推荐下载关于牛磺酸对高同型半胱氨酸血症兔动脉粥样硬化的干预研究.docx
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关于牛磺酸对高同型半胱氨酸血症兔动脉粥样硬化的干预研究
【编者按】：
医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果
的论说性文章。
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关于牛磺酸对高同型半胱氨酸血症兔动脉粥样硬化的干预研究
【摘要】目的探讨牛磺酸对高同型半胱氨酸血症（HHcy）兔动脉粥样硬化的干预作
用。
方法采用高L-蛋氨酸饮食方法建立兔HHcy血症模型，补充牛磺酸,以正常家兔为
对照，分别于实验0，4，8周检测各组血清同型半胱氨酸（Hcy）、丙二醛（MDA）、总胆
固醇（TC）、甘油三酯（TG）、一氧化氮（NO）、血栓素B2（TXB2）含量和超氧化物歧化酶
（SOD）活力，并通过血管超声观察腹主动脉血管病理变化。
结果蛋氨酸组第4，8周时
血清Hcy、MDA、TG、TC、ET、TXB2含量显著高于同期NC组（P0.01或P0.05），
而NO含量、SOD活力则明显降低（P0.01）;牛磺酸组Hcy显著高于对照组（P0.01），
MDA、TG、TC、ET、TXB2含量则显著低于蛋氨酸组（P0.01），而NO，SOD比蛋氨
酸组显著增高（P0.01）。
血管超声观察，蛋氨酸组腹主动脉内膜明显增厚、血管平滑肌
细胞增生，弹力纤维断裂、排列紊乱、有斑块形成;牛磺酸组则与NC组比较无显著差
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异。
结论牛磺酸具有拮抗Hcy诱导的损伤效应，有延缓或阻止AS形成作用。
【关键词】牛磺酸;家兔;高同型半胱氨酸血症;动脉粥样硬化
高同型半胱氨酸血症（HHcy）是诱发动脉粥样硬化（AS）疾病的独立危险因素[1]，日益
引起人们的重视。
目前，对HHcy的防治多集中在补充叶酸和维生素B6、B12方面，
而牛磺酸（Taurine,Tau）对HHcy的作用少有报道。
本文采用高蛋氨酸饮食建立兔HHcy
动物模型，观察HHcy致AS形成机制;并分析牛磺酸对HHcy引起AS病理过程的干预
效果，为HHcy的防治，延缓或阻止AS的形成，降低心、脑血管病的发生风险开辟新
途径。
1材料与方法
1.1动物及分组
筛选健康雄性家兔40只（由南阳医学高等专科学校动物中心提供），月龄3～5个月，
体质量在1.5～2.0kg，以标准饲料适应性喂养1周后，随机分为4组，每组10只。
1.2HHcy模型的制备
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动物饲料按每只100g/d计算，分笼饲养，自由饮水。
对照组（NC，喂标准饲料）、
蛋氨酸组（Met组，喂蛋氨酸饲料：
即标饲+2%蛋氨酸制成）、牛磺酸组（Tau组，蛋氨酸
饲料+牛磺酸0.3g/kgd灌服）。
对照组和蛋氨酸组给予等量生理盐水灌胃。
连续喂饲8
周。
L-蛋氨酸、牛磺酸分别购自张家港市华昌药业和上海伯奥生物科技公司。
1.3生化指标检测分别于第0,4,8周末时，自兔耳缘静脉采血2ml，离心后在
TOSHIBA生产TBA-120FR生化分析仪上，用循环酶法检测血浆Hcy含量，MDA、
SOD用比色法测定，TG、TC用酶法测定，NO用硝酸还原酶法测定，TXB2用酶免法
测定。
Hcy、MDA、SOD、TC用试剂盒由北京九强和南京建成公司提供。
1.4血管超声检查应用美国GELg-9彩色多普勒超声诊断仪，血管探头频率为4～10
MHz，分别于第4，8周末进行血管超声检查，测量腹主动脉内-中膜厚度（IMT）、舒张
末期内径（Dd）、收缩末期内径（Ds）和腹主动脉血流峰值（Vp）。
同时观察血管内膜光滑程
度、有无粥样斑块形成。
1.5统计学处理
各组数据用s表示，并用SPSS13.0统计学软件进行处理，组间差异用t检验判定，
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P﹤0.05有统计学意义。
2结果
2.1各组家兔血浆Hcy含量变化Met组在第4，8周末时Hcy均显著高于同期NC（P
0.01），Tau组两时段Hcy含量显著高于NC组（P0.01），但与Met比较无显著差异。
见
表1。
表1各组家兔血浆Hcy含量比较（略）
2.2各组家兔血清TC、TG、MDA、SOD含量变化Met组与NC组同期比较，血清
TG、TC、MDA含量显著升高（P0.05，P0.01），SOD活力明显降低（P0.01）;随着时间延
长Met组TG、TC、MDA含量继续升高。
Tau干预组与Met组同期比较TG、TC、
MDA含量显著下降，SOD活力升高。
见表2。
表2各组家兔血清TG、TC、MDA、
SOD含量比较（略）
2.3各组家兔血清NO、ET、TXB2含量变化实验8周时，Met组血清NO含量显著
低于与NC组（P0.05），ET、TXB2显著升高（P0.05及P0.01），Tau干预组NO含量显
著高于Met组（P0.01），而ET、TXB2明显低于Met组（P0.01）。
见表3。
表3实验8
周各组家兔NO、ET、TXB2含量比较（略）
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2.4各组家兔腹主动脉超声检查结果比较
实验4周时，NC组血管内膜线细、光滑、连续性好;Met组血管内膜欠光滑，边缘不
整齐，有中等偏低回声团块（即软斑形成）;Tau干预组无明显改变。
8周末，Met组血管
IMT明显增厚（P0.01），有偏强回声团，斑块边界不清，Vp显著增快（P0.01）。
Tau组
与Met组比较IMT显著减小，Vp显著减慢（P0.05）。
3讨论
tips:
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【编者按】：
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西归中多糖的提取及含量的测定
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【摘要】目的研究西归多糖的提取工艺并测定多糖的含量。
方法通过正交实验确定
最佳提取工艺，苯酚-硫酸法测定西归总多糖含量。
结果最佳提取工艺为提取次数3
次，固液比1∶10，提取时间1h，提取温度90℃。
西归总多糖含量为32.71%。
结论
该提取工艺合理，测定方法准确。
【关键词】西归;多糖;苯酚-硫酸法
西归是伞形科属植物西藏凹乳芹VicatiathibeticadeBoiss.的干燥根[1]，主要分布于
云南西北部、四川西部及西藏等地。
西归在云南大理有悠久的栽培历史，在大理等地
常作为滋补蔬菜炖肉、炖鸡等食用，鲜品也可生吃,风味独特[2]。
西归含有较多的糖
醇和糖[3]。
多糖（polysaccharide）是构成生命的四大基本物质之一，多糖在增强免疫
力、降血糖、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面发挥着生物活性作用。
因此对多糖的研究与开发已越来越引起人们的广泛关注[4]。
有关西归中多糖的研究尚
未见文献报道。
本文对西归中多糖的提取工艺和含量进行了研究，为合理开发、综合
利用西归资源提供了切实可行的工艺路线。
1仪器与材料
1.1仪器SY-21型电热恒温水浴箱（北京泰克仪器有限公司），TU-1800SPS紫外可见
分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），FA1004-53423电子天平（上海天平仪器厂），
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离心机，真空冷冻干燥机等。
1.2药材与试剂
葡萄糖、乙醇、苯酚、硫酸、氯仿、正丁醇均为AR级。
西归购自云南省大理州鹤
庆县马厂乡，经本院生药教研室周浓老师鉴定为西藏凹乳芹VicatiathibeticadeBoiss.的
干燥根。
2方法与结果
2.1多糖的提取及换算因子测定
2.1.1西归多糖的提取与精制
称取西归粗粉50g，按比例加入蒸馏水，于恒温水浴锅中回流提取，布氏漏斗过
滤，将滤液于旋转蒸发仪上进行浓缩，浓缩至约80ml时，用Savage法除蛋白，即是
向浓缩液中加入1/5V的氯仿和1/25V的正丁醇，强烈振摇30min，以3000r/min离
心15min，除去交界处变性蛋白，水层仍按照此方法反复除蛋白，直至氯仿层与正丁
醇层之间无白色沉淀。
然后在上清液中加入一定量无水乙醇，使乙醇的终浓度达一定
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比例，静置过夜。
沉淀用布氏漏斗抽滤，滤渣以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多
次，沉淀放入真空冷冻干燥机内，冷冻干燥48h，得灰白色粉末状的粗多糖。
2.1.2多糖换算因子测定取粗多糖20mg，精密称定，分别加水溶解并定容至100
ml，精密量取1.0ml，按标准曲线绘制方法操作，利用标准曲线计算单糖浓度，按公
式f=WCD计算换算因子f[W为多糖的重量（mg），C为溶液中单糖的浓度（mg/ml），D
为稀释倍数]。
测得西归多糖的f=0.9863（RSD=1.84%，n=6）。
2.2样品多糖的测定取干燥样品粉末1g，精密称定，至圆底烧瓶中，精密加蒸馏水
10ml，90℃回流提取3次，1h/次，滤过，滤液定容至100ml，精密量取续滤液1.0
ml，按标准曲线绘制方法操作，测定其吸光度，按公式计算：
多糖含量（%）=CDfW1
000100%[C为样品溶液的葡萄糖浓度（mg/ml），D为样品溶液的稀释倍数，W为样品的
重量（g），f为换算因子]。
2.3苯酚试剂的制备取100g苯酚，加入0.1g铝片和0.05g碳酸氢钠，在180～182
℃蒸馏，空气冷凝，得白色针状苯酚结晶。
称取5g此结晶于100ml量瓶中，用蒸馏
水稀释至刻度，摇匀，避光保存，即得浓度为5%的苯酚试剂。
测定波长的选择：
用一定浓度的葡萄糖标准溶液和供试品溶液各1.0ml置具塞试管
中，分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀，然后加入浓H2SO45.0ml，摇匀，另以1.0ml
蒸馏水作为空白液同上操作，沸水浴中恒温15min，取出，冰水浴冷却至室温，在波
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长200～800nm之间扫描。
结果供试品与标准品溶液在487nm波长处均有最大吸收，
故选用487nm为检测波长。
2.4正交实验根据有关资料报道，提取次数（A），固液比（B），提取时间（C），提取温
度（D）4个因素，每个因素3个水平，选用L9（34）正交实验方案提取西归多糖，以多糖
含量为指标确定最佳提取工艺。
因素水平见表1，正交实验结果见表2。
表1西归多糖
提取实验因素水平，表2L9（34）正交实验结果（略）。
由正交实验数据可以得知，各因素对西归总黄酮含量的影响程度不同，其影响大小
依次为：
D（提取温度）B（固液比）A（提取次数）C（提取时间）。
其最佳提取条件为：
A3B1C2D2，即提取次数3次，固液比1∶10，提取时间1h，提取温度90℃时，提取
效果最好。
2.5最佳提取工艺验证
在上述最佳条件下进行3次重复实验。
结果见表3。
表3最佳条件验证实验（略）
从表3可看出，最佳提取工艺条件具有较好重复性，说明该最佳工艺条件是合理、
可靠的。
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2.6方法学考察
2.6.1标准曲线的绘制精密称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖适量，配制成100.4
g/ml的标准贮备液，精密量取1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00，7.00ml置50ml
量瓶中，定容后作为葡萄糖标准溶液。
在具塞试管中依次加入不同浓度的标准葡萄糖
溶液1ml，加苯酚溶液1.0ml，摇匀后加浓硫酸5.0ml，摇匀，沸水浴15min，冰水浴
冷却至室温后，用蒸馏水做空白参比，于487nm波长处测定吸光度。
以吸光度A为纵
坐标，葡萄糖浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：
A=9.311C+0.0004（r=
0.9965）。
结果表明葡萄糖溶液在20.1～120.3g/ml范围内线性关系良好。
2.6.2稳定性实验
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牛磺酸是一种含磺酸基的自由氨基酸，近年研究发现[2]，牛磺酸具有维持渗透压、
清除自由基、抑制脂质过氧化等生物学效应。
本研究Tau组家兔血清MDA、ET、
TXB2含量显著低于Met组，NO含量、SOD活力明显升高，而Hcy含量显著高于NC
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组但
与Met组比较无显著差异;血管超声及组织学观察，血管内膜光滑，IMT比Met组显
著变薄，Vp显著减慢，与NC组比较无显著差异。
结果显示，牛磺酸不仅抑制Hcy诱
导的氧自由基生成[3]和脂质过氧化，降低MDA含量，增加的SOD活力，拮抗Hcy引
起的氧化应激损伤，还可上调NO含量，降低ET、TXB2水平，从而起到舒张血管，
保护内皮细胞。
牛磺酸作为Hcy的生物拮抗剂，可不通过降低血浆Hcy水平而直接拮
抗Hcy引起的血管病变和氧化应激损伤，从而发挥抗AS形成的作用。
综上，高蛋氨酸饮食可诱发家兔HHcy,Hcy升高可通过损伤血管内皮、促进血管平
滑肌增殖等机制，导致AS的发生。
牛磺酸通过抑制Hcy诱导的氧化应激和细胞增
殖，发挥抗AS形成的作用。
更重要的是牛磺酸由蛋氨酸代谢产生，是Hcy的生物拮
抗剂，利用这一内源性拮抗Hcy血管损伤保护剂，可能是防治Hhcy所致心、脑血管
疾病的新策略。
【参考文献】
[1]穆红，陈欣.亚甲基四氢叶酸还原酶基因突变与心脑血管梗死发生的关系[J].国外
医学临床生物化学与检验学分册，2005，26（3）：
145.
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[2]石彦荣，唐朝枢.牛磺酸的跨膜细胞转运[J].国外医学生理.病理科学与临床分册，
2001，61：
453.
[3]常林，赵晶，徐建兴，等.牛磺酸抗同型半胱氨酸诱导的线粒体呼吸链自由基生
成和同型半胱氨酸抑制线粒体牛磺酸转运体[J].中国病理生理杂志，2004，20（7）：
1126.
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