氨基酸的分离鉴定——纸层析法.ppt

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没有规矩，不成方圆l不缺课，不迟到早退l不能把吃的东西带到实验室l实验前穿上白大褂，扎好头发，书包放到指定地点l做实验要严肃认真，严谨有序，不能打闹嬉戏、或者坐到桌上l实验过程中要接触很多的试剂及仪器，一定要注意安全l实验过程要学会统筹安排，做得既快又好l有问题及时提出l实验做完后把所用器皿清洗干净，桌面恢复原样。

l值日生职责：

桌面，地面，水电门窗撰写实验报告l1实验目的l2原理l3试剂、材料和仪器l4实验步骤l5结果与讨论生化实验是一门专业基础课它涵盖了基本而又经典的4大生化实验技术l层析技术l电泳技术l分光光度技术l离心技术等这些基本的生化技术应用非常广泛实验一实验一氨基酸的分离鉴定氨基酸的分离鉴定纸层析法纸层析法一一【实验目的实验目的】1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层析的原理和操作技术；、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层析的原理和操作技术；2、掌握分配层析法。

、掌握分配层析法。

二二【层析原理层析原理】层析技术是目前广泛应用的一种分离技术，也就是将待分离样品经过层析系统进行分层析技术是目前广泛应用的一种分离技术，也就是将待分离样品经过层析系统进行分离。

离。

层析系统：

固定相，流动相，待分离样品层析系统：

固定相，流动相，待分离样品当流动相通过固定相时，由于样品中各组分当流动相通过固定相时，由于样品中各组分物理化学的性质存在差异物理化学的性质存在差异（比如分配系数、分子极性、分子的形状和大小、带电量，吸附力、分子亲和力等），（比如分配系数、分子极性、分子的形状和大小、带电量，吸附力、分子亲和力等），各组分以各组分以不同的速度不同的速度移动，从而达到分离。

移动，从而达到分离。

1、按固定相的使用形式分类：

（、按固定相的使用形式分类：

（1）柱层析（）柱层析

（2）纸层析（）纸层析（3）薄层层析等）薄层层析等2、按流动相的状态分类：

（、按流动相的状态分类：

（1）液相层析（）液相层析

（2）气相层析；）气相层析；3、按分离过程所主要依据的物理化学性质分类：

、按分离过程所主要依据的物理化学性质分类：

（1）分配层析（）分配层析

（2）离子交换层析（）离子交换层析（3）吸附层析）吸附层析（4）凝胶层析（）凝胶层析（5）亲和层析等。

）亲和层析等。

三三【实验仪器、材料和试剂实验仪器、材料和试剂】1仪器：

烘箱仪器：

烘箱2材料：

毛细管、电热吹风机、层析缸、层析滤纸、喷雾器、材料：

毛细管、电热吹风机、层析缸、层析滤纸、喷雾器、铅笔、直尺等。

铅笔、直尺等。

3试剂：

试剂：

（1）氨基酸标准液：

亮氨酸、脯氨酸、赖氨酸，混合氨基酸）氨基酸标准液：

亮氨酸、脯氨酸、赖氨酸，混合氨基酸

（2）溶剂系统：

正丁醇：

水：

冰乙酸）溶剂系统：

正丁醇：

水：

冰乙酸=4：

2：

1（体积比）（体积比）（3）0.5%的水合茚三酮溶液。

的水合茚三酮溶液。

4【实验步骤实验步骤】1.准备滤纸准备滤纸2.距离底端2cm处划一直线，3.各点间隔2cm,标出各氨基酸点样位置，4.边上空出，以防边缘效应2.2.点样点样：

注意：

注意：

点样用的毛细管和试剂瓶上的氨基酸是一一点样用的毛细管和试剂瓶上的氨基酸是一一对应的，对应的，千万不能混淆，以免污染千万不能混淆，以免污染3.3.层析层析：

点样端朝下，点样处不能没入层析液中，滤纸不能贴壁流动相流动相固定相固定相纸层析原理：

纸层析原理：

流动相，流动相，固定相，固定相，样品样品溶解度溶解度分配系数分配系数移动速率移动速率（Rf值）值）极性与极性与Rf值的关系值的关系层析归类层析归类极性极性分配系数：

一种溶质在两种互不相溶的溶剂中的溶解达到平衡分配系数：

一种溶质在两种互不相溶的溶剂中的溶解达到平衡时在两种溶剂中所具有的浓度之比。

时在两种溶剂中所具有的浓度之比。

固定相：

水固定相：

水流动相：

有机溶剂流动相：

有机溶剂原点至层析点距离原点至层析点距离原点至溶剂前沿的距离原点至溶剂前沿的距离Rf值值=4.4.显色显色切记，在层析结束后马上标出溶剂切记，在层析结束后马上标出溶剂前沿，然后放烘箱烘干前沿，然后放烘箱烘干后均匀喷上后均匀喷上显色剂，显色剂，85烘箱烘箱10min.5.5.测量、计算：

分别测量测量、计算：

分别测量XX、YY值，计算各氨基值，计算各氨基酸的酸的RRff值值,鉴定混合氨基酸中的氨基酸种类。

鉴定混合氨基酸中的氨基酸种类。

LysProLeu混合混合溶剂前沿溶剂前沿原点原点10