抗菌药物敏感试验.docx

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抗菌药物敏感试验

1．目的

规范肠杆菌科细菌纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。

2.适用范围

本操作规程适用于肠杆菌科细菌。

3.选药原则

在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。

3.1现行版本的CLSIM02和M100对肠杆菌科细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。

3.2细菌耐药监测网每年发布的监控要求。

3.3本单位上一年度肠杆菌科细菌耐药监控数据。

4.质控

用大肠埃希菌ATCC25922和大肠埃希菌ATCC35218（用于β内酰胺/β内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。

质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

5.材料和仪器

M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。

6．操作步骤

参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

7.判断标准

见表1

表1：

杆菌科细菌纸片扩散试验判断标准

药敏纸片

判断标准（mm）

备注

敏感（S）

中介（I）

耐药（R）

氨苄西林（10μg）

≥17

14～16

≤13

参见结果解释

哌拉西林（100μg）

≥21

18～20

≤17

氨苄西林/舒巴坦（10/10μg）

≥15

12～14

≤11

哌拉西林/他唑巴坦（100/10μg）

≥21

18～20

≤17

头孢唑啉（30μg）

≥18

15～17

≤14

头孢克洛（30μg）

≥18

15～17

≤14

头孢呋辛（30μg）

≥18

15～17

≤14

头孢噻肟（30μg）

≥23

15～22

≤14

参见结果解释

头孢他啶（30μg）

≥18

15～17

≤14

参见结果解释

头孢吡肟（30μg）

≥18

15～17

≤14

头孢他啶/克拉维酸（30/10μg）

参见结果解释

头孢噻肟/克拉维酸（30/10μg）

参见结果解释

亚胺培南（10μg）

≥16

14～15

≤13

参见结果解释

美罗培南（10μg）

≥16

14～15

≤13

参见结果解释

阿米卡星（30μg）

≥17

15～16

≤14

参见结果解释

庆大霉素（10μg）

≥15

13～14

≤12

参见结果解释

环丙沙星（5μg）

≥21

16～20

≤15

参见结果解释

左氧氟沙星（5μg）

≥17

14～16

≤13

参见结果解释

复方新诺明（1.25/23.75μg）

≥16

11～15

≤10

参见结果解释

呋喃妥因（300μg）

≥17

15～16

≤14

头孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）

≥21

16～20

≤15

8.注意事项

8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。

药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。

测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。

变形杆菌属细菌可蔓延生长到某些抗菌药物的抑菌圈中，在量取抑菌圈直径时可忽略抑菌圈中薄的蔓延生长区域。

测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。

8.2沙门菌属和志贺菌属的细菌对一、二代头孢菌素及头霉素体外试验敏感，但临床治疗无效，因此不报告敏感。

8.3肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属的细菌在使用三代头孢菌素治疗的过程中会产生耐药性，因此原本敏感的菌株可能会在使用抗菌药物治疗3-4日时产生耐药性，因此重复进行药物敏感试验是必要的。

9.结果解释

9.1分离自粪便标本的志贺菌属和沙门菌属的细菌仅需进行氨苄西林、一种氟喹诺酮类药物及复方新诺明的药物敏感试验，如从肠道外标本中分离到这些菌株，还需增加氯霉素和1种三代头孢菌素的药物敏感试验。

9.2对于脑脊液中分离到的肠杆菌科细菌，必须进行头孢他啶和头孢噻肟的药物敏感试验，以代替头孢噻吩和头孢唑啉的药物敏感试验。

9.3对于沙门菌属和志贺菌属的细菌而言，氨基糖苷类抗菌药物可能在体外表现有抗菌活性，但在临床上无抗感染作用，所以这些细菌不能报告对氨基糖苷类抗菌药敏感。

9.4肠道外沙门菌感染的病人所分离的沙门菌属细菌如对萘啶酸耐药，而对氟喹诺酮类敏感，在临床使用氟喹诺酮类时可能会治疗失败或对抗感染治疗反应迟缓。

因此对肠道外感染的沙门菌属细菌需要检测其对萘啶酸的耐药性。

如在临床上分离到这种细菌，应通知临床医师避免使用氟喹诺酮类药物。

9.5有关产ESBL大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形杆菌的筛选和确证试验参见CLSIM100-S19中的附件A。

9.6有关产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的筛选和确证试验参见CLSIM100-S19中的附件G。

参考文献

[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:

ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009

[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：

东南formn大学出版社，2006

1．目的

规范假单胞菌属细菌纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。

2.适用范围

本操作规程适用于假单胞菌属细菌。

3.选药原则

在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。

3.1现行版本的CLSIM02和M100对假单胞菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。

3.2细菌耐药监测网每年发布的监控要求。

3.3本单位上一年度假单胞菌属细菌耐药监控数据。

4.质控

用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β内酰胺/β内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。

质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

5.材料和仪器

M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。

6．操作步骤

参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

7.判断标准

见下表1。

表1假单胞菌属细菌纸片扩散试验判断标准

药敏纸片

判断标准（mm）

备注

敏感

中介

耐药

哌拉西林（100μg）

≥18

≤17

参见结果解释

哌拉西林/他唑巴坦（100/10μg）

≥18

≤17

头孢哌酮（75μg）

≥21

16～20

≤15

头孢他啶（30μg）

≥18

15～17

≤14

头孢吡肟（30μg）

≥18

15～17

≤14

亚胺培南（10μg）

≥16

14～15

≤13

美罗培南（10μg）

≥16

14～15

≤13

氨曲南（30μg）

≥22

16～21

≤15

阿米卡星（30μg）

≥17

15～16

≤14

参见结果解释

庆大霉素（10μg）

≥15

13～14

≤12

参见结果解释

环丙沙星（5μg）

≥21

16～20

≤15

参见结果解释

多粘菌素（300U）

≥12

≤11

头孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）

≥21

16～20

≤15

8.注意事项

8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。

药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。

测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。

8.2分离自囊性纤维化病人的铜绿假单胞菌的纸片扩散法药敏试验结果可靠，但药敏平板一定要孵育足24小时后方可报告。

8.3铜绿假单胞菌在抗感染治疗期间会产生耐药性，因此初分离到的敏感菌在抗感染治疗3-4日后应重复进行药物敏感试验。

9.结果解释

对青霉素类药物，敏感的试验结果提示在临床治疗铜绿假单胞菌严重感染时应使用高剂量的治疗方案。

单剂治疗可能会失败，这时应考虑联合使用其他菌株对其敏感的抗感染药物，如氟喹诺酮类或氨基糖苷类。

参考文献

[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:

ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009

[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：

东南formn大学出版社，2006

1．目的

规范不动杆菌属细菌纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。

2.适用范围

本操作规程适用于不动杆菌属。

3.选药原则

在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。

3.1现行版本的CLSIM02和M100对不动杆菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。

3.2细菌耐药监测网每年发布的监控要求。

3.3本单位上一年度不动杆菌属细菌耐药监控数据。

4.质控

用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β内酰胺/β内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。

质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

5.材料和仪器

M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。

6．操作步骤

参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

7.判断标准

见下表1。

表1假单胞菌属细菌纸片扩散试验判断标准

药敏纸片

判断标准（mm）

备注

敏感

中介

耐药

哌拉西林（100μg）

≥21

18～20

≤17

哌拉西林/他唑巴坦（100/10μg）

≥21

18～20

≤17

头孢他啶（30μg）

≥18

15～17

≤14

头胞噻肟（30μg）

≥23

15～22

≤14

头孢吡肟（30μg）

≥18

15～17

≤14

亚胺培南（10μg）

≥16

14～15

≤13

美罗培南（10μg）

≥16

14～15

≤13

阿米卡星（30μg）

≥17

15～16

≤14

庆大霉素（10μg）

≥15

13～14

≤12

环丙沙星（5μg）

≥21

16～20

≤15

头孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）

≥21

16～20

≤15

8.注意事项

抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。

药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。

测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。

测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。

参考文献

[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:

ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009

[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：

东南formn大学出版社，2006

文件编号：

元谋县人民医院版本：

第一版

微生物室作业指导书生效日期：

2011-11-01

共2页

1．目的

规范嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。

2.适用范围

本操作规程适用于嗜麦芽窄食单胞菌。

3.选药原则

在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。

3.1现行版本的CLSIM02和M100对嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。

3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。

3.3本单位上一年度嗜麦芽窄食单胞菌耐药监控数据。

4.质控

用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β内酰胺/β内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。

质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

5.材料和仪器

M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。

6．操作步骤

参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

7.判断标准

见下表1。

表1嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散试验判断标准

药敏纸片

判断标准（mm）

备注

敏感

中介

耐药

米诺环素（30μg）

≥19

15～18

≤14

左氧氟沙星（5μg）

≥17

14～16

≤13

复方新诺明（1.25μg/23.75μg）

≥16

11～15

≤10

头孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）

≥21

16～20

≤15

8.注意事项

抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。

药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。

测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。

测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。

参考文献

[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:

ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009

[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：

东南formn大学出版社，2006

文件编号：

元谋县人民医院版本：

第一版

微生物室作业指导书生效日期：

2011-11-01

共2页

1．目的

规范洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。

2.适用范围

本操作规程适用于洋葱伯克霍尔德菌。

3.选药原则

在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。

3.1现行版本的CLSIM02和M100对洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。

3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。

3.3本单位上一年度洋葱伯克霍尔德菌耐药监控数据。

4.质控

用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β内酰胺/β内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。

5.材料和仪器

M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。

6．操作步骤

参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

7.判断标准

见下表1。

表1洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散试验判断标准

药敏纸片

判断标准（mm）

备注

敏感

中介

耐药

头孢他啶（30μg）

≥21

18～20

≤17

美罗培南（10μg）

≥20

16～19

≤15

米诺环素（30μg）

≥19

15～18

≤14

左氧氟沙星（5μg）

≥17

14～16

≤13

复方新诺明（1.25μg/23.75μg）

≥16

11～15

≤10

头孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）

≥21

16～20

≤15

8.注意事项

抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。

药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。

测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。

测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。

参考文献

[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,PA:

ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2009

[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：

东南formn大学出版社，2006

1．目的

规范葡萄球菌属纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。

2.适用范围

本操作规程适用于葡萄球菌属的细菌。

3.选药原则

在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。

3.1现行版本的CLSIM02和M100对葡萄球菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。

3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。

3.3本单位上一年度葡萄球菌属细菌耐药监控数据。

4.质控

纸片药敏试验应使用金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠埃希菌ATCC35218（用于β内酰胺/β内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。

5.材料和仪器

M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。

6．操作步骤

根据CLSIM2-A10和M100-S19制定本操作步骤。

6.1菌液制备从孵育了18-24小时的非选择性培养基（如血琼脂）平板上，挑取单个菌落，直接用无菌生理盐水制成悬液作为接种物，将浊度调整至0.5麦氏标准。

应在接种物制备后15分钟内接处M-H琼脂平板。

用无菌棉拭蘸取菌液，在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在琼脂表面均匀涂片接种3次，每次旋转平板60度以确保接种菌的均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。

6.2接种好的平板可敞开盖子在室温下干燥3-5分钟（不要超过15分钟），然后用镊子将纸片放入琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触。

各纸片中心相距应大于24mm，通常150mm平板至多放置12个纸片，90-100mm平板至多放置6个纸片。

由于某些药物在纸片放入琼脂平板后几乎无扩散，所以一旦纸片放入后就不能再移动，若要重新放置，可用一个新的纸片放在平板的另一位置。

6.3应在纸片贴好后15分钟内将平板倒置放入35℃孵箱，若超过15分钟将使纸片中的抗生素提早扩散。

非苛养菌的药敏解释性标准是建立在这些菌株在空气中孵育的基础上，一些药物（如氨基糖苷类、大环内酯类和四环素）的抑菌圈直径受CO2的影响会有较大的改变，所以本菌属细菌不能孵育在CO2孵箱。

参见《药物敏感性试验标准操作规程》。

7.判断标准

见表1。

表1葡萄球菌属细菌纸片扩散试验判断标准

药敏纸片

判断标准（mm）

敏感

中介

耐药

备注

青霉素（10U）

≥29

≤28

参见结果解释9.1、9.3

氨苄西林/舒巴坦（10/10μg）

≥15

12～14

≤11

参见结果解释9.3

头孢唑啉（30μg）

≥18

15～17

≤14

参见结果解释9.3

头孢西丁（30μg）

≥22

≥25

≤21

≤24

金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌，参见结果解释9.2、9.3

路邓葡萄球菌以外凝固酶阴性葡萄球菌，参见结果解释9.2、9.3

红霉素（15μg）

≥23

14～22

≤13

克林霉素（2μg）

≥21

15～20

≤14

参见结果解释9.4

替考拉宁（30μg）

≥14

11～13

≤10

参见结果解释9.5

庆大霉素（10μg）

≥15

13～14

≤12

左氧氟沙星（5μg）

≥19

14～18

≤13

复方新诺明（1.25/23.75μg）

≥16

11～15

≤10

利福平（5μg）

≥20

17～19

≤16

参见结果解释9.6

利奈唑胺（30μg）

≥21

参见结果解释9.7

8.注意事项

8.1抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。

药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。

但利奈唑胺和苯唑西林纸片应使用透射光源进行观测。

测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。

测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。

如苯唑西林、利奈唑胺抑菌圈内任何可辨别的菌落生长，则报告该菌株对相应抗菌药耐药。

8.2在直接从血平板上挑取菌落配制细菌悬液时需注意，来自血琼脂培养基的菌落可能带有足够的甲氧苄啶或磺胺拮抗物，因此细菌可在甲氧苄啶/磺胺甲唑抑菌圈内部沿着敏感菌株的周围产生模糊生长。

8.3MRS检测的要点提示：

用30μg头孢西丁纸片检测MRS；用直接菌落悬液（DCS）接种法（而不是生长法）；在33-35℃（不超过35℃）、空气中孵育，金黄色葡萄球菌18小时，凝固酶阴性葡萄球菌24小时；用反射光仔细查看抑菌圈，如有任何小菌落或薄膜出现均报告为耐药；如果怀疑可能为MRSA，需用OXA-NaCl筛选试验确认，培养基中必须加NaCl（2%W/V）；MRS必须报告对所有头孢类和其他β内酰胺类抗菌药物均耐药，并提示可能对氨基糖苷类、大环内酯类、克林霉素和四环素等抗菌药物多重耐药；携带mecA基因，或产生PBP2a的葡萄球菌菌株，必须报告为MRS。

9.结果解释

9.1对于青霉素抑菌圈直径≥29mm的菌株，需要检测该菌株是否产诱导性β内酰胺酶，非产酶菌株才可报告为敏感，见产色素头孢菌素试验标准操作规程。

9.2头孢西丁纸片代替苯唑西林纸片用于试验，根据头孢西丁的试验结果报告苯唑西林的敏感、中介或耐药。