常用药品试剂和培养基的配制.docx

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常用药品试剂和培养基的配制

常用药品试剂和培养基的配制

（一）  反应剂

    1、检查葡萄糖试剂

配方一  本尼迪克（Benedict）溶液

（1）在400毫升蒸馏水中溶解85克柠檬酸钠和50克无水碳酸钠。

（2）在50毫升加热的蒸馏水中溶解8.5克硫酸铜。

把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如果产生沉淀，要过滤。

本尼迪克溶液配制后能长期使用（存放时间较久而产生沉淀是，取上层清液使用，不必重新配制）。

本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖，可测出0.15～0.20%的葡萄糖。

这种溶液跟未知物同加热时，如果未知物中有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。

配方二  裴林（Fehling）溶液

（1）把34.5克硫酸铜溶于500毫升蒸馏水中。

（2）把125克氢氧化钾（钠）和173克酒石酸钾钠溶解在500毫升蒸馏水中。

上述两种溶液应分别保存。

在检测葡萄糖时，使他们等量的混合，加入待测物的试管内，加热到沸腾。

如果有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。

2、检查淀粉的试剂

鲁哥氏（Lugol’s）溶液（碘液）

取6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中，搅拌到溶解后，加入4克碘，等碘充分溶解，在加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。

碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉，也用作染色剂，例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。

3、检查蛋白质的试剂

配方一  米伦（Millon）试剂

在60毫升浓硝酸（比重1.42）中溶解40克汞（水浴加温可助溶），溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释，静置澄清后，取它上层的清液备用。

这种试剂可长期保存。

在待测物中加入少量米伦试剂，加热，如果有蛋白质，会出现红色。

这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。

配方二  双缩尿试剂

分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液。

在3毫升待测物中加入1毫升10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。

如果有蛋白质，会出现紫色反应。

4、检查脂肪的试剂

苏丹Ⅲ（Ⅳ）酒精饱和溶液

取0.2克苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ），放入纯酒精中，加热，使它充分溶解，成为饱和酒精溶液，过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。

5、酸碱指示剂

配方一  酚酞试剂和试纸

酚酞试剂  取1克酚酞，溶解在100毫升60%的酒精溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。

酚态试纸  取1克酚酞，溶解在100毫升95%酒精溶液里，加入00毫升蒸馏水。

把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后，取出，放在无氨气影响处晾干。

酚泰试剂（试纸）  pH值变色范围8.2～10，在酸性和中性溶液中都无色，再碱性溶液中呈深红色。

配方二  红蓝石蕊试纸

取市售石蕊1克，放在80毫升10%酒精溶液中搅拌，使它溶解，然后过滤。

把滤液分成两份。

1份滴入稀磷酸或稀硫酸，到出现红色为止。

另1份滴入稀氢氧化钠溶液，到出现蓝色为止。

在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条，随后取出滤纸条，放在蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干，即的红、蓝两种石蕊试纸。

红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝，蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。

6、检查二氧化碳的试剂

检查二氧化碳的试剂，可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。

配方一  溴代麝香草酚蓝溶液

取0.1克溴代麝香草酚蓝，溶解在100毫升蒸馏水里，滴入少量0.1%氢氧化钾溶液，使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。

溴代麝香草酚蓝溶液pH值变色范围是6.0（黄）～7.6（蓝）。

待测物中如果有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。

配方二  石灰水

在蒸馏水中加入生石灰（氧化钙），变加边搅拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈饱和状态时为止。

在石灰水澄清后，倾出上层清液，用滤纸过滤，放在密闭瓶内保存。

如果测定的物质中有二氧化碳，会生成碳酸钙，使石灰水变浑浊。

7、检查细胞生活力的试剂

检查细胞有无生活力，可用中性红甲基蓝试剂。

配制的方法是先分别配制1%中性红溶液和1%甲基蓝溶液，这两种溶液各取1份混合，用来鉴定细胞的死活。

该试剂使活细胞的液泡染上红色，而使死细胞全部染成蓝色。

（二）分离液

1、肌细胞分离液

配方一  马克凯郎（Maccallum）液

取1份浓硝酸、2份甘油、3份水，混合后就得到马克凯郎液。

把新鲜的肌肉组织小块（横纹肌、心肌和平滑肌）投入这种溶液里浸渍，分离时间需1～3日。

这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。

配方二  氢氧化钾溶液

取35克氢氧化钾，放在100毫升蒸馏水中，加热，使它完全溶解后，在室温下冷却。

把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中，浸泡15～30分钟后，肌细胞便可分离。

2、上皮细胞分离液

配方一  福尔马林—氯化钾溶液

称取58.44克氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到1000毫升，加入2毫升福尔马林。

这种溶液是很好的上皮细胞分离液，分离很迅速，而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。

小肠和气管的上皮组织小块，放在此溶液里2小时即可分离，口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需3日左右。

配方二  水和氯醛溶液

称取5克水和氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到100毫升，就得到5%水合氯醛溶液。

从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块，投入以上溶液中，浸泡24～48小时。

3、神经细胞分离液

配方一  可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林—氯化钠溶液来分离神经细胞（见2）。

配方二  硼酸生理盐水溶液

在生理盐水溶液内加入一些硼酸，搅拌到不再溶解时为止，使成为饱和溶液。

把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。

4、植物茎细胞分离液

杰弗里氏（Jeffrey’s）液

取等量的10%铬酸溶液和10%硝酸溶液混合，成铬酸—硝酸溶液。

这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。

把材料切成小块放在水里，加热煮沸，冷却后再加热煮沸。

这样重复几次，到材料全部沉于水底后，投入分离液内，分离时间是24～48小时。

5、植物根尖细胞分离液

配方一  盐酸—酒精溶液

在1份95%酒精中慢慢的加入1份浓盐酸，即成盐酸—酒精溶液，装瓶密闭保存。

把植物根尖部位截下一小段，投入以上溶液中分离。

配方二  4%盐酸溶液

配制4%盐酸溶液。

截下植物根尖部位，投入盛有4%盐酸溶液的小烧杯内，在60摄氏度温水中隔水温热1～2分钟，使根尖软而不酥，这时分离效果最好。

6、植物纤维分离液

取10克氢氧化钠（或氢氧化钾），溶解在90毫升水里，制成10%氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，放在瓶里密闭保存。

把植物茎纵切成细条，剪成小段后，投入分离液内。

7、植物细胞质壁分离液

配方一  30%蔗糖溶液

取30克蔗糖，溶解在70毫升蒸馏水里，装瓶备用。

配方二  5%氯化钠溶液

取5克食盐，溶解在95毫升蒸馏水里，装瓶备用。

配方三  5%硝酸钾溶液

取5克硝酸钾，溶解在95毫升蒸馏水里，装瓶备用。

（三）生理盐水

配方一  各种动物需用的生理盐水

哺乳类  需用生理盐水浓度是0.9%。

称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。

鸟类  需用的生理盐水浓度是0.75%。

称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。

两栖类  需用的生理盐水浓度是0.65%。

称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。

配方二  任氏（Ringer’s）生理盐水

氯化钠  6.5克        碳酸氢钠  0.2克

氯化钾  0.14克        磷酸二氢钠  0.01克

氯化钙  0.12克

先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混合后用蒸馏水稀释到980毫升。

然后取氯化钙溶解在20毫升蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内，边滴、边搅拌，以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。

此溶液用于变温动物，尤其常用于两栖类。

配方三  乐氏（Locke’s）生理盐水

氯化钠  9.0克        碳酸氢钠  0.1～0.3克

氯化钾  0.42克      氯化钙    0.24克

把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混合后加蒸馏水到980毫升。

把氯化钙溶解在20毫升蒸馏水里，逐滴加入上述溶液中。

以上溶液用于恒温动物，尤其常用于哺乳类。

（四）培养液

1、人造海水

配方一  

氯化钠（  ）                24.72克

氯化钾（  ）                0.67克

氯化钙（  ）          1.36克

氯化镁（  ）          4.66克

硫酸镁（  ）          6.29克

碳酸氢钠（  ）            0.18克

蒸馏水                      加到1升

把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中，再加入碳酸氢钠，最后用蒸馏水稀释到1000毫升。

配方二  

氯化钠  45.0克              硫酸镁  0.1克

氯化镁  5.0克              氯化铁（1%溶液）  1滴

先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。

随后取硝酸钙溶解在20毫升蒸馏水里，把此溶液逐滴加到上述溶液内，装瓶保存。

配方二  克诺普氏（Knop’s）溶液

硝酸钾  1克                硫酸镁  1克

磷酸二氢钾  1克            硝酸钙  3克

先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。

随后取硝酸钙，用20毫升蒸馏水溶解，加入到上述溶液内。

溶液灰形成白色沉淀，在使用是必须摇动。

在以上溶液中加入蔗糖溶液（1～4%），能刺激某些藻类形成游动孢子。

该液用于培养绿藻。

3、植物无土培养液

配方  霍格伦德（Hoagland）和斯纳德（Snyder）液

硝酸钙    0.821克            硝酸钾  0.506克

磷酸二氢钾0.136克            硫酸镁  0.120克

酒石酸铁  0.005克

把上述盐类溶解在少量蒸馏水里，然后稀释到1000毫升。

（五）培养基

1、细菌培养基

配方一  牛肉膏琼脂培养基

牛肉膏  0.3克              蛋白胨  1.0克

氯化钠  0.5克              琼脂    1.5克

水      1000毫升

在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。

待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。

等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二  马铃薯培养基

取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。

在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。

过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。

每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。

配方四  根瘤菌培养基

葡萄糖  10克              磷酸氢二钾          0.5克

碳酸钙    3克              硫酸镁（  ）  0.2克

酵母粉  0.4克              琼脂              20克

水  1000毫升              1%结晶紫溶液          1毫升

先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。

2、放线菌培养基

配方一  淀粉琼脂培养基（高氏培养基）

可溶性淀粉  2克            硝酸钾    0.1克

磷酸氢二钾  0.05克          氯化钠    0.05克

硫酸镁      0.05克          硫酸亚铁  0.001克

琼脂      2克            水      1000毫升

先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。

在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。

调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。

配方二  面粉琼脂培养基

面粉  60克              琼脂  20克

水    1000毫升

把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。

另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。

3、真菌培养基

配方一  萨市（Sabouraud’s）培养基

蛋白胨  10克            琼脂    20克

麦芽糖  40克            水  1000毫升

先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。

本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。

配方二  马铃薯糖琼脂培养基

把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。

在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。

配方三  黄豆芽汁培养基

黄豆芽    100克              琼脂  15克

葡萄糖    20克              水  1000毫升

洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。

用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。

配方四  豌豆琼脂培养基

豌豆    80粒                琼脂    5克

水    200毫升

取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。

4、食用菌菌种培养基

配方一  马铃薯—蔗糖--琼脂培养基

20%马铃薯煮汁    1000毫升

蔗糖  20克                琼脂    18克

把马铃薯洗净去皮后，切成小块。

称取马铃薯小块200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后，过滤。

在滤汁中补足水分到1000毫升，即成20%马铃薯煮汁。

在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。

使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。

配方二  综合马铃薯培养基

20%马铃薯煮汁    1000毫升

磷酸二氢钾    3克          硫酸镁    1.5克

葡萄糖      20克          维生素    10毫克

琼脂      18克

先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。

在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。

分装，灭菌，备用。

该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。

（六）染色剂

1、细菌染色剂

配方一  齐氏（Ziehl）石炭酸品红染液

甲液  取石炭酸5克，溶解在95毫升蒸馏水中。

乙液  取0.3克碱性品红，放入研钵中研磨，逐渐加入10毫升95%酒精，继续淹没，使它溶解。

将甲液和乙液混合后，摇匀，过滤，装瓶，备用。

配方二  罗氏（Loeffler’s）美蓝染液

甲液  取5克美蓝，溶于100毫升95%酒精中，制成美蓝—酒精饱和液。

乙液  取氢氧化钾0.01克（或1%氢氧化钾溶液1毫升），溶液也可用于放线菌染色，0.1%浓度可用于酵母菌染色。

配方三  革兰氏（Gram’s）染液

用此液染色因先用甲液染色，再加乙液固定，用丙液处理，最后用丁液复染。

四种液体的配方如下：

甲液（结晶紫液）

（1）结晶紫  2克              95%酒精  20毫升

（2）草酸铵  0.8克              蒸馏水    80毫升

使用钱江

（1）、

（2）液相混，静置48小时后使用。

乙液（碘液）

碘    1克          碘化钾    2克          蒸馏水    300毫升

将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘，待碘全部溶解后，加水稀释至300毫升。

丙液  95%酒精溶液

丁液（番红花红液）

2.5%番红花红酒精溶液    10毫升          蒸馏水  100毫升

2、细菌特殊染色剂

配方一  芽孢染液  用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。

甲液  取5克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成孔雀绿染液。

乙液  取番红花红0.5克，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，集成番红花红复染液。

配方二  荚膜染液  此配方先用甲液染色，后用乙液复染。

甲液  取结晶紫0.1克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。

乙液  取硫酸铜（  ）31.3克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，即成20%硫酸铜脱色剂。

配方三  鞭毛染液

甲液

饱和明矾溶液    2毫升              5%石炭酸溶液    5毫升

20%丹宁酸溶液  2毫升  

乙液

碱性品红  11克                  95%酒精      100毫升

使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混，过滤即可。

3、植物细胞壁染色剂

配方一  纤维素细胞壁染液（Ⅰ）

取固绿0.1克，溶于100毫升95%酒精中，即成0.1%固绿—酒精溶液。

该液能染色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂。

配方二  纤维素细胞壁染液（Ⅱ）

氯化锌    20克                  碘化钾        6.5克

碘      1.5克                  蒸馏水加至100毫升

先把氯化锌溶于少量蒸馏水中，再加入6.5克碘化钾，在碘完全溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成碘—氯化锌溶液。

该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。

配方一  纤维素细胞壁染液（Ⅲ）

甲液  取1克碘和1.5克碘化钾，溶于100毫升蒸馏水中，即成1%碘液。

乙液  取7份硫酸和3份蒸馏水相混，即成66.5%硫酸溶液。

染色时，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。

配方四  木质化细胞壁染液（Ⅰ）

硫酸化苯胺（或盐酸话本安）    1份

蒸馏水  70份    95%酒精  30份

硫酸    30份

将上述各组分相混，将细胞材料放入混合液里染色，可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。

配方五  木质化细胞壁染液（Ⅱ）

取间苯三酚4～5克，溶于100毫升95%酒精中，即成间苯三酚—酒精液。

先在材料上滴上1滴浓盐酸，然后滴上间苯三酚—酒精液1滴，木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。

配方六  木质化细胞壁染液（Ⅲ）

取1克番红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%番红溶液。

4、细胞质染色剂

配方一  伊红染液

伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。

（1）取1克伊红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨水稀释液来代替本溶液）。

（2）取1克伊红，溶于99毫升70%酒精中，即成1%伊红—酒精溶液。

配方二  甲基蓝染液

取1克甲基蓝，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸馏水，即成1%甲基蓝染液。

配方三  亮绿染液

取0.5克亮绿，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%亮绿溶液。

5、细胞核染色剂

配方一  甲基绿染液

取1克甲基绿，溶于99毫升蒸馏水中，加入1毫升冰醋酸。

本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁。

配方二  龙胆紫染液

取1克龙胆紫，溶于少量2%醋酸溶液中，加2%醋酸溶液，直到溶液不呈深紫色止。

配方三  美蓝（亚甲基蓝）染液

取0.5克美蓝，溶于30毫升95%酒精中，加100毫升0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内。

此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。

配方四  硼砂—洋红染液

取4克硼砂，溶于96毫升蒸馏水中。

再加入2克洋红，加热溶解后煮沸30分钟，静置3日，用100毫升70%酒精冲淡，放置24小时后过滤。

此染液能染细胞核，还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色，如水螅、血吸虫等整体标本。

配方五  德氏（Delafield’s）苏木精染液

甲液  取1苏木精，溶于6毫升无水酒精中，即成苏木精—酒精溶液。

乙液  取10克铵矾溶于90毫升蒸馏水中，即成10%铵矾水溶液。

取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使它充分氧化。

3～4天后将溶液过滤，在滤液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇，保存在密闭玻璃瓶内。

静置1～2个月，待该液颜色变深时过滤，可长久保存。

本染液是染色体的优良染色剂，除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。

配方六  席夫（Schiff’s）试剂

称取0.5克碱性品红，加到100毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热5分钟，不断搅拌，使它溶解。

在溶液冷却到50摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N盐酸。

再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠（  ）或无水亚硫酸氢钠（  ）。

把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24小时。

在溶液颜色退到淡黄色时，加入0.5克活性炭，用力摇荡1分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。

在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑纸或暗盒遮光）。

如溶液变成红色，即失去染色能力。

碱性