pcr实习自我鉴定共28页.docx
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pcr实习自我鉴定共28页
pcr实习自我鉴定
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篇一：
关于PCR总结
PCR总结
若模板为环状质粒，最好先用酶将其切开成线性分子。
酵母、细菌及质粒基因组，每次反应的模板最大加入量分别为10ng，1ng和1pg。
引物的设计原则
1．引物的长度应适宜，一般要求18~25bp，一对引物中两个引物之间的长度差异应小于3bp。
2．基本成分：
G+C的含量一般为40%~60%。
四种碱基应随机的分布，避免碱基堆积的现象。
尤其引物的3’端，不应有连续的3个G或C，否则会使引物与核酸的G或C富集区互补从而影响PCR的特异性。
3．引物自身：
引物自身不应有反向重复序列或者大于3bp的自身互补序列，否则引物自身会折叠形成发夹结构，将影响引物与待增DNA中的靶序列的杂交结合。
4．引物之间：
引物之间不应存在互补序列，尤其应避免3’端的互补重叠以免形成引物二聚体。
由于PCR反应体系中含有高浓度的引物，即使引物之间存在极为微弱的互补作用也会使引物相互杂交，最终得到引物二聚体的扩增产物。
若引物二聚体在PCR反应的早期形成，它们将通过竞争DNA聚合酶、引物及四种单核苷酸从而抑制待增DNA的扩增。
通过精心设计引物、应用热启动PCR（hotstartPCR）或者降落PCR（touchdownPCR）及特制的DNA聚合酶，可以减少引物二聚体的生成。
5．3’末端：
引物的3’端（羟基端）是引发延伸的起点，因此一定要与模板准确配对，应尽量避免在引物3’端的第一位碱基是A。
引物3’端最佳碱基的选择是G和C，因为他们形成的碱基配对比较稳定。
6．溶解温度：
3’端引物和5’端引物应有相似的Tm值（不同序列的DNA，Tm值不同。
DNA中G-C含量越高，Tm值越高，成正比关系。
），其差别不应大于5℃。
扩增产物与引物的Tm值的差别应小于10℃，以确保PCR循环中的扩增产物有效的变性。
8.引物的特异性：
引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个碱基同源。
9．引物的简并性：
引物的3’端应为保守的氨基酸序列，即采用简并密码较少的氨基酸如Met、Trp，且要避免体密码第三个碱基的摆动位置位于引物的3’端。
设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。
引物的用量
在PCR反应体系中，引物的浓度一般要求在~μM之间，这一引物浓度足以使1kb的DNA片段在PCR反应体系中循环扩增30次。
引物浓度过低，则产物量低；引物浓度过高则会促进引物二聚体的形成以及非特异性产物的形成。
反应缓冲系统
反应缓冲系统提供PCR反应所必需的合适的酸碱度和某些离子。
目前最常用的缓冲液是10~50mmol/L的Tris-HCl（~，20℃），在72℃时，其pH值为左右。
反应缓冲系统中还含有KCl，50mM以内的KCl有利于引物的退火，而50mM以上的KCl则抑制TaqDNA聚合酶的活性。
然而，也有人认为含有50mMKCl的缓冲系统有利于大于500bp的DNA片段的扩增，然而将缓冲系统中的KCl浓度提高到70~100mM则有利于提高较小的DNA片段的扩增产量。
Mg2+
反应体系中Mg2+浓度低时，酶的活力显著降低；过高时，酶则催化非特异性扩增。
此外，Mg2+浓度还影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度、产物的特异性、引物二聚体的生成等。
值得注意的是，由于PCR反应体系中的DNA模板、引物和dNTP磷酸基团均可与Mg2+结合从而降低Mg2+的实际浓度，因此一般Mg2+的加入量应比dNTP的总浓度高~/L。
dNTPs
许多厂商出售专门用于PCR的dNTP（deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核
储存液。
这种储存液具有较强的酸性而不含焦磷酸盐，其目的是保护dNTP在储存液的冷冻和加热期间受到破坏。
因此在使用前应用NaOH将pH值调至~。
无论是自配的还是购买的dNTPs溶液在储存前都应分成较小的几份，然后在-20℃下储存，经过两次冷冻-加热循环后储存液就必须丢弃。
若长期在-20℃下冻存，储存液中的少量的水分会蒸发而后凝结在储存容器上，因此储存dNTP液的容器在加热后应在微型离心机中离心数十秒以减少dNTP浓度的变化。
PCR的反应条件的选择
退火温度确定后，退火的时间并不是关键性的因素，但也应加以控制。
退火时间过短，会导致延伸失败；而退火时间太长会增加引物与模板间的非特异性结合。
目的序列上并不存在的附加序列，如限制位点和启动子序列，可以加入到引物5'端而不影响特异性。
当计算引物Tm值时并不包括这些序列，但是应该对其进行互补性和内部二级结构的检测。
引物的另一个重要参数是熔解温度（Tm）。
这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。
Tm对于设定PCR退火温度是必需的。
在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。
合理的退火温度从55℃到70℃。
退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。
设定Tm有几种公式。
表5列出确定引物Tm最常用的两种方法。
第一个公式来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。
第二个公式根据GC含量估算Tm。
确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。
这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。
大部分计算机程序使用近邻分析法。
表5.估算Tm的公式
如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃。
或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后再根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。
这使得在较为严谨的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。
递减PCR通过在PCR的前几个循环使用严谨的退火条件提高特异性。
循环在比估算的Tm高大约5℃的退火温度下开始，然后每个循环降低1℃到2℃，直到退火温度低于Tm5℃。
只有同同源性最高的目的模板会被扩增。
这些产物在随后的循环中继续扩增，并会将扩增的非特异性产物排挤出去。
递减PCR对于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法较为有用，如AFLPDNA指纹分析
通常的PCR反应体系中，dNTP的浓度应在20~200μmol/L之间，在此范围内，PCR的产量、特异性和忠实性之间的平衡最佳。
由于Taqpol没有校正阅读功能，在扩增过程中可引起碱基错配，通常可应用低浓度的dNTP（各20μmol/L）、/L的Mg2+浓度、高于55℃的复性温度，可提高Taqpol的忠实性。
此时的平均错配率仅为5×10-6次/核苷酸循环（通常30次循环的Taqpol的错配率约为%）。
在其它参数最佳的时候，每100μl反应液中加入1~的Taqpol为最佳。
通常在100μl的反应体积中加入~5U酶的范围内试验酶的最佳浓度。
循环参数
1.变性：
变性的温度取决于模板DNA分子的G+C含量和DNA聚合酶的热稳定性，而变性的时间与模板DNA链的长度及DNA聚合酶的热稳定性有关。
在90℃~97℃的温度范围内，即使再复杂的DNA分子也可以变性成为单链。
通常的变性温度和时间分别为95℃、30秒，有时用97℃、15秒。
尽管DNA在其链分解温度（strandseparationtemperature，Tss）时的变性只需几秒钟，然而要使反应管内部达到Tss还需要一定的时间，因此需要延长变性时间。
通常在加入耐热DNA聚合酶之前先使模板在97℃下变性7~10min，再按94℃或95℃的温度进入循环。
通常G+C含量约为55%的线性模板DNA分子的变性温度和时间为94~95℃45秒。
扩增100~300bp的短片段时，可用简便、快速的两步PCR法，同时在5~10个循环后，可将变性温度降至87℃~90℃以改善PCR的产量。
此外，由于环状DNA复性太快，通常待扩增的环状质粒DNA模板在扩增前最好先酶切线性化。
2.退火：
合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右。
通常引物与模板的退火温度在45~55℃之间，一般情况下在Tm值允许的范围内选择偏高的退火温度以提高PCR反应的特异性。
优化退火温度的最理想的方法是设置一系列的对照反应。
即通过在低于计算出的引物Tm值2℃到10℃的温度范围内进行退火的一系列平行反应来确定最佳退火温度。
此外我们还可以通过在低于计算出的引物Tm值2℃到10℃的范围内由高到低的设定同一反应体系中连续的不同循环的退火温度从而确定最佳退火温度，即降落PCR。
3.延伸：
延伸温度取决于所使用的耐热DNA聚合酶的最适作用温度，一般为70~75℃。
通常扩增1kb以内的DNA片段延伸1min即可，而当待增序列长达3~4kb时，则需延长3~4min；然而当扩增小于150bp的片段时则可以省略延伸步骤，因为在退火温度下TaqDNA聚合酶的活性已足以完成靶序列的合成。
应注意在前几轮循环中的延伸时间要足够，以使靶序列延伸完全从而提高PCR反应的特异性。
此外当待扩增DNA的浓度较低时，由于碱基掺入率较低，可适当的延长反应延伸时间。
4.循环次数：
当待增靶序列数分别为3×105、×104、1×103和50拷贝分子时，最适循环数分别为25~30、30~35、35~40和40~45次。
降低错配几率
通常在反应体系中加入的模板数应为102~105拷贝，以降低错配几率。
当反应体系中的dNTP浓度明显低于Km值（dNTP1mmol/L）时则会促进错配碱基的延伸。
因此，在PCR反应体系中应采用较高浓度的dNTP，且四种dNTP的浓度应相同。
通常，当每种dNTP浓度为10~50μmol/L时，能够最大程度的保持PCR反应的忠实性。
标准的PCR反应体系：
10×扩增缓冲液10ul
4种dNTP混合物各200umol/L
引物各10～100pmol模板DNA～2ug
TaqDNA聚合酶
Mg2+/L
加双或三蒸水至100ul
引物量：
每条引物的浓度～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
dNTP的质量与浓度dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。
dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1MNaOH或1MTris－HCL的缓冲液将其PH调节到～，小量分装，-20℃冰冻保存。
多次冻融会使dNTP降解。
在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等（等摩尔配制）。
Mg2+浓度Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为～/L为宜。
Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低TaqDNA聚合酶的活性，使反应产物减少。
最佳的镁离子浓度对于不同的引物对和模板都不同，但是包含200μMdNTP的典型PCR起始浓度是。
较高的游离镁离子浓度可以增加产量，但也会增加非特异性扩增，降低忠实性。
为了确定最佳浓度，从1mM到3mM，以递增，进行镁离子滴定。
PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。
PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够的。
3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。
延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。
对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。
引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。
引物的稳定性依赖于储存条件。
应将干粉和溶解的引物储存在-20℃。
以大于10μM浓度溶于TE的引物在-20℃可以稳定保存6个月，但在室温（15℃到30℃）仅能保存不到1周。
干粉引物可以在-20℃保存至少1年，在室温（15℃到30℃）最多可以保存2个月。
1、先按以下经验公式稀释引物：
2000×OD/引物长度（bp）=加水体积（μl），这样稀释出的引物浓度为50μM（记得配引物前，干粉状引物一定要先离心）；
2、配制PCR反应Mix，体系如下（以配100次反应为例）：
10×buffer（含镁离子）:
μl
dNTPs（10mM）:
μl
F-prime（50μM）:
μl
R-prime（50μM）:
μl
补水至总体积为5μl
以上各物质均乘100，即配成100次反应Mix，混匀，-20度冻存备用。
3、需要做PCR时，取出Mix，配制反应体系如下：
水：
18μl
Mix：
5μl
模板：
1μl
酶（1U/μl）：
1μl
总体积25μl，混匀即可。
篇二：
实习总结
****学院
姓名：
学院：
专业：
班级：
学号：
本科生毕业实习总结
20xx年6月7日
篇三：
医学检验实习自我鉴定
《浙江大学优秀实习总结汇编》医学检验岗位工作实习期总结转眼之间，两个月的实习期即将结束，回顾这两个月的实习工作，感触很深，收获颇丰。
这两个月，在领导和同事们的悉心关怀和指导下，通过我自身的不懈努力，我学到了人生难
得的工作经验和社会见识。
我将从以下几个方面总结医学检验岗位工作实习这段时间自己体
会和心得：
一、努力学习，理论结合实践，不断提高自身工作能力。
在医学检验岗位工作的实习过程中，我始终把学习作为获得新知识、掌握方法、提高能
力、解决问题的一条重要途径和方法，切实做到用理论武装头脑、指导实践、推动工作。
思
想上积极进取，积极的把自己现有的知识用于社会实践中，在实践中也才能检验知识的有用
性。
在这两个月的实习工作中给我最大的感触就是：
我们在学校学到了很多的理论知识，但
很少用于社会实践中，这样理论和实践就大大的脱节了，以至于在以后的学习和生活中找不
到方向，无法学以致用。
同时，在工作中不断的学习也是弥补自己的不足的有效方式。
信息
时代，瞬息万变，社会在变化，人也在变化，所以你一天不学习，你就会落伍。
通过这两个
月的实习，并结合医学检验岗位工作的实际情况，认真学习的医学检验岗位工作各项政策制
度、管理制度和工作条例，使工作中的困难有了最有力地解决武器。
通过这些工作条例的学
习使我进一步加深了对各项工作的理解，可以求真务实的开展各项工作。
二、围绕工作，突出重点，尽心尽力履行职责。
在医学检验岗位工作中我都本着认真负责的态度去对待每项工作。
虽然开始由于经验不
足和认识不够，觉得在医学检验岗位工作中找不到事情做，不能得到锻炼的目的，但我迅速
从自身出发寻找原因，和同事交流，认识到自己的不足，以至于迅速的转变自己的角色和工
作定位。
为使自己尽快熟悉工作，进入角色，我一方面抓紧时间查看相关资料，熟悉自己的
工作职责，另一方面我虚心向领导、同事请教使自己对医学检验岗位工作的情况有了一个比
较系统、全面的认知和了解。
根据医学检验岗位工作的实际情况，结合自身的优势，把握工
作的重点和难点，尽心尽力完成医学检验岗位工作的任务。
两个月的实习工作，我经常得到了同事的
好评和领导的赞许。
三、转变角色，以极大的热情投入到工作中。
从大学校门跨入到医学检验岗位工作岗位，一开始我难以适应角色的转变，不能发现问
题，从而解决问题，认为没有多少事情可以做，我就有一点失望，开始的热情有点消退，完
全找不到方向。
但我还是尽量保持当初的那份热情，想干有用的事的态度，不断的做好一些
杂事，同时也勇于协助同事做好各项工作，慢慢的就找到了自己的角色，明白自己该干什么。
这就是一个热情的问题，只要我保持极大的热情，相信自己一定会得到认可，没有不会做。
没有做不好，只有你愿不愿意做。
转变自己的角色，从一位学生到一位工作人员的转变，不
仅仅是角色的变化，更是思想观念的转变。
四、发扬团队精神，在完成本职工作的同时协同其他同事。
在工作间能得到领导的充分信任，并在按时完成上级分配给我的各项工作的同时，还能
积极主动地协助其他同事处理一些内务工作。
个人的能力只有融入团队，才能实现最大的价
值。
实习期的工作，让我充分认识到团队精神的重要性。
团队的精髓是共同进步。
没有共同进步，相互合作，团队如同一盘散沙。
相互合作，团
队就会齐心协力，成为一个强有力的集体。
很多人经常把团队和工作团体混为一谈，其实两
者之间存在本质上的区别。
优秀的工作团体与团队一样，具有能够一起分享信息、观点和创
意，共同决策以帮助每个成员能够更好地工作，同时强化个人工作标准的特点。
但工作团体
主要是把工作目标分解到个人，其本质上是注重个人目标和责任，工作团体目标只是个人目标的简单总和，工作团体的成员不会为超出自己义务范围的结果负责，也不会尝试那种因为
多名成员共同工作而带来的增值效应。
五、存在的问题。
几个月来，我虽然努力做了一些工作，但距离领导的要求还有不小差距，如理论水平、
工作能力上还有待进一步提高，对医学检验岗位工作岗位还不够熟悉等等，这些问题，我决
心实习报告在今后的工作和学习中努力加以改进和解决，使自己更好地做好本职工作。
针对实习期工作存在的不足和问题，在以后的工作中我打算做好以下几点来弥补自己工作中的不足：
1.做好实习期工作计划，继续加强对医学检验岗位工作岗位各种制度和业务的学习，做
到全面深入的了解各种制度和业务。
2.以实践带学习全方位提高自己的工作能力。
在注重学习的同时狠抓实践，在实践中利
用所学知识用知识指导实践全方位的提高自己的工作能力和工作水平。
3.踏实做好本职工作。
在以后的工作和学习中，我将以更加积极的工作态度更加热情的
工作作风把自己的本职工作做好。
在工作中任劳任怨力争“没有最好只有更好”。
4.继续在做好本职工作的同时，为单位做一些力所能及的工作，为单位做出自己应有的
贡献。
篇二：
医学检验自我鉴定范文医学检验自我鉴定
英语水平：
具有一定的英语听说读写能力计算机水平：
国家计算机一级普通话水平：
国家二级
学习经历：
xx年8月至xx年7月尉氏三中xx年9月至xx年7月山东聊城职业技术学院实习经历：
xx年8月至xx年1月在开封市第一人民医院检验科，输血科实习xx年2月至今在开封市淮河医院检验科实习兴趣特长：
对专业理论知识掌握牢固并能熟练应用，对临检室，生化室，免疫室，细胞
室等操作熟练。
擅长乒乓球，喜欢舞蹈，音乐自我评价：
极有耐心，为人诚恳，乐于助人，积极向上，有较强的团队意识和学习能力。
业务知识熟练，社会适应能力强，多才多艺求职意向：
与检验相关职业医学检验个人自我鉴定范文（三）本人在校期间认真完成了本科阶段的专业知识，涉猎了许多医学书刊及文献，熟练的掌
握了基础理论知识及操作技术，有很强的责任心和敬业精神，专业知识过硬，有旺盛的求知
欲，广泛爱好，时间观念强;严于自律，吃苦耐劳;团队亲和力强，有较强的环境适应能力。
具有两年实习经历的我积累了很多的临床经验，熟悉和掌握了各科常见疾病的诊疗常规
及治疗原则，能够正规全面系统的进行体格检查、及时完成医疗文件书写，了解常用药物的
剂量及用法;多次参加危重症患者的抢救，进行了专业的“三基”培训，实习期间可独立完成
检验任务，能够与带教老师达成共识，得到了医院领导及老师的肯定。
可熟练完成临床检验
的基本操作等。
所以我希望找一份与自身知识结构相关的工作，如医学检验技术可以有更大
的空间来证明自己，发展自己!
医学检验专业个人简历自我鉴定范文（四）本人曾在校社团联合会网络信息部和检验学院学生会工作，并担任班干部;在校期间，组
织策划了“广东医学院首届电子贺卡设计大赛”和“广东医学院首届电子竞技大赛”;加入了
检验学院科研小组，成功申请并参与了“高效液相色谱仪检测儿童食品中的色素含量”。
这些经历培养了我良好的领导、管理、协作、交际沟通和创新能力，使我能客观理智地面对问题。
顾全大局，对凡事持寻求解决的态度。
一年的实习工作更是丰富了我的阅历，培养了我开拓创新的思维和解决问题的能力，更
加系统地掌握了临床各项检测的基础理论和基础操作技术，掌握了微生物、病毒的实验检验
原理和操作技术，熟悉专业仪器（如：
pcr仪、酶标仪、icp仪，气质联用色谱仪，高效液相
色谱仪，荧光光谱仪等）的性能和运用，有较强的综合分析能力和动手能力，也具有一定的科
研能力。
我性格开朗、积极上进;具有良好的团队精神和人际关系，对待工作认真负责、勤恳耐劳。
耐心细心，在工作中善于到激励他人的作用，同时善于并热爱与人沟通交流;敢于开拓创新。
有着强烈的事业心与责任感，对人生和事业充满热情和憧憬。
医学检验毕业生个人简历自我鉴定范文（五）我于xx年9月经过普通高考考入南方医科大学（原第一军医大学），本人性格开朗、稳重、
有活力，待人热情、真诚。
工作认真负责，积极主动，能吃苦耐劳。
有较强的组织能力、实际动手能力和团体协作精神，能迅速的适应各种环境，并
融合其中。
认真的学习态度和对本专业的浓厚的兴趣，让我在各方面都表现出色。
从大一开始，我就特别注重在认真学习好理论课的同时，努力培养自身的综合素质，为
学好专业课打下了良好的基矗从理论转为专业,我热爱我的专业并为之投入了巨大的热情和
精力，充分利用课余时间，拓宽知识视野，完善知识结构。
通过阅读大量的课外相关书籍来
充实自己的专业知识。
在竞争日益激烈的今天，我坚信只有多层次，全方位,高要求的发展。
并熟练掌握专业知识的人才，才符合社会发展的需要,才符合用人单位的需求，才符合自身
发展的要求。
在校期间，我还积极参加学院.大学生运动会等多项大型活动，培养了我的交际能力。
使我懂得了如何与人和睦相处。
多年的军校生活造就了我不怕苦不怕累的态度,使我处事更
务实、更有责任感。
实习期间我严格遵守医院的各项制度,积累了丰富的工作经验，和完善
的专业技能.这一切都是我不懈努力的结果，也是我所具有积极进取精神的体现。
相信这将
是我今后的工作的重要经验和宝贵财富。
深厚的专业知识，完整的知识结构，丰富的实践经验，乐观豁达的性格，严谨的军校生
活,超强的团体协作精神和亲和力，定会助我在曲折中顺利完成各项工作任务。
愿贵医院给我一次尝试施展自己潜能的机会，我会尽心尽责，尽我所能，让贵医院满意。
让患者满意!
篇三：
医学检验技术专业实习总结范文《浙江大学优秀实习总结汇编》医学检验技术岗位工作实习期总结转眼之间，两个月的实习期即将结束，回顾这两个月的实习工作，感触很深，收获颇丰。
这两个月，在领导和同事们的悉心关怀和指导下，通过我自身的不懈努力，我学到了人生难
得的工作经验和社会见识。
我将从以下几个方面总结医学检验技术岗位工作实习这段时间自
己体会和心得：
一、努力学习，理论结合实践，不断提高自身工作能力。
在医学检验技术岗位工作的实习过程中，我始终把学习作为获得新知识、掌握方法、提
高能力、解决问题的一条重要途径和方法，切实做到用理论武装头脑、指导实践、推动工作。
思想上积极进取，积极的把自己现有的知识用于社会实践中，在实践中也才能检验知识的有
用性。
在这两个月的实习工作中给我最大的感触就是：
我们在学校学到了很多的理论知识。
但很少用于社会实践中，这样理论和实践就大大的脱节了，以至于在以
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