蜜蜂白垩病病原鉴定.docx
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蜜蜂白垩病病原鉴定
宋体，五号
注：
1、论文的中文摘要、正文、参考文献、附录、致谢等均采用宋体；英文摘要和英文关键词采用“TimesNewRoman”字体；
2、除表格内容、表注、图注外，均采用小四号字；
3、中英文摘要、正文和附录的行距：
1.5倍；
4、图、表：
居中，并且前后均要空一行；图注和表头居中；表内文字用5号字（特殊情况用更小号字）。
5、物种要全称并加学名。
如中华蜜蜂（Apisceranacerana）
6、当外文插在中文中间时外文的前和后都要空1格，如本文中“现的Ascosphaera属孢囊真菌”；
7、文中段落除本模版规定的了“空一行”外均不另设置间隔。
（空一行）
加粗
中文摘要和关键词的内容：
小四号，宋体
摘要：
Ascosphaera属真菌是影响蜂类幼虫成活率的主要疾病——白垩病的病原物。
本研究根据GenBank收录的Ascosphaera属中20个种的核糖体DNA（rDNA）的内部转录间隔区ITS1和ITS2及5.8S（ITS1-5.8S-ITS2）区段序列资料，分别设计Ascosphaera属的和种的高特异性引物，构建一套以PCR为基础的Ascosphaera属和种的快速、可靠的鉴定方法，并对本实验室保存的9个不同来源的菌株进行鉴定。
结果表明，Ascosphaera属和A.apis种特异引物可以扩增出稳定特异条带，A.aggragata种特异引物还需要进一步优化。
（空一行）
关键词：
白垩病球囊菌特异性引物PCR鉴定
（空二行）
英文摘要和关键词的内容：
小四号，“TimesNewRoman”字体
“TimesNewRoman”字体,小四号,加粗
Abstract:
FungiinthegenusAscosphaeraarethecausativeagentsofchalkbrood,amajordiseaseaffectingbeelarvalviability.Thegenus-specificprimersforAscosphaera,andspecies-specificprimersforspeciesweredesignedfromthesequencesoftheinternaltranscribedspacers,ITS1andITS2,and5.8Sregion（ITS1-5.8S-ITS2）ofribosomalDNA（rDNA）inGenBankfrom20speciesofAscosphaera.WedevelopedarapidandreliablePCRmethodforidentifyingspeciesofAscosphaera.TheresultsshowedthatAscosphaeragenus-specificprimersandA.apisspecies-specificprimerssuccessfullyamplifiedaspecificproduct,A.aggragataspecies-specificprimersneedtobeoptimized.
Keywords:
chalk-brooddisease;Ascosphaera;specificprimers;PCRidentification
“TimesNewRoman”字体,小四号,加粗
关键词之间分号间隔（半角）
并加1个空格
各级标题字左起顶格、加粗
1引言
1.1蜜蜂白垩病的发生现状
①×.×格式各级标题左起顶格书写；②标题序号后空2格。
（参考文献出处标注例一）
编码法标注参考文献出处：
①[1][2]用[1,2]格式
②[3、4、5]用[3-5]格式。
白垩病（Chalkbrood）又名“石灰子病”、“石灰质病”等，是当前养蜂生产上危害严重的一种顽固性真菌传染病[1]。
蜜蜂白垩病是蜜蜂球囊菌（Ascosphaeraapis）引起的，该病最早是1913年由Massen在德国发现的[2]，其后该病很快蔓延至许多国家[1,3-5]。
1968年以前主要发现在欧洲各国，但到1970年以后迅速传播至美国、加拿大、日本等地[4,6]。
（参考文献出处标注例二）
作者和年份法标注参考文献出处
白垩病（Chalkbrood）又名“石灰子病”、“石灰质病”等，是当前养蜂生产上危害严重的一种顽固性真菌传染病（张三，2009）。
蜜蜂白垩病是蜜蜂球囊菌（Ascosphaeraapis）引起的，该病最早是1913年由Massen在德国发现的（李四，2005），其后该病很快蔓延至许多国家（陈旭，2010）。
1968年以前主要发现在欧洲各国，但到1970年以后迅速传播至美国、加拿大、日本等地（刘辉，2003）。
1.2蜜蜂白垩病发生症状
蜜蜂白垩拖出巢地面可看见石灰块状尸体[3]。
……
1.5蜜蜂白垩病的防治
蜜蜂白垩病的防治各学者提出不同方法，……
1.5.1预防措施
从大量观察的情况表明，凡是巢内饲料不足的蜂群、……
1.6球囊菌属中种的鉴定研究进展
标题2、3、4、5…、参考文献前空一行
目前自然界中所发现的Ascosphaera属孢囊真菌有22种[14-15]，都与Apoidea总科的社的腐生物[16]。
（空一行）
2材料与方法
2.1材料
2.1.1菌株
……
（空一行）
3结果与分析
3.1菌丝体基因组DNA的提取
对9个采自不同地区的菌……要求。
3.2高特异性引物的设计
参照文献[23]所列的Ascosphaera属中20个种的ITS1-5.8S-ITS2rDNA区段序列，通过比特异性引物，1a-F2/AscoA112、3-F1/AscoA112和1b-F1/AscoA112分别为A.aggregata、A.apis和A.proliperda的高特异性引物。
图前空一行
（空一行）
图注：
宋体，5号；居中居中
图2切叶蜂采集
空2格
（空一行）
表头：
宋体、小四号、加粗，居中
表前空一行
参照文献[23]所列的Ascosphaera属中20个种的ITS1-5.8S-ITS2rDNA区段序列，通过比较分析各序列的保守区和变异区，分别设计Ascosphaera属的高特异性引物和部分种的高特异性引物（图2），共计6条引物序列（表2）。
（空一行）
表2Ascosphaera属及其各种的鉴定标记所用引物
引物
正向/反向
引物序列（5’-3’）
标题居中（单元格），宋体，5号，粗体
TW811）
F
线粗：
1.5磅
GTTTCCGTAGGTGAACCTGC
AB282）
表中标注：
用“1）”“2）”格式
R
ATATGCTTAAGTTCAGCGGGT
AscoA111
F
GCACTCCCACCCTTGTCTA
1a-F2
F
线粗：
0.5磅
GGAAAAGACCCTCGACGAG
5-R1
R
TTTTCAGGTGCGTCCTTCCA
注：
1）来自Curranetal.；2）来自Curranetal.。
（空一行）
表后空一行
参照文献[23]所列的Ascosphaera属中20个种的ITS1-5.8S-ITS2rDNA区段序列，通过比较分析各序列的保守区和变异区，分别设计Ascosphaera属的高特异性引物和部分种的高特异性引物（图2），共计6条引物序列（表2）。
（注意：
遇到位置不够时通过调整文字或下移数行，避免一个表格分散在2格页面上）
空一行。
当图、表在顶端时也要空一行
（空一行）
表3不同工蜂密度蜂群6:
00～8:
00时对蜂巢中心温度影响的研究
蜂群
工蜂密度0.75
工蜂密度1.0
工蜂密度1.5
35.29722
35.10094
34.8
文、表中与统计相关的字母一律斜体
A
Ba1）
Cb
注：
1）小写字母表示差异达显著水平；大写字母表示差异达极显著水平
正文统计表格式
（空一行）
3.3PCR扩增对高特异性引物的检测
3.3.1Ascosphaera属高特异性引物的检测
用所设计的Ascosphaera属高特异性引物AscoA111/AscoA112对9个菌株DNA样品进行PCR扩增检测，PCR产物经15％（W/V）的琼脂糖凝胶电泳（图4）。
（空一行）
图413mm脾间蜂路箱内空间和外界气温变化折线图
文字与X轴右端对齐
3.3.2种特异性引物的检测
3.3.2.1A.apis种特异性引物的检测
（空一行）
4讨论
（1）根据Ascosphaera属的ITS1-5.8S-ITS2rDNA序列资料设计的属高特异性引物，在Ascosphaera属中获得了理想的结果，说明该标记……Andersonetal.的研究发现，A.apis与EremascusalbusEidam有着较近的亲缘关系[23]。
由于实验材料所限，在本研究中我们没能做这方面的对照研究。
标题：
加粗，小四号，字左顶格
（2）本实验的结果中看出，……
……
（4）本实验……
（空一行）
参考文献
（按参考文献编号标注示例。
注意：
编号与编码法标注参考文献出处编号相对应）
[1]赵磊,杨永红,冯源.白垩病研究进展[J].中兽医医药杂志,2006,
（2）:
62-64.
……
[8]邵瑞宜,王丽华,赵安法,等.蜜蜂白垩病病原观察及其综合防治措施[J].福建农业大学学报,1997,26（3）:
345-348.
[9]周顺伍.动物生物化学[M].北京:
中国农业出版社,1999.178-253.
……
[30]ReynaldiFJ.,LopezAC.,AlboGN.,AlippiAM.DifferentiationofAscosphaeraapisisolatesbyRep-PCRfingerprintinganddeterminationofchalkbroodincidenceinArgentineanhoneysamples[J].JApiculRes,2003,42:
68-76.
文献题目第一个单词的第一个字母大写，其他实词第一个字母均小写。
但注意专用名词和学名除外。
（按作者和年份法标注参考文献出处示例。
注意：
按前文出现的顺序排列）
陈盛禄.2001.中国蜜蜂学[M].北京:
中国农业出版社,209-229.
房柱.1985.花粉[M].北京:
农业出版社,92-94.
FeldlauferEtAl.1993.AntibacterialActivityFattyAcidsontheRoleofBees[J].BeeWord,（24）:
95-97.
Graham.1992.TheHiveandtheHoneyBee[M].HamiltonIllinoisUSA:
Dadant&Sons,932-933.
黄文诚.2002.花粉中的脂肪酸及其在蜂群中的作用[J].蜜蜂杂志,
（1）:
5.
其他特殊参考文献格式：
（学校格式）
1、网络文献样式
[序号]责任者.文章标题[文献类型标识].（发布时间）[下载时间]文献网址. （时间格式如：
2007-02-08）
（网络文献是期刊的形式，按期刊文献格式方法书写）
2、论文集文献样式：
[序号]作者.文题.论文集名[C].出版地：
出版社，出版年.起－止页码.
3、学位论文文献样式：
[序号]作者.文题[D].授予单位所在地：
授予单位，答辩年份:
起－止页码.
附录A×××××××××（单独页，加粗、字左起顶格）
A1×××××（加粗、字左顶格）
×××××××××（首行缩进2字）
A1.1×××××××××（加粗、字左顶格）
××××××××（图A1）
……
（空一行）
图、图注同正文格式要求
图A1中华蜜蜂蜂王
A2××××××××（加粗、字左顶格）
……
附录B×××××××（单独页，加粗、字左起顶格）
B1×××××（加粗、字左顶格）
×××××××××（首行缩进2字）
B1.1×××××××××（加粗、字左顶格）
××××××××（表B1）
×××××××××
表B1.1×××××
引物
正向/反向
引物序列（5’-3’）
TW81*
F
GTTTCCGTAGGTGAACCTGC
AB28*
R
ATATGCTTAAGTTCAGCGGGT
AscoA111
F
GCACTCCCACCCTTGTCTA
AscoA112
R
GAWCACGACGCCGTCACT
1a-F2
F
GGAAAAGACCCTCGACGAG
5-R1
R
TTTTCAGGTGCGTCCTTCCA
表、表头、表注和表线等与正文格式要求同
表B1.2×××××
引物
正向/反向
引物序列（5’-3’）
TW81*
F
GTTTCCGTAGGTGAACCTGC
AB28*
R
ATATGCTTAAGTTCAGCGGGT
AscoA111
F
GCACTCCCACCCTTGTCTA
AscoA112
R
GAWCACGACGCCGTCACT
1a-F2
F
GGAAAAGACCCTCGACGAG
5-R1
R
TTTTCAGGTGCGTCCTTCCA
（空一行）
致谢
本试验是在×××教授的精心指导下完成的。
试验过程中，得到了×××同学的大力相助，在此向他们表示衷心的感谢。
单独页，宋体，小四号，字居中，二字间空2格即1个字符。
小四号，宋体，首行缩进2字；行间距1.5倍
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