临床免疫学检查操作规程.docx

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临床免疫学检查操作规程

临床免疫学检查操作规程

传染病免疫学检查

乙型肝炎血清标志物（HBV一M）检测

【方法】

ELISA法。

【试剂】

国内有商品化试剂盒供应。

但必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“中国药品生物制品检定所检定合格”字样的防伪标签的试剂。

【操作】

按试剂盒内说明书书进行。

【附注】

1．试剂盒应置冰箱中保存，取出后平衡至室温方可使用，未用完的微孔条须密封保存；

2．每次应设空白1孔（不加标本及标酶试剂，其余各步相同），阴性对照3孔，阳性对照2孔；

3．洗涤液须用蒸镏水或去离子水配制，洗涤时各孔均应加满洗液，以防孔口内边缘有游离酶残存不能洗净；

4．用洗板机洗板，每次洗板反复5遍，最后一次要求微孔内不残留洗涤液，如达不到要求，需扣干；

5．洗板机洗板时应设定30~60秒的浸泡时间；

6．滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体均匀并弃去一滴。

滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确，注意勿将试剂滴在孔壁上；

7．37℃温育须采用水浴箱，不可使用37℃干式恒温箱，且微孔条必须接触37℃水浴水面，不可悬空；

8．不同批号试剂不可混合使用。

【结果判断】

酶标仪双波长450/630nm比色测定；

1．HBSAg、抗—HBS、HBeAg；

临界值（C.O）=阴性对照孔A值的均值N×2.1（阴性对照A值＜0.05时按0.05计）；

标本A值S/C.O≥1为HBsAg，抗—HBs、HBeAg阳性（S/N≥2.1）；

标本A值S/C.O＜1为HBsAg、抗—HBs、HBeAg阴性（S/N＜2.1）。

2．抗—HBe、抗一HBC；

临界值（C.O）=阴性对照孔A值的均值N×0.5；

标本A值S/C.O≤1者为抗—HBe、抗一HBC阳性（S/N≤0.50）；

标本A值S/C.O＞1者为抗—HBe、抗一HBC阴性（S/N＞0.50）。

抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M（Anti-HAV-IgM）测定

【方法】

ELISA法。

【试剂】

市售合格试剂、要求同HBV两对半；

【操作】

按试剂说明书要求进行，要求可参考HBV两对半；

【结果判断】

要求同HBV两对半中HBsAg。

抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白G（Anti-HCV-IgG）测定

【方法】

ELISA法。

【试剂】

市售合格试剂、要求同HBV两对半。

【操作】

按试剂盒说明书进行、要求可参考HBV两对半。

【结果判断】

1．阴性对照：

正常情况下，A值≤0.08；

2．阳性对照：

正常情况下，A值≥0.50；

3．临界值（C.O）=阴性对照均值×2.8。

阴性对照孔A值>0.08应舍弃、如所有阴性对照孔A值均>0.08，试验应重做。

阴性对照孔A值<0.05时以0.05计算。

标本A值S/C.O≥1者为阳性。

标本A值S/C.O<1为阴性。

抗HIV（1+2）测定

在选用测定方法时、需根据自身条件和需要加以综合考虑、尽管所述方法灵敏度特异性都很高、但在实际工作中，假阳性仍然可见，为达到最佳的检测目的，一般需采用下列程序。

ELISA、金标等过筛试验阴性排除后；阳性者应以同类另一方法或另类某种方法重新过筛试验，以排除假阳性，若仍为阳性，可用免疫印迹法证实，再次排除假阳性，经重复检测均为阳性者，方可慎重发出阳性结果报告。

【方法】

1．筛选：

ELISA法、金标法、明胶凝集试验、免疫荧光法和乳胶凝集试验等。

试剂：

必须使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“中国药品生物制品检定所检定合格”防伪标签的商品试剂盒。