新冠核酸检测实验室推荐书模板一.docx
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新冠核酸检测实验室推荐书模板一
新冠核酸检测实验室
建设方案
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项目联系人：
联系方式：
一、新冠核酸建设实验室的建设简介
PCR技术在整个生命科学领域具有很高的先进性，但是，如果缺乏对PCR技术完整深入的了解，以及相应的质量保证措施，就会导致检验结果有很大的主观性和随意性，常常出现假阳性和假阴性。
根据基因扩增检验技术的特点和临床疾病诊断的需要，国家卫生部于2002年1月下发了《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》，对基因扩增检验实验室的设置、技术验收、人员培训、监督管理等作了全面的规定，要求从事临床基因扩增检验的技术人员必须经过上岗培训，持证上岗。
临床基因扩增检验实验室是整个PCR实验的操作场所，它的设置是否合理直接影响到PCR实验结果的准确性，所以它必须按照国家卫生部颁布的《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》进行设置。
标准PCR实验室是一种规格、大小、排列、布局、设置、工作规范、操作程序和管理制度等都一定，且经过多位专家和多家医院反复论证，并符合国家卫生部的《临床基因扩增检测实验室基本设置标准》要求的临床基因扩增检验实验室。
它采用全自动荧光定量PCR检测系统，只要设置三个工作区域，即：
试剂准备区，标本制备区和PCR扩增区。
二、新冠核酸检测PCR实验室建设依据
新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）
GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》
GB50346-2011《生物安全实验室建筑技术规范》
WS233-2017《病原微生物实验室生物安全通用准则》
《临床基因扩增实验室管理暂行办法》卫生部
《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》卫办医政发【2010】194号
《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》
三、了解PCR实验室
如何避免污染是临床基因扩增实验室设计的关键问题。
因此，实验室的布局、空调通风系统设计、风量控制等都是围绕这一核心问题展开的。
（1）现场要求高。
需要标准的四区分离和气流控制：
试剂制备、样品制备、PCR扩增检测和扩增产物检测。
每个独立的实验区都有一个缓冲区。
同时，每个区域均采用气压调节，使试剂和样品在整个PCR实验过程中不受气溶胶污染，减少扩增产物对人和环境的污染。
机械连锁不锈钢传递窗确保试剂和样品在转移过程中不受污染（人员分流）。
（2）人员要求高。
进入PCR实验室，需要接受基础理论、实验原理、标准操作、质量保证、注意事项等方面的标准培训，并取得PCR工作证。
（3）高检测风险。
在检测过程中，由于样品盖的打开、核酸提取的振动和离心作用，可能产生气溶胶，存在感染的风险。
（4）防护要求高。
个人防护必须按照生物安全三级实验室的个人防护要求进行。
四、新冠核酸检测实验室设计参数
区域
洁净度等级
最小换气次数（次/小时）
与室外方向上相邻相通房间最小压差（Pa）
温度（℃）
相对湿度（%）
风速（m/s）
噪声dB（A）
试剂储存和准备区
8
12
+10
18~26
40-60
≤0.15
＜60
样本制备区
8
15
-10
18~26
40-60
≤0.15
＜60
核酸扩增区
8
15
-15
18~26
40-60
≤0.15
＜60
产物分析区
8
15
-20
18~26
40-60
≤0.15
＜60
缓冲间
-
6
0
18~26
40-60
——
＜60
PCR专用走廊
-
6
5
18~26
40-60
——
＜60
一般情况下，PCR实验室没有严格的净化要求，因此有必要根据实验内容来确定实验室的洁净度。
当PCR实验样品需要保护时，实验室应设洁净空调系统。
对于新冠核酸检测实验室，建议设置10万级净化。
五、新冠核酸检测实验室建设的几个关键点
1、建立PCR实验室质量管理体系
根据实验室的具体情况编写质量体系文件，《质量手册》、《程序文件》、《作业指导书》，并保证管理体系运行有效。
管理体系的特点是应有明确的目的、规范的管理、有效的制约、高效的机制、能自我发展的整体。
建立完善的SOP文件，对完成各项质量活动的方法作出规定，每个SOP都应对一个或一组相互关系的活动进行描述。
每个SOP文件应说明该项质量各环节的输入、转换和输出所需的文件、物资、人员、记录以及它们与有关活动的接口关系。
明确每个环节转换过程中各项因素的要求，即由谁做、做什么、做到什么程序、达到什么要求，如何控制、形成什么记录和报告，以及相应的审批手续。
规定在质量活动中需要注意的例外或特殊情况的纠正措施。
SOP应简练、明确和易懂并且工作人员熟练掌握和严格遵守。
2、PCR实验室的相关设置
要完成一组PCR实验，通常需要经过试剂配制、样品处理、核酸扩增和产物分析4个实验过程。
这4个实验过程的实验用房应相邻布置，组成一个独立的PCR实验区。
标准的PCR实验区包括:
试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区、各区配套的缓冲区及公共走廊。
2.1PCR实验室整体平面布局
某医院PCR实验室平面布局如图1所示，整个区域有一个公用走廊，每个独立实验区设有专门的缓冲区。
通过压差控制，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染，并且降低扩增产物对人员和环境的污染。
图表1、某医院PCR实验室平面图
2.2试剂准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。
试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
试剂准备区配备有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，计算冷负荷时，需要将它们计算在内。
房间的面积宜控制在15m2~20m2。
本区的压力梯度要求为:
相对正压状态，以防止外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染。
2.3标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
标本制备区配备有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，计算冷负荷时，需要将它们计算在内。
在标本制备区，还需要配备生物安全柜，用于进行提取核酸的操作。
为避免提取的核酸在柜内反复循环，造成标本之间的交叉污染，出现假阳性结果，该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。
生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室，排风经过高效过滤器过滤后直接排至室外，不允许回到安全柜和实验室中。
根据经验，如果实验室内配备生物安全柜，每配备一台，实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。
本区的压力梯度要求为:
相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
2.4扩增室
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。
此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA（来自样本制备区）的加入和主反应混合液（来自试剂贮存和制备区）制备成反应混合液等也可在本区内进行。
在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。
扩增室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪，本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。
在实验室建造过程中，需要给PCR仪配备专门的UPS电源，以保证其正常工作。
该区面积控制在15m2~20m2。
本区的压力梯度要求为:
相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。
个别操作如加样等应在超净台内进行。
建议采用5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。
2.5产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。
如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。
在室内配备通风橱，保证房间内的相对负压，空气从室外流向室内。
该区面积控制在15m²~20m²。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为:
相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
建议采用5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。
3、正负压区域缓冲室的设置
根据压力梯度的要求，试剂配制室和样品处理室为相对正压，扩增室和产物分析室为相对负压，要求正压的区域和要求负压的区域的缓冲室内的压力设计大不相同。
正压缓冲室符合一般正压洁净室的缓冲原则，主要是防止室外环境空气中的气溶胶进入室内。
正压缓冲室的布置如图2所示。
图表2、正压缓冲室的布置图
负压缓冲室则是要求缓冲室对核酸扩增室及产物分析区保持正压，对缓冲室外也保持正压（主要是满足室内净化需要，如室内无洁净要求，此处可以为0压）。
负压缓冲室的布置如图3所示。
图表3、负压缓冲室的布置图
4、污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。
在实际工作中，常见的有以下几种污染类型:
扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。
因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。
工作区域的严格划分，各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
合理的系统设置，合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统;严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。
规范的操作，临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。
清洁工作及时、正确。
实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。
严格的管理:
严格控制进出实验室的人员。
在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服（如不同颜色），当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等;
总之，实验室建设是一个复杂的问题，这里不讨论人员的问题，实验室人员的培养与沉淀，也需要一个过程，在建设的过程中要因地制宜，不要生搬硬套，结合自己的实际慢慢摸索出适合自己发展的建设思路。
科学合理建设实验室，更好的发挥实验室的作用。
五、新冠核酸检测实验室气流组织建议
（1）气流组织宜采用上送下排，送风口和排风口布置应使室内气流停滞的空间降低到最小程度。
（2）在生物安全柜操作面或其他有气溶胶操作地点的上方附件不得设送风口
（3）高效过滤器排风口应设在室内被污染风险最高的区域，单向布置，不得有障碍；
（4）不能以回（排）风夹墙代替排风直管，排风高效过滤装置与排风总管的连接必须全部是实体风管。
六、新冠核酸检测实验室装饰装修
核酸检测实验室有设计理念、装修要求、净化空调系统、通风、自控、工艺设备等几个关键点。
材质：
隔墙及吊顶——净化彩钢板、地面——同质透芯PVC地板、净化实验室专用门、观察窗；
要求：
1.墙面：
光洁、不产尘积尘、耐腐蚀，易清洁消毒、无缝隙；
2.地面：
防静电、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏；
3.阴阳角：
均用圆弧角密封处理；
4.门：
必须设置自动互锁（机械或电子）；
净化空调、通风系统、自控系统
1.避免交叉污染，采用全新风空调系统；
2.样品制备区严格按照BSL-2设计施工；
3.排风系统全部按照要求采用高效过滤器净化；
4.气流组织：
采用上送下排形式；
5.压力梯度控制通过微压差计及精密自控系统控制；
6.实验室入口处显示房间内各项指标参数，并设置偏离报警；
工艺设备
1.实验台下部均留空，无死角；
2.全部采用不锈钢304制作；
3.样品制备区生物安全柜：
BSC-||-B2型；
4.样品制备区设置洗眼装置，必要时应有应急喷淋装置；
5.非接触式操作理念（感应式水龙头、感应式自动门、互锁传递窗等）；
实验室建设涉及到材料选择、稳定性、精度控制等多个技术和知识领域。
不同的实验室由于试验样品和试验方法的不同，对实验室建设有不同的要求。
可以说有很多不同之处。
一个完善的实验室在分析检测中起着重要的作用，对保证实验室工作人员的健康也起着重要的作用。
参考资料：
[1] 中华人民共和国住房和城乡建设部，中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB50591-2010，洁净室施工及验收规范[S].北京:
光明日报出版社，2010.
[2] 许钟麟.空气洁净技术原理（3版）[M].北京:
科学出版社，2004.
[3] 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）.
[4] 刘书庆，谢逢洁.质量管理体系建立与实施维护[J]工业工程，2003.
[5] 2010年，卫生部办公厅关于印发《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》的通知
附件1：
报价报
设备名称
数量
品牌型号
报价
超净工作台
1台
海尔HCB-1300V
42300
高速离心机
1台
嘉利克斯H-15
32000
低温冷藏冷冻冰箱
2台
松下MPR-440F
108200
移液器（0.5-10ul）
3支
艾本德
12850
移液器（5-50ul）
3支
艾本德
12850
移液器（20-200ul）
3支
艾本德
12850
移液器（100-1000ul）
3支
艾本德
12850
自动核酸提取仪
1台
奥盛Auto-Pure96
463000
生物安全柜
1个
上海净安BSC-1500IIB2
55620
低温离心机
1台
嘉利克斯HR-15
48000
涡旋震荡器
1台
大龙mx-s
4500
干式恒温器
1台
博日HB-T2
9960
UPS
2个
深圳正信电子
43655
荧光定量PCR仪
1台
杭州博日FQD-96A
406000
手掌离心机
1台
嘉利克斯LX-6K
3400
紫外杀菌车
4台
江阴飞扬
8000
洗眼器
1台
安徽韦斯304不锈钢壁挂式洗眼器
800
设备部分合计
1276835
新冠核酸检测实验室装修价格，需要根据实际场地来判断，通常按照平米计算8500元/平米。
附件2：
公司资质
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