组织工程医疗器械产品海藻酸钠Word文档下载推荐.docx
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水合胶体hydrocolloid
当水合时水溶性聚合物形成的胶体。
3.5
平均分子量averagemolecularmass（averagemolecularweight）
平均分子量最常用的表达方式是数均分子量（Mn）和重均分子量（Mw），其计算公式如下：
Mn=∑NiMi/∑Ni
Mw=∑wiMi/∑wi=∑NiMi2/∑NiMi
式中：
Ni——具有特定分子量Mi的分子数量；
Wi——具有特定分子量Mi的分子质量；
在一个多分散体系中，Mw>
Mn。
Mw/Mn即分子量分布数值，海藻酸钠的Mw/Mn通常在1.0～3.0之间。
4 要求
4.1性状
应为白色或淡黄色粉末状固体。
4.2鉴别
通过傅里叶变换红外光谱（FT-IR）检测且其典型特征峰（cm-1）基本一致：
3375～3390（b），1613（s），1416（s），1320（w），1050～1125（b），903（m），600～710（b）。
其中，s：
强带；
m：
中级带；
w：
弱带；
b：
宽带。
4.3结构组成
采用1H-核磁共振光谱（NMR）检测，典型1H-NMR谱显示如下：
图1
4.4平均分子量及其分子量分布
应确定海藻酸钠的平均分子量及其允差范围，以及分子量分布数值。
注：
推荐海藻酸钠的分子量分布数值为1.0～3.0之间。
4.5干燥失重
应不大于15.0%（质量分数）。
4.6灰分
应为18.0%～27.0%（质量分数）。
4.7重金属含量
以铅计重金属总量应不大于0.004%（质量分数），其中砷含量应不大于0.00015%（质量分数），铅含量应不大于0.001%（质量分数）。
4.8蛋白质含量
应不大于0.3%（质量分数）。
4.9细菌内毒素
应小于0.5EU/mg。
4.10微生物限度
细菌菌落总数应不大于200CFU/g。
4.11生物学评价
对本材料在预期使用中与人体接触的部位、性质和时间进行分类，按照GB/T16886.1所述的基本原则进行生物安全性评价。
5 试验方法
5.1性状
目视观察，应符合4.1的规定。
5.2鉴别
通过傅里叶变换红外光谱（FT-IR）测定（溴化钾压片法），应符合4．2的规定。
5.3结构组成
采用1H-核磁共振光谱（NMR）检测，试验方法见附录A，应符合4．3的规定。
5.4平均分子量及其分子量分布
平均分子量可通过以下两种方法来确定：
特性黏数法，以及凝胶渗透色谱联合多角度激光散射测定仪（SEC-MALLS）测定分子量。
试验方法见附录B，应符合4．4的规定。
5.5干燥失重
采用《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则0831规定的方法测定。
应符合4.5的规定。
5.6灰分
按照《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则0841的方法测定，推荐在800℃下灼烧至少6h。
应符合4.6的规定。
5.7重金属含量
重金属总量按照《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则0821重金属检查法第二法测定，砷含量按照《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则0822砷盐检查法第一法测定，铅含量按照《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则0406原子吸收分光光度法第一法测定，应符合4.7的规定。
砷含量、铅含量也可按照《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则0412电感耦合等离子体质谱法测定。
5.8蛋白质含量
按照附录C规定的方法测定，应符合4.8的规定。
5.9细菌内毒素
按照《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则1143规定的方法进行测定。
应符合4.9的规定。
5.10微生物限度
按照《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则1105规定的方法测定，应符合4.10的规定。
5.11生物学评价
按照GB/T16886.1所述的基本原则进行生物安全性评价。
6 检验规则
6.1批检验
6.1.1 产品以同日投料，同一工艺生产的产品为同一批号。
6.1.2 批检验应进行4．1，4．5，4．6，4．7，4．8，4．9，4．10的检测。
6.2型式检验
6.1.3 型式检验为全性能检验。
6.1.4 型式检验时，若所有检验项目全部合格，则判定为合格，否则判定为不合格。
6.3抽样检验
抽样方案按照GB/T2828.1进行。
7 标志
7.1 大包装应有下列标志：
a）生产厂名和地址；
b）产品名称；
c）产品注册号和执行标准编号；
d）分类和规格；
e）生产批号或日期；
f）失效日期；
g）贮存条件。
7.2 小包装应有下列标志：
a）产品名称；
b）生产厂名和地址；
c）分类和规格；
d）生产批号或日期；
e）原料来源；
7.3 储运标志应符合GB/T191中的规定。
8 包装
8.1 应采用适宜的包装，确保海藻酸钠产品的安全性和有效性。
8.2 产品的包装、贮存、运输应符合YY/T0313的规定。
附录A
（规范性附录）
海藻酸钠的结构组成和序列结构的1H-核磁测试方法
A.1范围
A.1.1本检测方法用于制备组织工程医疗产品及外科植入物的海藻酸钠。
A.1.2描述海藻酸钠的参数，包括FG（G含量），FM（M含量）M/G、NG＞1（连续G单元的平均数量大于1的数值，即不包括-MGM-在内的G单元的平均长度）等。
使用和有效性
采用1H-NMR的方法进行测定时，海藻酸钠溶液的黏性有可能导致NMR谱线加宽，从而影响测定结果。
因此在测定前，需要先通过条件温和的部分水解降低海藻酸钠样品溶液的黏性。
把海藻酸钠溶解于99%D2O中之后冻干，再将其溶解于99.9%D2O再冻干从而制备低1H2O含量的样品。
三乙烯四胺六乙酸（TTHA）被用作螯合剂以防止二价阳离子与海藻酸钠反应，这种反应可以导致谱线加宽以及信号强度的选择性丢失。
A.3材料
A.3.1化学物质
A.3.1.1海藻酸钠样品。
A.3.1.2去离子水。
A.3.1.3HCl（1mol/L，0.1mol/L）。
A.3.1.4NaOH（1mol/L，0.1mol/L）。
A.3.1.5D2O（99%～99.9%，99.9%）。
A.3.1.6三乙烯四胺六乙酸（TTHA，D2O中0.3mol/L，DCl或NaOD调pH值至5～5.5）。
A.3.2仪器
A.3.2.1分析天平（0.1mg）。
A.3.2.2振荡器。
A.3.2.3pH计。
A.3.2.4水浴（100℃）。
A.3.2.5冻干装置。
A.3.2.6NMR仪（推荐300MHz区域强度或更高）。
A.4步骤
A.4.1样品制备
A.4.1.1制备100mL1mg/mL海藻酸钠水溶液。
A.4.1.2HCl（1mol/L，0.1mol/L）调pH值为5.6，将其置于100℃水浴中1h。
A.4.1.3HCl（1mol/L，0.1mol/L）调pH值为3.8，将其置于100℃水浴中30min。
A.4.1.4NaOH（1mol/L，0.1mol/L）调pH值为7～8，冻干样品过夜。
A.4.1.5在99%～99.9%D2O5mL中溶解海藻酸钠样品，再次冻干。
A.4.1.6在99.9%D2O1mL中溶解海藻酸钠样品10mg～12mg。
A.4.1.7在NMR样品管中加入0.7mL海藻酸钠样品，再加入20μL，0.3mol/LTTHA。
A.4.2技术参数
A.4.2.1海藻酸钠1H-NMR参数
1H-NMR应在80℃，20Hz的标准一围脉冲中获得。
原子核1H
质子谱带宽度-0.59.5
扫描次数64
弛豫时间2s
质子脉冲角度90°
扫描时间4.096s
取得样品数据点的数量取决于谱带宽度（Hz）和扫描时间；
32768（400Hz时）推荐使用数字式滤器以及适合的数字信号处理器以获得良好的基线。
A.4.2.2参考谱图
见图1。
A.4.3计算
A.4.3.11H-NMR数据由一系列方程式或影响因素进行计算。
这些因素包括（i）数据的最高平均数；
（ii）保证黏度（例如，FM=FMM+FMG）。
在图1中显示了信号A，B1，B2，B3，B4和C的积分强度。
1H-NMR中这些信号的意义如下：
red-a：
alphareducing-ends
A：
G
red-b：
betareducing-ends
B1：
GGM
B2：
MGM
B3：
MG
B4：
MM
C：
GG
海藻酸钠的化学成分和序列结构取决于信号的强度，它反映了各个成分的量。
A.4.3.2相关公式如下：
G=0.5[A+C+0.5（B1+B2+B3）]……………………………………（A.1）
M=B4+0.5（B1+B2+B3）…………………………………………（A.2）
GG=0.5[A+C-0.5（B1+B2+B3）]…………………………………（A.3）
MG=GM=0.5（B1+B2+B3）………………………………………（A.4）
MM=B4………………………………………………………（A.5）
GGM=MGG=（B1）0.5（B1+B2+B3）/（B1+B2）……………………………………（A.6）
MGM=（B2）0.5（B1+B2+B3）/（B1+B2）……………………………（A.7）
GGG=GG-GGM……………………………………………………（A.8）
FG=G/（M+G）………………………………………………（A.9）
FM=M/（M+G）………………………………………………（A.10）
FGG=GG/（M+G）………………………………………………（A.11）
FMM=MM/（M+G）………………………………………………（A.12）
FGM=FMG=MG/（M+G）……………………………………………（A.13）
FGGG=GGG/（M+G）……………………………………………（A.14）
FMGM=MGM/（M+G）……………………………………………（A.15）
FGGM=FMGG=GGM/（M+G）…………………………………………（A.16）
NG=FG/FGM………………………………………………（A.17）
NG>
1=（FG-FMGM）/FGGM………………………………………（A.18）
NM=FM/FMG………………………………………………（A.19）
如果reducingendsignals也被积分（“red-a”和“red-b”），则平均聚合度的评估公式如下：
DPn=（M+G+red-a+red-b）/（red-a+red-b）………………………（A.20）
G——α-L-古罗糖醛酸；
M——β-D-甘露糖醛酸；
GG、GGG——α-L-古罗糖醛酸聚合嵌段；
MM、MMM——β-D-甘露糖醛酸聚合嵌段；
MG、GGM、MGM——α-L-古罗糖醛酸和β-D-甘露糖醛酸聚合嵌段；
FG——α-L-古罗糖醛酸含量；
FM——β-D-甘露糖醛酸含量；
FGG、FGGG——α-L-古罗糖醛酸聚合嵌段含量；
FMM——β-D-甘露糖醛酸聚合嵌段含量；
FGM、FMGM、FGGM——α-L-古罗糖醛酸和β-D-甘露糖醛酸含量；
NG——连续的α-L-古罗糖醛酸单体的平均数量；
1——连续的α-L-古罗糖醛酸单体的平均数量大于1的数值，即不包括-MGM-在内的G单元的平均长度；
NM——连续的β-D-甘露糖醛酸单体的平均数量；
DPn——平均聚合度。
A.5标准偏差和结果
A.5.1FG及其标准偏差（SD）应精确到0.01。
A.5.2G含量高的海藻酸钠应给出G含量，例如，FG为0.68（标准偏差=±
0.01）。
M含量高的海藻酸钠应给出M含量，例如，FM为0.66（标准偏差=±
附录B
海藻酸钠平均分子量及其分子量分布的测试方法
B.1 概述
海藻酸钠的分子量决定着它的某些特性，如粘度和/或胶体拉伸率等。
由于上述原因以及这些特性的不同对最终用途的影响，采用直接或间接的方法测定海藻酸钠的分子量是十分必要的。
海藻酸钠是一个确定分子量范围的多分散体系。
分子量可用数均分子量（Mn）和重均分子量（Mw）来表示。
可以通过下述方式来测定：
B.2 依据特性黏数测定海藻酸钠分子量
特性黏数是描述单位质量聚合物在溶液中的流体力学体积，表征聚合物在特定溶剂和温度条件下的一种特性，与浓度无关，与聚合物的平均分子量成比例。
特性黏数的计算公式为：
Mark-Houwink-Sakurada方程[η]=KMα，其中K为常数，M为平均分子量，α为描述聚合物组成的经验常数，通常为0.5～1。
当α=1时，Mη=Mw。
对海藻酸钠而言，在离子强度为0.1时（例如，0.1mol/LNaCl溶液），其指数α接近于1。
通过测定特性黏数，并已知样品的K和α值，则可确定聚合物的粘均分子量。
特性黏数可以通过乌氏黏度计测定。
整个测定过程应确保在温度恒定为20℃，含有0.1mol/LNaCl溶液和足够低的海藻酸钠浓度等条件下进行。
其具体操作方法如下。
精密称取105℃干燥6h的海藻酸钠0.2g，置于约50mL的0.1mol/LNaCl溶液中（内含0.05%乙二胺四乙酸二钠），放置24h后溶解并稀释至100mL，按《中华人民共和国药典》（2015版）四部通则0633第二法测定特性黏数（η）（温度控制在20℃±
0.05℃），其中K=2.0×
10-5，α=1，代入Mark-Houwink-Sakurada方程，即可计算得到海藻酸钠的平均分子量。
B.3用凝胶渗透色谱（GPC）与多角度激光散射测定仪（SEC-MALLS）测定海藻酸钠平均分子量及其分子量分布
多角度激光散射测定仪作为测分子量用的附加检测器，不需标准品校准，克服了样品与标准品的化学组成、分子结构及大小不同带来的误差。
由于通常无法获得海藻酸钠的标准品，GPC结合SEC-MALLS方法为测定其平均分子量提供了新的途径。
色谱条件如下：
采用TSKG4000Pwx色谱柱；
多角度激光检测器及示差折光检测器；
流动相为0.1mol/LNaNO3溶液；
流速为0.5mL/min。
采用GPC结合SEC-MALLS，在690.0nm的波长和25℃下测定散射光强。
海藻酸钠溶液的溶剂为超纯水。
将样品按上述色谱条件进样，测定分子量及其分子量分布。
由Zimm图用外推法计算Mn，Mw以及分子量分布指数Mw/Mn。
附录C
海藻酸钠蛋白质含量测定
C.1 原理
库马斯亮蓝G－250具有两种色调，在游离状态下呈红色，与蛋白质结合后转为青色，且其色深浅与蛋白质的浓度成正比。
C.2 设备
C.2.1分析天平
C.2.2分光光度计
C.2.1旋涡式混合器
C.3 溶液制备
实验所用试剂均为分析纯。
C.3.1库马斯亮蓝G－250试液：
称取库马斯亮蓝G－250100mg溶解于50ml的95％乙醇中，再加入85％（m/v）的磷酸100mL，并用蒸馏水稀释至1000mL，置于棕色瓶内，室温贮存。
C.3.2 蛋白质标准液：
精确吸取5％牛血清白蛋白标准液0.2mL于1000mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，4℃下贮存。
C.4 样品制备
取海藻酸钠约5mg，精确称重，置于试管中，置于1000mL容量瓶中用蒸馏水稀释定容。
充分振荡混匀，使其完全溶解。
按式（C.1）计算样品管中海藻酸钠含量（μg／mL）。
ρ1＝m／1000…………………（C.1）
m――海藻酸钠质量，μg。
C.5 测定步骤
C.5.1按表C1制备蛋白质标准液系列
表C1蛋白质标准管溶液系列浓度
试管号
1
2
3
4
5
蛋白质标准溶液/mL
0.1
0.2
0.4
0.8
1.0
蒸馏水/mL
0.9
0.6
蛋白质浓度/（μg/mL）
8
10
C.5.2在标准液系列的各试管及样品试管中分别加入5ml的库马斯亮蓝G－250溶液。
用旋涡式混合器使试管中溶液充分混合。
用0号管作对照，用分光光度计测定595nm处各标准管和样品管的吸光度。
C.5.3用标准管绘制吸光度－浓度曲线，根据样品的吸光度值从标准曲线上查得样品管的蛋白质含量。
C.6结果表示
按式（C.2）计算海藻酸钠蛋白质含量ρ3（％）：
ρ3（％）＝ρ2／ρ1×
100…………………（C2）
ρ1――样品管中海藻酸钠含量，μg／mL；
ρ2――样品管中蛋白质含量，μg／mL。
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