硕士论文罗哌卡因舒芬太尼联合应用对神经病理性疼痛大鼠镇痛作用的实验研究.docx

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硕士论文罗哌卡因舒芬太尼联合应用对神经病理性疼痛大鼠镇痛作用的实验研究

医学硕士学位论文

罗哌卡因-舒芬太尼联合应用对神经病理性疼痛大鼠镇痛作用的实验研究

THESTUDYOFANALGESICEFFECTOFROPIVACAINECOMBINEDWITHSUFENTANILONNEUROPATHICPAININRATS

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用的

实验

研究

2

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分类号密级

UDC学号

罗哌卡因-舒芬太尼联合应用

对神经病理性疼痛大鼠镇痛作用的实验研究

本论文已达到医学博（硕）士学位论文要求

答辩委员会主席（3号华文中宋）（印）

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2014年月日

学位论文独创性声明

本人郑重声明：

所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。

尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的材料。

与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。

本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。

研究生签名：

日期：

年月日

学位论文使用授权声明

本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档，可以借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关部门或机构送交并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。

对于保密论文，按保密的有关规定和程序处理。

本学位论文属于：

1.保密，在年解密后适用于本声明；2.不保密。

研究生签名：

导师签名：

日期：

年月日

目录

前言…………………………………………………………………………………1

摘要…………………………………………………………………………………2

Abstract……………………………………………………………………………4

缩略词表……………………………………………………………………………6

第一章材料与方法

1.1实验动物与分组………………………………………………………7

1.2实验材料……………………………………………………………7

1.3动物模型的建立…………………………………………………8

1.4病理标本的制备……………………………………………………9

第二章观察指标

2.1疼痛行为学观察……………………………………………………10

2.2热痛阈测定………………………………………………………10

2.3机械刺激感受阈值测定…………………………………………10

2.4免疫组织化学方法检测c-fos表达……………………………10

2.5统计学分析………………………………………………………11

第三章结果

3.1行为学观察结果…………………………………………………12

3.2热痛阈变化……………………………………………………12

3.3机械刺激感受阈变化……………………………………………13

3.4脊髓背角c-fos表达变化………………………………………14

第四章讨论

4.1神经病理性疼痛………………………………………………18

4.2罗哌卡因的镇痛作用…………………………………………20

4.3舒芬太尼的的镇痛作用………………………………………21

4.4问题与展望………………………………………………………22

第五章结论………………………………………………………………23

参考文献………………………………………………………………………24

致谢……………………………………………………………………………27

综述……………………………………………………………………………28

综述参考文献………………………………………………………………34

前言

神经病理性痛—由躯体感觉神经系统的损伤或疾病而直接造成的疼痛。

神经病理性痛属于一种慢性疼痛，疼痛表现为自发性疼痛、痛觉过敏、异常疼痛和感觉异常等临床特征。

按痛觉冲动的发生部位，疼痛可以分为：

躯体痛，内脏痛，神经性疼痛。

大鼠坐骨神经损伤（chronicconstrictioninjury,CCI）模型行为学特征与临床神经病理性疼痛特征有相似之处，因而选择CCI模型作为慢性神经病理性疼痛的观察和给药干预。

该模型也是动物模型中较成熟的模型之一。

治疗神经病理性疼痛有许多药物治疗，主要包括抗癫痫药、抗抑郁药、局麻药、阿片类镇痛药等。

阿片类镇痛药如吗啡、羟考酮、曲马朵、美沙酮、芬太尼等对神经病理性疼痛有效，但因其不良反应及成瘾性等因素。

局部治疗与口服用药相比有全身不良反应小、与其他药物相互作用少、药物剂量不用滴定等优点。

随着人们对手术要求的不断增高，术前使用单一的麻醉药物已经远远不能患者的需要（单一的麻醉用药不但副作用明显，而且随着应用的增多，药物的耐药性和有效麻醉时间也明显降低），因此，在麻醉联合用药方面的探索具有十分重要的临床意义。

大量研究发现，c-fos原癌基因及其蛋白产物不仅参与细胞的正常生长分化过程，而且也参与细胞内信息传递过程和细胞的能量代谢过程，在生命活动中起着极为重要的作用。

外部刺激因素可能激活c-fos原癌基因，是疼痛等外界刺激在分子水平的标志。

本研究将大鼠坐骨神经慢性压迫损伤模型（CCI）作为神经病理性疼痛的研究模型，通过在大鼠动物实验中对大鼠的一般行为学观察和热痛阈值的检测（组化免疫法），判断大鼠c-fos原癌基因在相应的脊髓部位表达情况，以此罗哌卡因与舒芬太尼骶管联合应用对神经病理性大鼠在脊髓水平的镇痛作用，为研究罗哌卡因与舒芬太尼椎管内应用治疗神经病理性疼痛的镇痛机制提供实验依据。

摘要

目的：

将舒芬太尼联合罗哌卡因药物通过骶管作用于神经病理性大鼠，研究麻醉药物联合应用对大鼠机械痛敏、热痛敏和脊髓背角神经细胞表达的影响，同时对两种麻醉药物在脊髓水平的镇痛效果做出评估。

方法：

根据实验需求挑选Wister大鼠共计四十只，体重范围为250g-300g，平均体重为（277.3±16.7）g，适应性饲养5天时间后进行TWL（热刺激缩足反射潜伏期）实验测定，并记录实验结果作为热刺激痛阈的基础值。

根据以上实验数据进行筛选，排除对热刺激反应迟钝的大鼠（筛选标准是排除热痛阈值小于10秒或者超过60秒的大鼠）。

从筛选后的大鼠中随机抽取8只大鼠作为假手术组：

手术过程中值暴露大鼠右侧的坐骨神经部位，并不对大鼠进行结扎；其余大鼠进行右侧坐骨神经结扎术，建立神经病理性疼痛模型后进行分组：

随机抽取8只大鼠作为模型对照组：

在大鼠骶管部位注射浓度分数为0.9%的生理盐水100微升；M组（n=8），罗哌卡因组：

骶管注入罗哌卡因（0.025μg/μl）100μl；D组（n=8），舒芬太尼组：

骶管注入舒芬太尼（0.004µg/μl）100μl；DM组（n=8），罗哌卡因+舒芬太尼组：

骶管注入舒芬（0.004μg/μl）+罗哌卡因（0.025μg/μl）混合液100µl。

以上5组分别于术后当天持续至第14天每天通过骶管注入相应药物；分别在手术实验后的相应时间观察并记录大鼠的行为学变化，同时用YLS-3E电子压痛仪测定大鼠后肢机械刺激感受域。

手术结束后2周时处死大鼠取得L4-L6段脊髓制作切片样本，对样本进行免疫组织化学染色并计算脊髓灰质后角神经元中c-fos免疫阳性细胞的表达量。

结果：

（1）大鼠的行为学统计实验结果：

除了进行假手术的大鼠之外，其他大鼠均表现为不同程度的术侧足外翻畸形表现，后爪着地的姿势称跛行状态，与假手术组的大鼠的下肢运动功能评分结果相比，差异具有统计学意义（P<0.01）。

DM组在手术后2周时间时与J组比较差异无显著差异（P>0.05），与S、D和M组大鼠的差异比较有统计学意义（P<0.05）。

（2）大鼠的热痛域实验统计结果：

各组大鼠在手术之前测定的热痛阈基础值类似（P＞0.05）。

实验2周后，J组大鼠的热痛阈值趋向稳定。

而D组、S组、M组和DM组的大鼠与J组相比，各个点的热痛阈值差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），D组、M组与S组热痛阈值比较差异极显著（P＜0.01），DM组与D组和M组热与之比较差异极显著（P＜0.01）。

（3）机械刺激感受域：

CI术前各组大鼠机械刺激感受阈基础值无统计学差异（P＞0.05）。

试验14d内，假手术模型组械刺激感受阈值趋于域稳定。

从术后第3d开始，S组、D组、M组和DM组与J组比较各实验点械刺激感受阈均有显著性差异（P＜0.01），与术前基础热痛阈相比差异有显著意义（P＜0.01），D组、M组与S组热痛阈值比较差异极显著（P＜0.01），DM组与D组和M组热与之比较差异极显著（P＜0.05或P＜0.01）。

（4）c-fos表达：

坐骨神经结扎后14d，4个CCI模型组fos阳性显著增多，

主要集中于背角浅层，与J组比较具有统计学差异（P＜0.01）。

4个CCI模型组FLI细胞主要分布于双侧脊髓背角I～II层，其次为Ⅴ～Ⅹ，Ⅲ～Ⅳ分布较少，与J组相比，各层c-fos表达的差异均具有显著性（P＜0.01或P＜0.05）。

D组和M组各层c-fos表达与S组比较差异极显著（P＜0.01），DM组各层c-fos表达与模型对照组比较差异显著（P＜0.01或P＜0.05），与D组比较差异极显著（P＜0.01），与M组比较差异显著（P＜0.01或P＜0.05）。

结论：

舒芬太尼和罗哌卡因两种麻醉药物的联合应用，通过骶管作用于神经病理性疼痛大鼠模型上具有明显的镇痛效果；麻醉药物联合应用比单独应用舒芬太尼或者罗哌卡因具有更优秀的临床效果；两种麻醉药物在椎管内的镇痛作用原理可能是通过降低脊髓背角神经元对传入神经的伤害性刺激而发挥作用。

关键词：

罗哌卡因；舒芬太尼；神经病理性疼痛；镇痛；脊髓；c-fos

Abstract

Objective:

Thesufentanilcombinedwithropivacainedrugsthroughthesacralroleinneuropathicrats,effectsofanesthesiadrugsonmechanicalhyperalgesiainrats,thermalhyperalgesiaandspinaldorsalhornneuronexpression,atthesametimetoevaluatetheanalgesiceffectofthetwoanesthesiadruglevelsinthespinalcord.

Methods:

AccordingtotheexperimentalneedtoselectWisterratsforty,weightisintherangeof250g-300g,theaverageweightwas（277.3±16.7）g,adaptivefeedingforTWLafter5days（thermalpawwithdrawalreflexlatency）weredetermined,andrecordtheresultsasbasisofthermallystimulatedpainthresholdvalue.Wereselectedaccordingtotheexperimentaldata,eliminationofthermalstimulationoftheratunresponsive（screeningcriteriaexcludethermalpainthresholdoflessthan10secondsormorethan60secondsofrat）.Randomlyselectedfromthescreeningof8ratsservedasshamoperationgroup:

operationprocessofmediansciaticnervewasexposedpartsofrightandwronginrats,ratswereligatedrats;therestoftherightsciaticnerveligation,establishedneuropathicpainmodelweredividedintotwogroups:

randomlyselected8ratsasmodelcontrolgroup:

intheratsacralcanalinjectionpositionoffractionalconcentrationof0.9%normalsaline100l;GroupM（n=8）,ropivacainegroup:

sacralcanalinjectionofropivacaine（0.025μg/μL,100μL）;groupD（n=8）,sufentanilgroup:

sacralcanalinjectionofsufentanil（0.004µg/μL,100μL）;groupDM（n=8）,ropivacaineplussufentanilgroup:

sacralcanalinjection（ShuFen0.004μg/μL）+ropivacaine（0.025μg/μL）mixtureof100µL.Theabove5groupsonpostoperativedaytodayfourteenththroughsacralcanalinjectionwithcorrespondingdrugs;histologicalchangeswereobservedinthecorrespondingtimeoperationaftertheexperimentandrecordthebehaviorofrats,andYLS-3Eelectronictendernesswasmeasuredinratshindlimbmechanicalstimulationreceptivefield.Afteroperation2weekstheratswerekilledtoobtainL4-L6segmentsofthespinalcordslicesamples,immunohistochemicalstainingwasperformedonthesamplesandcalculatingthegraymatterofthespinalcordafterexpressionofc-foshornneuronsimmunoreactivecell.

Results:

（1）thestatisticalresultsofbehaviorinrats:

exceptshamoperationrats,theotherratswereligatedwithvaryingdegreesofvalgusdeformity,hindpawgestureofgroundcalledclaudication,lowerlimbmotorfunctionandshamoperationgroupratswerecomparedwithresults,statisticallysignificantdifferences（P<0.01）.IntheDMgroupafteroperation2weekswhencomparedwithJgroup,nosignificantdifference（P>0.05）,andtheSwasstatisticallysignificant,DandMinratsofgroupdifferences（P<0.05）.

（2）theheatpainthresholdinrats:

experimentalresultsofheatpainthresholdofratsineachgroupweremeasuredintheoperationofthevaluebeforethesimilar（P>0.05）.2weeksaftertheexperiment,thermalpainthresholdoftheratsintheJgrouptendstobestable.WhileinDgroup,Sgroup,MgroupandDMgroupratscomparedwiththeJgroup,significantthermalpainthresholddifferenceofeachpoint（P<0.05orP<0.01）,Dgroup,MgroupandSgroupthermalpainthresholdsignificantdifference（P<0.01）,comparedwiththeDMgroupandDgroupandMgroupofheatextremelysignificantdifference（P<0.01）.

（3）mechanoreceptordomain:

preoperativeCIratsmechanoreceptorthresholdbasevalueshowednosignificantdifference（P>0.05）.Testof14dinmodelgroup,shamoperationmechanicalstimulusperceptionthresholdtendstodomain.Afterthe3D,Sgroup,Dgroup,MgroupandDMgroupcomparedwithJgroupofeachexperimentalpointmechanicalstimulusperceptionthresholdweresignificantlydifferent（P<0.01）,comparedwiththepreoperativebasedthermalpainthresholdhadsignificantdifference（P<0.01）,Dgroup,MgroupandSgroupthermalpainthresholdisextremelysignificantdifference（P<0.01）,comparedwiththeDMgroupandtheDgroupandtheMgroupofheatextremelysignificantdifference（P<0.05orP<0.01）.

（4）14daftersciaticnerveligation,4CCImodelgroup,Fospositiveincreasedsignificantly,Mainlyconcentratedinthesuperficiallayersofthedorsalhorn,comparedwiththeJgroupwithsignificantdifference（P<0.01）.4CCImodelgroup,FLIcellsweremainlylocatedinthebilateralspinaldorsalhornI~IIlayer,followedbytheV~x,III~IVDistributionless,comparedwiththeJgroup,thec-fosexpressiondifferencesweresignificant（P<0.01orP<0.05）.DgroupandMgroupc-fosexpressioncomparedwiththeSgroupshowedsignificantdifference（P<0.01）,DMgroupalllayersofc-fosexpressioncomparedwiththemodelgrouphadsignificantdifference（P<0.01orP<0.05）,comparedwiththeDgroupshowedsignificantdifference（P<0.01）,comparedwiththeMgrouphadsignificantdifference（P<0.01orP<0.05）

Conclosion:

Sufentanilandropivacainetwocombinedapplicationofnarcoticdrugs,inaratmodelofneuropathicpainhasobviousanalgesiceffectthroughsacralcanal;anesthesiacombinedwithapplicationofdrughasclinicaleffectmoreexcellentthanthesingleapplicationofsufentanilandropivacaine;analgesiceffectprincipleoftwokindsofnarcoticdrugsinthespinalca