生物技术制药期末温习提纲.docx

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生物技术制药期末温习提纲

生物技术制药温习提纲

生物技术所含的要紧技术范围包括有哪几个工程？

基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；

基因工程菌在传代进程中的质粒不稳固的现象主若是指哪两种不稳固？

质粒不稳固分为割裂不稳固性和结构不稳固性

基因工程菌的培育方式有哪几种？

分批培育；补料分批培育；持续培育；透析培育和固定化培育；

从生产实际看，动物细胞的大规模培育要紧能够分为哪几种？

悬浮培育、贴壁培育和贴壁-悬浮培育。

动物细胞培育基分为哪三类？

天然培育基合成培育基无血清培育基

植物组织和细胞培育所用培育基种类较多，但通常都含有哪几类？

。

无机盐碳源植物生长调剂剂有机氮源维生素

在V区中，决定抗体分子与抗原分子发生特异性结合的关键部位称为互补决定区（CDR），而c区那么决定了Ig分子的异种抗原性。

酶固定法中的包埋法可分为哪两种？

网格型微囊型

发酵工业的生产水平取决于哪三个要素？

生产菌种、发酵工艺和发酵设备

生物药物普遍应用于医学各领域，按功能用途可分为哪三类？

医治药物、预防药物、诊断药物

基因工程药物制造的要紧步骤如何？

目的基因的取得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的查验

酶和细胞的固定化载体要紧有哪三类？

吸附载体包埋载体交联载体

单克隆抗体制备时对动物的免疫方式分为哪两种？

体内免疫法和体外免疫法

生产用动物细胞为原代细胞、二倍体细胞系、转化细胞系和工程细胞系。

目前工业经常使用的酶一样是以什么为要紧来源？

微生物

发酵工程产品开发的关键是挑选到高效菌株，一样优良菌种的选育方式要紧有哪几种？

自然选育、诱变育种和原生质体融合

.

在制备大量微生物菌体或其代谢产物时，可采纳不同的发酵方式。

微生物的发酵方式有哪几种？

分批发酵、补料分批发酵、持续发酵

目的基因的取得方式有哪几种？

用反转录法取得目的基因，第一必需取得什么？

cDNA法取得目的基因的优势是什么？

将构建好载体导入动物细胞最经常使用的方式是什么？

反转录法、反转录-聚合酶链反映法和化学合成法

目的基因的mRNA

取得的目的基因编码序列无内含子，目的基因的挑选较容易

磷酸钙沉淀法电穿孔法

基因工程研究中采纳最多的原核表达体系？

基因工程药物多为胞内产物，分离提取时需破碎细胞，经常使用的破碎方式有哪些？

依据依据分子筛作用纯化基因工程药物的色谱方式是什么色谱方式？

大肠杆菌

高压匀浆法高速珠磨法超声破碎法高压挤压法渗透冲击增溶法脂溶法生物破碎法

离子互换层析凝胶过滤层析疏水层析亲和层析

基因工程菌培育中需要有效的手腕来操纵菌体的比生长速度，操纵菌体生长的意义是什么？

发酵培育基中需要的氮源分为速效氮源和迟效氮源，请写出相应的速效和迟效氮源。

工程菌培育可通过选用不同的碳源操纵补料和稀释速度等方式来操纵菌体的生长

操纵菌体的生长对提高质粒的稳固性、减少代谢副产物积存、提高外源蛋白产率有重要意义

速效氮源：

氨基酸和玉米浆迟效氮源：

黄豆饼粉花生饼粉棉籽饼粉蛋白胨酵母粉

动物细胞相较原核细胞作为宿主生产药品的优越性如何？

产物是分泌型，搜集纯化方便

细胞培育的关键之一是避免微生物的污染，有哪几种消毒灭菌方式？

物理灭菌方式：

高压蒸汽灭菌法干热灭菌紫外线灭菌过滤除菌

化学灭菌方式：

甲醛加热熏蒸漂白粉杀菌

植物细胞代谢进程中产物包括生理活性物质和后含物，他们的概念如何？

凡是对人或动物生理现象产生阻碍的活性物质，统称为生理活性物质

细胞在新陈代谢进程中产生的各类无生命的物质，统称为细胞后含物

生物反映器间歇操作进程中，将细胞和培育基一次性加入反映器内进行培育，除不断进行通气和为调剂发酵液的pH而加入酸碱溶液外，与外界没有其它物料互换。

这种培育方式称什么缘故发酵方式？

分批发酵

Ig分子的抗原结合部位是由什么部份一起组成？

VL和VH的CDR区

制备单克隆抗体时同一品系动物免疫的重要性。

很重要！

！

！

目前预防乙型肝炎利用的生物制品属于疫苗，仍是血液制品，仍是类毒素？

疫苗

发酵进程中散失热能的因素有哪些？

蒸发烧辐射热显热

酶经固定化后，酶的活力或结构有无转变？

酶经固定化后，其最适pH值一样会发生什么转变？

生物技术药物、基因表达、质粒割裂不稳固、人一鼠嵌合抗体、次级代谢产物、模拟酶、透析培育、杂交瘤细胞、离子互换层析、固定化酶的名词说明

生物技术药物

一样说来，采纳DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物称为生物技术药物。

基因表达

基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译和所有加工进程。

质粒的割裂不稳固通常将质粒不稳固性分为两类:

一类是结构不稳固性,也确实是质粒由于碱基突变、缺失、插入等引发的遗传信息转变;另一类是分裂不稳固性,指在细胞割裂进程中质粒不能分派到子代细胞中,从而使部份子代细胞不带质粒（即P-细胞）。

在持续和分批培育进程中均能观看到此两类现象发生。

一样情形下具有质粒的细胞（即P＋细胞）需要合成较多的DNA、RNA和蛋白质,因此其比生长速度低于P-细胞,从而P-细胞一旦形成能较快速地生长繁衍并占据培育物中的大多数。

人-鼠嵌合抗体嵌合抗体是最先制备成功的基因工程抗体。

它是由鼠源性抗体的V区基因与人抗体的C

区基因拼接为嵌合基因，然后插入载体，转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。

因其减少了鼠源成份，从而降低了鼠源性抗体引发的不良反映，并有助于提高疗效。

次级代谢产物次级代谢产物是指生物生长到一按时期后通过合成的分子结构十分复杂、对该生物无明显生理功能，或并非是该生物生长和繁衍所必需的小分子物质

模拟酶用合成高分子来模拟酶的结构、特性、作用原理和酶在生物体内的化学反映进程，从原理的本质概念为是用人工方式合成具有酶性质的一类催化剂

透析培育是对微生物培育用包裹，并使外部有新鲜培育液流动着的一种培育方式

杂交瘤细胞是在制备进程中，用和B而成的细胞。

离子互换层析是以为，依据流动相中的组分离子与互换剂上的平稳离子进行可逆互换时的结合力大小的不同而进行分离的一种层析方式。

固定化酶不溶于水的酶。

是用物理的或化学的方式使酶与水不溶性大分子载体结合或把酶包埋在水不溶性凝胶或半透膜的微囊体中制成的。

酶固定化后一样稳固性增加，易从反映系统中分离，且易于操纵，能反复多次利用。

便于运输和贮存，有利于自动化生产。

基因工程药物生产的大体进程是什么？

目的基因的分离和提取

目的基因与载体结合构建重组体

重组体导入

重组体的筛选、鉴定和分析

目的基因的表达

简述无血清培育基的优势。

1）提高重复性

（2）减少微生物污染

（3）供给充沛稳固

（4）产品易纯化

（5）幸免血清因素对细胞的毒性

（6）减少血清中蛋白对生物测定的干扰

简述单克隆抗体的制备进程

单克隆抗体的制备：

用抗原免疫小鼠骨髓瘤细胞的培育

免疫脾细胞骨髓瘤细胞

在PEG作用下合成杂交瘤细胞

选择培育基（融合的细胞死亡，杂交瘤细胞存活）

阳性克隆的挑选机克隆化

克隆扩增及大量制备McAb

简述固定化酶生产药物的优势和缺点

固定化酶生产药物的优势：

（1）能够多次利用，酶的稳固性提高；

（2）反映后，酶与底物和产物易于分开，产物中无残留酶，易于纯化；

（3）反映条件易于操纵，可实现转化反映的持续化和自动操纵；

（4）酶的利用率高，单位酶催化的底物量增加，用酶量少。

缺点：

（1）固定化进程中，可能会引发酶活性丧失；

（2）只适用于催化可溶性小分子底物的酶促反映，对大分子底物不适合；

（3）通常不适用于多酶反映，尤其是需要辅助因子参与的反映。

分离纯化基因工程药物经常使用的色谱方式有那些？

它们的原理是什么？

分离纯化基因工程药物经常使用的色谱方式有：

离子互换色谱，疏水色谱，亲和色谱和凝胶过滤色谱；

离子互换色谱，以离子互换剂为固定相，依据流动相中的组分离子和互换剂上的平稳离子进行可拟互换时的结合力大小的不同而进行分离的一种色谱方式；

疏水色谱，利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团彼此作使劲的不同对蛋白质组分进行分离的色谱方式；

亲和色谱：

利用固定化配体与目的蛋白质之间超级特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件能够使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质；

凝胶过滤色谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方式。

简述生物技术制药的大体特性。

生物技术药物的特点是：

（1）分子结构复杂

（2）具有种属不同特异性

（3）医治针对性强、疗效高

（4）稳固性差

（5）免疫原性

（6）基因稳固性

（7）体内半衰期短

（8）受体效应

（9）多效应和网络效应

（10）查验特殊性

依照真核基因在原核细胞中表达的特点，表达载体必需具有那些条件？

表达载体必需具有以下条件：

（1）能够独立的复制；

（2）具有灵活的克隆位点和方便的挑选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和挑选；

（3）应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RAN聚合酶所识别；

（4）应具有阻遏子

（5）应具有很强的终止子

（6）所产生的mRNA必需具有翻译的起始信号。

植物细胞培育的培育基由哪些要紧成份组成？

植物细胞或组织培育基常含有无机盐、碳源、有机氮源、植物生长激素、维生素等成份。

（1）无机盐有大量元素和微量元素，30毫克每升为界限，大量有氮、硫、磷、钾、镁、钙、氯、钠。

微量有铁、锰、碘、钼、铜、锌。

（2）碳源经常使用碳源为碳水化合物、肌醇、甘油、乳糖和半乳糖。

天然提取物如椰子乳、对愈伤组织的诱导和培育也有重要意义。

（3）植物生长调剂剂常见的植物激素有生长素、割裂素、赤霉素、脱落酸、乙烯。

（4）有机氮源经常使用蛋白质水解物或各类氨基酸，有机氮源对细胞的初期生长有利，氨基酸的加入是为了代替或增加氮源的供给。

（5）维生素通常是维生素自养型，但大多数不能满足需要

请简述HAT培育基挑选杂交瘤细胞的挑选原理。

HAT培育基挑选杂交瘤细胞的原理HAT培育基是指含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶脱氧核苷三种物质的细胞培育基。

利用HAT培育基挑选杂交瘤细胞

（1）经融合后细胞将以多种形式显现：

融合的脾细胞—瘤细胞、融合的脾细胞—脾细胞、融合的瘤细胞—瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞和细胞的多聚体形式等。

正常的脾细胞在培育基中存活仅5～7天，无需专门挑选，细胞的多聚体形式也容易死去。

而未融合的瘤细胞那么需进行专门的挑选去除。

（2）融合所用的瘤细胞是经毒性培育基选出的中间合成途径缺失株（例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株），即只有起始合成途径。

效应B细胞虽不增殖，但有两条DNA合成途径。

（3）氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻碍起始合成途径。

HAT培育基中含有氨基蝶呤时，细胞只有中间合成途径，因此必需供给核苷酸。

杂交瘤细胞的起始合成途径被氨基喋呤阻断，但可通过中间合成途径利用以培育基中次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷为原料进行合成。

而缺失中间合成途径的瘤细胞，失去增殖能力。

从而选择出杂交瘤细胞。

生物技术在制药中有那些应用?

生物技术应用于制药工业可大量生产廉价的防治人类重大疾病及疑难症的新型药物，具体体此刻以下几个方面：

（1）基因工程制药，利用基因工程技术可生产出具有生理活性的肽类和蛋白质类药物，基因工程疫苗和抗体，还可成立更有效的药物挑选模型，改良现有发酵菌种，改良生产工艺，提供更准确的诊断技术和更有效的医治技术等。

随着基因技术的进展，应用前景会更广漠。

（2）细胞工程和酶工程制药

该技术的进展为现代制药技术提供了更壮大的技术手腕，令人类可操纵或干与生物体第一次生代谢产物和生物转化等进程，使动植物能更有效的知足人类健康方面的需求。

（3）发酵工程制药

发酵工程制药的进展要紧体此刻对传统工艺的改良，新药的研制和高效菌株的挑选和改造等。