参数时,请参照以下的一览表:
OVENT
柱温箱温度
0(0为OFF)
4-60℃
40
T.MAX
柱温箱温度上限值
5-65℃
65
EVENT
EVENT1、2继电器输出的ON/OFF
0、1、2、12
0:
EVENT1、2都为OFF
仅EVENT1为ON
仅EVENT2为ON
12:
EVENT1、2都为ON
EVENT3
EVENT3继电器输出的ON/OFF
仅限选择板设定时
EVENT4
EVENT4继电器输出的ON/OFF
EVENT5
EVENT5继电器输出的ON/OFF
SMPLE.C
试样冷却器调温
仅限LC-20BBC
2.3.3UV-VIS检测器
设定UV-VIS检测器的参数时,请参照以下的一览表:
WAVE
波长1
190-600(nm)
254
注意:
DUAL=1时,必须使用190≤WAVE、WAVE2≤370或371≤WAVE、WAVE≤600。
不能进行WAVE=190、WAVE2=600等设定
WAVE2
波长2
LAMP
灯
(ON/OFF)
0、1
DUAL
2波长方式的设定
SINGLE
AUXRNG1
AUX量程1
1~6
3
1:
0.5(AU/V)
2:
1(AU/V)
3:
2(AU/V)
4:
4(AU/V)
5:
1.25(AU/V)
6:
2.5(AU/V)
RESP
响应
1~10
4
POL
极性
-1、1
-1:
-
+
SVLVL
溶剂再循环阀切换水平值
0~1
0.0001
0.0000
溶剂再循环阀硬连接时显示。
CELL.T
池调温设定
0、1、2
LOW(40)
HIGH(50)
为确认LC-20BBAHT高效液相色谱仪检测数据准确可靠,性能稳定,特制订本确认方案,对LC-20BBAHT高效液相色谱仪进行确认。
本方案适用于LC-20BBAHT高效液相色谱仪的运行和性能确认。
成员
人员
职责
验证专员
负责对现场监控,协助编制验证方案、验证报告,对验证结果进行收集并交验证小组编写验证报告;
监督验证过程按验证方案执行
QC人员
负责确认用对照品、样品及其它消耗性备品的准备,负责备品、备件的保存,负责设备仪器的操作,负责记录各种测试结果。
负责收集各项确认、试验记录,负责起草仪器使用、维护保养的标准操作规程。
QC经理
负责组织确认方案和确认报告的起草,方案经批准后组织实施培训,对确认结果进行分析评价。
QA经理
负责验证方案和报告的审核,负责对验证过程实施监督,负责对偏差作出处理意见
质量部经理
审核批准确认方案、报告,对确认偏差进行分析并审核批准解决方案。
对最终确认结果进行评价。
验证小组
审核、批准确认方案,确认报告。
为编写方案的人员提供指南,为执行方案提供时间表。
包括:
必须人员的大概数量,所要求的时间长度,如何进行分析等。
审阅和检验必要的标准操作程序。
评估所有的测试结果,对确认偏差进行分析及提出解决方案,并组织施。
《中国药典》20BB年版二部
《中华人民共和国国家计量检定规程液相色谱仪(JJG705-20BB)》
《高效液相色谱法标准操作规程》
《高效液相色谱仪使用维护规程》
《高效液相色谱柱使用维护规程》
《注射用低分子量肝素钙标准操作规程》
《岛津LC-20BBAHT高效液相色谱仪操作说明书》
《文件检查记录》见附件一
验证前对验证过程中涉及到的仪器仪表等检验仪器进行确认,保证其在有效期内。
《仪器、仪表校验》见附件二
运行确认(OQ):
从20BB年02月01日到20BB年02月28日
性能确认(PQ):
从20BB年04月01日到20BB年04月30日
9.1运行确认:
9.1.1准备:
●用0.22μm滤膜滤过纯化水500ml。
●将管路滤头都放在已过滤的纯化水中,查看废液收集瓶有是否有足够容量。
●查看电源是否通电。
●仪器网络、管路是否联接好。
9.1.2开机确认:
●自检:
打开HPLC电源开关,仪器进入自检程序,自检通过标明仪器的各部件正常。
●紫外检测器与工作站联接:
打开计算机,当仪器自检通过后,打开LCsolution工作站,打开紫外通道,仪器会发出一声“滴”响声,工作站界面显示绿色Ready字样,表明工作站与主机联接正常。
●示差检测器与工作站联接:
打开示差检测器及连接器,打开工作站示差通道,工作站界面显示绿色Ready字样时,表明示差检测器与工作站联接正常。
●打印机与工作站联接:
打开工作站中任意一份数据,添加到报告模板中,点击打印,查看打印机是否能正常打印数据报告。
●紫外工作站对仪器的控制:
点击排气、清洗程序按钮,查看仪器是否能按照设定程序进行排气、清洗管路;
点击柱温箱控制按钮,查看柱温箱温度显示是否能正常升温;
点击泵控制按钮,查看泵是否能正常开启;
点击基线归零按钮,查看基线是否能归零。
●示差工作站对示差检测器的控制:
点击检测池冲洗按钮【RID(检测器A)R.流速开/关】,查看示差检测器上冲洗灯(Rflow)是否亮起;
点击检测器平衡按钮【平衡RID(检测器A)】,查看工作站中基线是否出现平衡峰;
点击检测器归零按钮【检测器A零点】,查看工作站中基线是否能归零。
9.1.3AutoValidation
9.1.3.1确认项目:
●波长准确性检查
●D2灯能量检查
●输液稳定性的检查
●调温精确度的检查
●吸光度的准确度的检查
●UV-VIS检测器基线漂移的检查
●UV-VIS检测器基线噪声的检查
●压力极限的检查
9.1.3.2仪器与设备:
名称
型号/规格
编号
是否在有效期内
阻尼管
/
228-18871-91
9.1.3.3测试条件:
流动相:
已过滤的纯化水
检测器:
紫外检测器,波长为250nm
柱温:
35℃
流速:
1.0ml/min
9.1.5.4测试方法和步骤:
●将A、B、C、D流路放入纯化水中。
●装入阻尼管。
●选择输液方式(梯度洗脱),设定流动相流速、紫外检查波长、柱温。
●色谱柱、检测器平衡。
●按液晶控制面板上VP键,显示VP/TOP界面。
在VP/TOP界面上按F3[VALID]键,选择第3项,按Enter键,显示AutoValidation界面。
●按F1[START]键,AutoValidation开始,流路B开始清洗。
●等待清洗结束,切换至下一界面,依次开始波长准确度检查、D2灯能量检查、输液稳定性的检查、调温精确度的检查、吸光度的准确度的检查、UV-VIS检测器基线漂移和噪声的检查、压力极限的检查。
●结果检查:
检查结束,输入界面右显示的各检查项目的编号(数字键),可显示检查结果。
《实验所需试药及试液制备记录》见附件三
《AutoValidation记录》见附件四
《高效液相色谱仪运行确认记录》见附件五
运行确认合格之后要填写《阶段运行确认表》见附件六
9.2性能确认:
考察仪器运行的可靠性、主要运行参数的稳定性和结果的重现性。
9.2.1流量准确度:
9.2.1.1仪器与设备:
秒表、阻尼管。
9.2.1.2测试条件:
9.2.1.3测试方法和步骤:
分别设定流速为0.2ml/min,0.5ml/min,1.0ml/min等值进行校验,这些流速覆盖了实验室使用的流速范围。
待流速稳定后,在流动相流出口处分别用已称定重量的称量瓶准确收集流动相,用秒表计时10分钟,不同流速各测量3次,称量完成后用天平称定称量瓶和水的总重,计算得出流速是否准确。
合格标准
流量设定值(ml/min)
0.2
0.5
1.0
RSD(%)应小于
3%
2%
9.2.1.4合格标准:
《流量准确度确认记录》见附件七
9.2.2进样量准确度:
9.2.2.1仪器与设备:
1.5ml试样瓶(HPLC专用)、天平、1000μl移液器。
9.2.1.2测试方法:
使用装入试样(已过滤纯化水)的1.5ml试样瓶,测定进样量为50μl的10次注入动作的注入前和注入后的重量,由重量差计算进样量准确度。
9.2.1.3测试步骤:
●在工作站上设定运行方法的运行时间为3分钟。
●用移液器移取1000μl已过滤纯化水,加入到1.5ml试样瓶中,用天平精密称定。
●将试样瓶置于样品架1(左侧)的1号位置上。
●按液晶控制面板上VP键,显示VP/TOP界面;
在VP/TOP界面上按F3[VALID]键,选择第2项,按Enter键,显示PerformanceCheeA界面,输入数字10,按Enter键,显示InjectionVol界面。
●输入称定的试样瓶+1ml水的重量数值,按Enter键;
按F2[EXIT],开始注入,切换至下一画面。
●等待注入完毕,取出试样瓶,用天平精密称定剩余重量。
●输入剩余重量数值;
按F2[EXIT],计算进样量准确度,显示是否合格的判定。
±
2%以下。
《进样量准确度确认记录》见附件八
9.2.3温度准确度:
9.2.3.1仪器与设备:
温度计、秒表。
9.2.3.2测试方法和步骤:
将一经过校验的温度计放入柱温箱(水银头紧密接触加热块),分别设定柱温箱温度为30℃,
35℃,40℃等值进行校验,这些温度覆盖了实验室使用的柱温范围。
待测温仪指示温度稳定后,记录温度显示值,每隔10分钟测一次,每个温控点测定1小时,求出平均值。
设定值与平均值之差为设定值误差△T,6次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc。
9.2.3.3合格标准:
可接受标准
温度设定值(℃)
30
35
温度设定值误差
|△T|<2℃
控温稳定性误差
TC≤1℃
《温度准确度确认记录》见附件九
9.2.4紫外检测器的基线漂移与噪声
9.2.4.1仪器与设备:
阻尼管。
9.2.4.2测试条件:
9.2.4.3测试方法:
在基线稳定后测定30分钟的基线漂移和5分钟的基线噪声。
9.2.4.4测试步骤:
●将阻尼管安装好,将流动相装入。
在VP/TOP界面上按F3[VALID]键,选择第2项,按Enter键,显示PerformanceCheeA界面。
●输入数字9,按Enter键,显示Drift/Noise界面。
●按F2[EXIT],在流量1ml/min,温度40℃,波长250nm上调温开始,切换至下一画面。
●等待基线达到稳定状态(约1小时),基线稳定时,切换至下一画面。
●开始自动测定漂移,测定30分钟的基线漂移后,切换至下一画面。
●按F2[EXIT]时,漂移测定消除,开始噪声测定。
●测定5分钟的基线噪声后,切换至下一画面。
●按F2[EXIT]时,噪声测定消除,显示漂移/噪声的测定结果是否合格的判定。
●按F4[SAVE]记录测试结果。
9.2.4.4合格标准:
测试项目
UV-VIS检测器基线噪声
小于0.02×
10-3AU
UV-VIS检测器基线漂移
小于0.5×
10-3AU/h
《紫外检测器的基线漂移与噪声确认记录》见附件十
9.2.5示差折光检测器的基线漂移与噪声
9.2.5.1仪器与设备:
9.2.5.2测试条件:
示差折光检测器
9.2.5.3测试方法:
9.2.5.4测试步骤:
●将阻尼管安装好,将流动相装入,开启泵,缓慢增加流动相流速至1.0ml/min。
●待系统平衡后,调整基线在图谱的中部位置,记录基线30分钟。
以图谱显示的刻度值或灵敏度与积分仪的匹配关系,计算基线噪声和漂移值。
●基线噪声为峰-峰噪声,选择最大的噪声做为基线噪声。
计算方法:
基线噪声=图谱单位距离对应的RIU×
噪声峰-峰间的垂直距离。
漂移值为30分钟内噪声的最高值和最低值之间垂直距离L对应的RIU。
漂移值=图谱单位距离对应的RIU×
L/0.5h。
9.2.5.5合格标准:
基线噪声:
≤5×
10-7RIU
基线漂移:
10-6RIU/h
《示差折光检测器的基线漂移与噪声确认记录》见附件十一
9.2.6梯度浓度准确度:
9.2.6.1测试条件:
9.2.6.2测试方法:
因日常检测仅用二泵,另两泵用于清洗,因此仅检验二泵的流量比。
将泵编号,分别为A、B、C、D,A、B泵用于实验,C、D泵用于清洗。
测定20分钟内A、B泵按1:
1的比例消耗已过滤纯化水的重量,计算RSD值。
9.2.6.3测试步骤:
●设定A流动相和B流动相的比例为1:
1,流速为1.0ml/min。
●取两个100ml烧杯,标记编号A、B,分别装入约60ml已过滤的纯化水,用天平称定总重量。
●将A、B泵头分别放入已称定重量的装有已过滤的纯化水的烧杯中,开启泵开关,并同时计时20分钟。
●20分钟后,关闭泵开关,分别称定剩余纯化水和烧杯的重量。
●计算RSD值。
9.2.6.4合格标准:
小于±
《梯度浓度准确度确认记录》见附件十二
9.2.7分析的重复性:
9.2.7.1测试条件:
色谱柱:
凝胶柱(型号:
TSAgel-G20BBSWXL)
2.84%硫酸钠溶液
紫外检测器(234nm);
波长示差折光检测器
0.5ml/min
9.2.7.2葡萄糖醛酸溶液(5mg/ml)制备:
称取葡萄糖醛酸约10mg,加流动相20BBμl溶解,制成每1ml约含5mg葡萄糖醛酸的溶液。
9.2.7.3测试方法:
分别用紫外和示差检测器来检测葡萄糖醛酸的紫外和示差的吸收值,通过紫外和示差峰的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差来确认系统的重现性。
9.2.7.4测试步骤:
按色谱条件,照《高效液相色谱仪使用维护规程》和《注射用低分子量肝素钙标准操作规程》操作,单次进样测定6次,记录紫外和示差的色谱图,计算各峰的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差。
9.2.7.5合格标准:
保留时间的相对标准偏差小于0.5%;
峰面积的相对标准偏差小于1.0%;
峰高度的相对标准偏差小于1.0%;
《分析的重复性确认记录》见附件十三
《高效液相色谱仪性能确认记录》见附件十四
确认过程中如有偏差,应将发生的偏差记录在偏差处理记录中,并根据偏差处理记录修改验证或确认的方案,最终报告应包括偏差列表和对偏差的处理。
《偏差处理记录》见附件十A五
质量管理部负责收集各项确认、试验结果记录,起草确认报告,报验证委员会。
验证委员会负责对确认结果进行综合评审,做出确认结论。
《确认结果分析及评价》见附件十六
质量管理部负责根据设备仪器情况,确定再确认项目及周期,报验证小组审核。
《再确认项目及检查周期》见附件十七
在本方案经过批准后,本验证小组组长对该方案进行培训,以保证方案顺利实施,并做好培训记录。
《培训记录》见附件十八
14、附件
附件一:
文件检查记录
附件二:
仪器、仪表校验
附件三:
实验所需试药及试液制备记录
附件四:
AutoValidation记录
附件五:
高效液相色谱仪运行确认记录
附件六:
阶段运行确认表
附件七:
流量准确度确认记录
附件八:
进样量准确度确认记录
附件九:
温度准确度确认记录
附件十:
紫外检测器的基线漂移与噪声确认记录
附件十一:
示差折光检测器的基线漂移与噪声确认记录
附件十二:
梯度浓度准确度确认记录
附件十三:
分析的重复性确认记录
附件十四:
高效液相色谱仪性能确认记录
附件十A五:
偏差处理记录
附件十六:
确认结果分析及评价
附件十七:
再确认项目及检查周期
附件十八:
培训记录
文件/资料名称
文件编号
存放地点
文件确认结果
高效液相色谱法标准操作规程
SOP-ZL-t-T-56-V6.0
质量部
□符合规定□不符合规定
高效液相色谱仪使用维护规程
SOP-SB-zl-59-V6.0
高效液相色谱柱使用维护规程
SOP-ZL-t-T-91-V6.0
注射用低分子量肝素钙标准操作规程
SOP-ZL-c-L-01-V6.6
检查人
复核人
编号\型号
校验结果
是否在校准有效期内
□合格□不合格
是□否□
天平
XS105DU
PL20BB
温度计
校21
pH计
SevenEasy
容量瓶
1000ml
移液器
100-1000µ
l
秒表
JS-510
试剂名称