免疫标准操作程序SOP.docx
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免疫标准操作程序SOP
标准操作程序
项目
甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序
方法
ELISA方法
编写人
冯岚
日期
2005/01/01
审核人
曹进平
日期
2005/01/01
批准人
陈健康
日期
2005/01/01
文件分发部门和/或个人
免疫室，医务科
本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次
文件编号
CHDEYY-JYK-MY-001
文件版本号
第1版
医务科保管者
院长办公室保管者
院档案室保管者
检验科主任
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序
WHDRYY-JYK-MY-001
共2页第1页
2005-01-01
[目的]
保证检测结果准确可靠。
[该SOP变动程序]
本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经专业主管、科主任
批准签字。
[标本的采取和保存]
采静脉血2ml，分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
[测定原理]
采用兔抗-人IgMu链包被反应被，加入待测标本，同时加入HAVAg，抗HAV-HRP，如待测标本中含有抗-HAV-IgM时，就能与包被兔抗-人IgMu链结合，并且与HAVAg,抗-HAV-HRP结合成复合物，加TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
[操作步骤]
1.将待测标本用生理盐水作（1：
1000）稀释，每孔加入稀释标本100ul，设阴、阳性对照各2空，每孔加入阴性对照（或阳性对照）100ul（或2滴），并设空白对照一孔，封板，置37度孵育20分钟。
2.洗板机洗板：
选择洗涤5次程序洗板后拍干。
手工洗板：
弃去孔内液体，洗涤液注满各空，静置5秒，甩干，重复三次后拍干。
3.每孔加入HAVAg30ul（或一滴），酶结合物50ul（或一滴），（空白对照孔不加），充分混匀，封板，置37度孵育20分钟。
4.洗板机洗板：
选择洗涤5次程序洗板后拍干。
手工洗板：
弃去孔内液体，洗涤液注满各空，静置5秒，甩干，重复三次后拍干。
5.每孔加显色剂A液、B液各50ul（或一滴），充分混匀，封板，置37度孵育10分钟。
6.每孔加入终止液50ul（或一滴），混匀。
7.用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。
[结果判断]
样品OD值除以阴性对照平均OD值大于或等于2.1判断为阳性，否则为阴性
阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算
[临床意义]
血清中HAV—IgM在亚临床期即已出现，其滴度在感染后3个月维持在1000以上，早被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。
[注意事项]
1．试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。
2．从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。
3．洗板时所用的洗水纸请勿反复。
4．不同批号试剂请勿通用。
5．结果判断须在10分钟内完成。
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-001
共2页第2页
2005-01-01
6．封片不能重复使用。
7．用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。
标准操作程序
项目
乙肝表面抗原检测的标准操作程序
方法
ELISA方法
编写人
冯岚
日期
2005/01/01
审核人
曹进平
日期
2005/01/01
批准人
陈健康
日期
2005/01/01
文件分发部门和/或个人
免疫室，医务科
本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次
文件编号
WHDEYY-JYK-MY-002
文件版本号
第1版
医务科保管者
院长办公室保管者
院档案室保管者
检验科主任
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
乙肝表面抗原检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-002
共2页第1页
2005-01-01
[目的]
保证检测结果准确可靠。
[该SOP变动程序]
本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：
专业主管、科主任。
[标本的采取和保存]
随机静脉血2ml，分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
[测定原理]
双抗体夹心法测HBsAg：
抗S包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗S，加底物显色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度成正比。
[操作步骤]
1．实验准备：
从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：
20稀释。
2．加待测标本：
加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。
3．加酶结合物：
每孔0.05毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。
4．洗板：
1）手工洗板：
弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。
2）洗板机洗板：
选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。
5．加显色剂：
先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。
6．终止反应：
每孔加入终止液0.05毫升，混匀。
7．测定：
用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。
[结果判断]
Cutoff值计算：
COV=阴性对照平均OD值*2.1
标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性
注：
阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。
[临床意义]
HbsAg在感染早期出现于患者血循环中，可持续数月，数年乃至终生，是诊断HBV感染最常用的指标。
但所谓HBV感染的“窗口期”，HbsAg可以阴性，而抗HBc等其他HBV血清标志物则可阳性。
[注意事项]
1试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。
2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。
3洗板时所用的洗水纸请勿反复。
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
乙肝表面抗原检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-002
共2页第2页
2005-01-01
4不同批号试剂请勿通用。
5结果判断须在10分钟内完成。
6封片不能重复使用。
7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。
标准操作程序
项目
乙肝表面抗体检测的标准操作程序
方法
ELISA方法
编写人
冯岚
日期
2005/01/01
审核人
曹进平
日期
2005/01/01
批准人
陈健康
日期
2005/01/01
文件分发部门和/或个人
免疫室，医务科
本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次
文件编号
WHDEYY-JYK-MY-003
文件版本号
第1版
医务科保管者
院长办公室保管者
院档案室保管者
检验科主任
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
乙肝表面抗体检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-003
共2页第1页
2005-01-01
[目的]
保证检测结果准确可靠。
[该SOP变动程序]
本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：
专业主管、科主任。
[标本的采取和保存]
随机静脉血2ml，分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
[测定原理]
双抗原夹心一步法测HbsAb：
S抗原反应包被板，加入待测血清后，再加入酶标抗S，加底物显色为阳性，证明样品中含被测物，含量与显色程度成正比。
[操作步骤]
1．实验准备：
从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：
20稀释。
2．加待测标本：
加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。
3．加酶结合物：
每孔0.05毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。
4．洗板：
a）手工洗板：
弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。
b）洗板机洗板：
选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。
5．加显色剂：
先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。
6．终止反应：
每孔加入终止液0.05毫升，混匀。
7．测定：
用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。
[结果判断]
Cutoff值计算：
COV=阴性对照平均OD值*2.1
标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性
注：
阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。
[临床意义]
抗—HBs为HBV的中和抗体，有清除HBV，防止在感染的作用，抗—HBs一般出现于乙肝患者恢复期，提示感染已终止。
此外，注射过乙肝疫苗的人，抗—HBs阳性。
[注意事项]
1试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。
2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。
3洗板时所用的洗水纸请勿反复。
4不同批号试剂请勿通用。
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
乙肝表面抗体检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-003
共2页第2页
2005-01-01
5结果判断须在10分钟内完成。
6封片不能重复使用。
7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。
标准操作程序
项目
乙肝E抗原检测的标准操作程序
方法
ELISA方法
编写人
冯岚
日期
2005/01/01
审核人
曹进平
日期
2005/01/01
批准人
陈健康
日期
2005/01/01
文件分发部门和/或个人
免疫室，医务科
本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次
文件编号
WHDEYY-JYK-MY-004
文件版本号
第1版
医务科保管者
院长办公室保管者
院档案室保管者
检验科主任
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
乙肝E抗原检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-004
共2页第1页
2005-01-01
[目的]
保证检测结果准确可靠。
[该SOP变动程序]
本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：
专业主管、科主任。
[标本的采取和保存]
随机静脉血2ml，分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
[测定原理]
双抗体夹心法测HbeAg：
抗e包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗e，加底物显色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度成正比。
[操作步骤]
1．实验准备：
从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：
20稀释。
2．加待测标本：
加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。
3．加酶结合物：
每孔0.05毫升空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。
4．洗板：
a）手工洗板：
弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。
b）洗板机洗板：
选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。
5．加显色剂：
先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。
6．终止反应：
每孔加入终止液0.05毫升，混匀。
7．测定：
用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。
[结果判断]
Cutoff值计算：
COV=阴性对照平均OD值*2.1
标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性
注：
阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。
[临床意义]
HBeAg是HBV的核心部分，故一般认为HBeAg阳性是具有传染性的标志，在乙肝潜伏期乃至整个病程中，HBeAg均可检出。
抗HBe是HBeAg的相应抗体。
一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。
但并不意味着HBVDNA停止复制，或传染性消失。
[注意事项]
1．试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。
2．从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。
3．洗板时所用的洗水纸请勿反复。
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
乙肝E抗原检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-004
共2页第2页
2005-01-01
4．不同批号试剂请勿通用。
5．结果判断须在10分钟内完成。
6．封片不能重复使用。
7．用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。
标准操作程序
项目
乙肝E抗体检测的标准操作程序
方法
ELISA方法
编写人
冯岚
日期
2005/01/01
审核人
曹进平
日期
2005/01/01
批准人
陈健康
日期
2005/01/01
文件分发部门和/或个人
免疫室，医务科
本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次
文件编号
WHDEYY-JYK-MY-005
文件版本号
第1版
医务科保管者
院长办公室保管者
院档案室保管者
检验科主任
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第一人民医院检验科免疫室
乙肝E抗体检测的标准操作程序
WDYYY-JYK-MY-005
共2页第1页
2005-01-01
[目的]
保证检测结果准确可靠。
[该SOP变动程序]
本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：
专业主管、科主任。
[标本的采取和保存]
随机静脉血2ml，分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
[测定原理]
竞争抑制一步法测HBeAb：
抗e包被反应板，加入待测血清后，加入中和e抗原，再加入酶标抗e，加底物不显色的为阳性，证明样本含被测物，含量与显色程度成反比。
[操作步骤]
1．验准备：
从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：
20稀释。
2．加待测标本：
加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。
3．加中和试剂：
每孔0.05毫升，空白对照孔不加。
4．加酶结合物：
每孔0.05毫升空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。
5．洗板：
a）手工洗板：
弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。
b）洗板机洗板：
选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。
6．加显色剂：
先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。
7．终止反应：
每孔加入终止液0.05毫升，混匀。
8．测定：
用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。
[结果判断]
Cutoff值计算：
COV=阴性对照平均OD值*0.3
标本OD值大于或等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性
注：
非原倍血清样品（稀释血清、质控血清）COV=阴性对照*0.5
[临床意义]
抗HBe是HBeAg的相应抗体。
一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。
但并不意味着HBVDNA停止复制，或传染性消失。
[注意事项]
1试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。
2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。
3洗板时所用的洗水纸请勿反复。
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
乙肝E抗体检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-005
共2页第2页
2005-01-01
4不同批号试剂请勿通用。
5结果判断须在10分钟内完成。
6封片不能重复使用。
7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。
标准操作程序
项目
乙肝核心抗体检测的标准操作程序
方法
ELISA方法
编写人
冯岚
日期
2005/01/01
审核人
曹进平
日期
2005/01/01
批准人
陈健康
日期
2005/01/01
文件分发部门和/或个人
免疫室，医务科
本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次
文件编号
WHDEYY-JYK-MY-006
文件版本号
第1版
医务科保管者
院长办公室保管者
院档案室保管者
检验科主任
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜市第二民医院检验科免疫室
乙肝核心抗体检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-006
共2页第1页
2005-01-01
[目的]
保证检测结果准确可靠。
[该SOP变动程序]
本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：
专业主管、科主任。
[标本的采取和保存]
随机静脉血2ml，分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
[测定原理]
竞争抑制一步法测HBcAb：
抗c包被反应板，加入待测血清后，加入中和c抗原，再加入酶标抗抗c，加底物不显色的为阳性，证明样本含被测物，含量与显色程度成反比。
[操作步骤]
1．实验准备：
从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：
20稀释。
2．加待测标本：
加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。
1）1：
30稀释血清（血浆）检测结果代表临床意义，待检标本可用稀释后的洗涤液加以稀释2）原倍血清（血浆）检测结果代表流行病学意义。
3．酶结合物：
每孔0.05毫升（抗—HBc1：
30稀释血清代表临床意义，可用稀释后的洗涤液加以稀释；原倍血清代表流行病学意义），空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。
4．洗板：
a）手工洗板：
弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。
b）洗板机洗板：
选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。
5．加显色剂：
先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。
6．终止反应：
每孔加入终止液0.05毫升，混匀。
7．测定：
用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。
[结果判断]
Cutoff值计算：
原倍血清COV=阴性对照平均OD值*0.3
1：
30稀释血清COV=阴性对照平均OD值*0.5
标本OD值大于或等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性。
[临床意义]
抗HBc是HBeAg的相应抗体，也是HBV感染后血清中最早出现的HBV的标志性抗体。
持续时间长，甚至终生存在。
几乎所有个体在感染HBV后都能产生抗HBc，故它是乙肝流行病学调查的良好指标。
在HBV感染的“窗口期”抗HBc常是唯一可测出的HBV血清标志物。
[注意事项]
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜市第二民医院检验科免疫室
乙肝核心抗体检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-006
共2页第2页
2005-01-01
1试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。
2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。
3洗板时所用的洗水纸请勿反复。
4不同批号试剂请勿通用。
5结果判断须在10分钟内完成。
6封片不能重复使用。
7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。
标准操作程序
项目
乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序
方法
ELISA方法
编写人
冯岚
日期
2005/01/01
审核人
曹进平
日期
2005/01/01
批准人
陈健康
日期
2005/01/01
文件分发部门和/或个人
免疫室，医务科
本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次
文件编号
WHDEYY-JYK-MY-007
文件版本号
第1版
医务科保管者
院长办公室保管者
院档案室保管者
检验科主任
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜市第二民医院检验科免疫室
乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-007
共1页第1页
2005-01-01
[目的]
保证检测结果准确可靠。
[该SOP变动程序]
本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：
专业主管、科主任。
[标本的采取和保存]
随机静脉血2ml，分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
[测定原理]
用乙肝病毒PreS1蛋白抗体和抗HBS分别用作酶标记抗体和包被抗体。
采用ELISA双抗体夹心一步法检测标本中的乙肝病毒PreS1蛋白。
[操作步骤]
1．将包被条固定于支架并编上序号。
2．设阳性对照2孔，每孔加入阳性对照50微升，阴性对照2孔，每孔加入阴性对照50微升，空白对照一孔，加入生理盐水100微升。
然后，依次在反应孔内加入待测样品50微升，除空白孔外，每孔再加酶结合物50微升，置微型震荡器混匀5秒后，盖好封片放37℃孵育60分钟。
3．弃去反
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