高效液相色谱法同时测定饮料中的9种食品添加剂文档格式.docx

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65:

4，pH6.0，流速1.0ml/min，微量进样器定量进样20μl,实验以保留时间定性，外表物法定量。

2结果与讨论

2..1检测波长选择

用紫外—可见光分光光度计检测器,检测9种物质发现其在200nm—300nm范围内敏感波长分别为

山梨酸

糖精

咖啡因

苯甲酸

胭脂红

苋菜红

柠檬黄

VC

日落黄

260nm

202nm

206，273nm

229nm

215nm

216nm

257nm

262nm

234nm

兼顾九种组分在200nm—300nm的紫外吸收值,选择230nm为检测波长。

2..2流动相选择

实验:

以甲醇—乙酸氨作为流动相[1]对[组分进行分离,如图：

（1）甲醇—乙酸氨0.02mol/L=30：

70

图1添加剂组分拟合图

胭脂红和苯甲酸分离不开，且六种组分（VC、柠檬黄、日落黄、胭脂红、山梨酸、苯甲酸）出峰时间集中在2.7min-5.4min范围内，不易于最终分离测定。

（2）甲醇—乙酸氨0.02mol/L=40：

60

图2添加剂组分拟合图

柠檬黄与苋菜红，出峰重叠；

胭脂红与日落黄，出峰重叠，分离效果不好，且组分峰比较集中，不易分离测定。

（3）甲醇—乙酸氨0.02mol/L=44：

56

图3添加剂组分拟合图

柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄四种物质出峰重叠；

苯甲酸、山梨酸出峰干扰，且各

组分出峰时间相对集中，不易于最终分离测定。

结论：

由以上三个图形显示，最佳流动相配比，介于甲醇—乙酸氨0.02mol/L[30：

70]至甲醇—乙酸氨0.02mol/L[40：

60]中间的一个配比，经实验摸索最终选择甲醇—乙酸氨0.02mol/L[35：

65]为最佳配比。

（4）甲醇—乙酸氨0.02mol/L=35：

65

图4添加剂组分拟合图

1-柠檬黄2-苋菜红3-日落黄4-VC5-胭脂红6-苯甲酸7-山梨酸8-咖啡因

由图4可知七种组分（1-柠檬黄2-苋菜红3-日落黄5-胭脂红6-苯甲酸7-山梨酸8-咖啡因）基本分离，但是出峰时间接近，易发生干扰。

拟解决方案：

添加改性剂

2..3添加改性剂溴化四丁铵，选择最佳添加量。

（1）甲醇—乙酸氨（0.02mol/L）—溴化四丁铵（0.007mol/L）配比35：

4

图5九种组分分离图

由图5知，加入改性剂后基本上能将九种物质分离。

（2）甲醇—乙酸氨（0.02mol/L）—溴化四丁铵（0.008mol/L）配比35：

图6九种组分分离图

由图6知，糖精与苋菜红峰重叠，分离效果不佳。

（3）甲醇—乙酸氨（0.02mol/L）—溴化四丁铵（0.009mol/L）配比35：

图7九种组分分离图

由图7知，糖精与苋菜红峰重叠且与苯甲酸峰重叠趋势增加

添加改性剂----溴化四丁铵能初步将九种物质分离，原因[2]:

由于中性条件下（pH=6左右）溴化四丁铵带有正电荷,可以促进带负电荷的日落黄、胭脂红出峰时间增长，从而达到分离组分的要求。

溴化四丁铵量不宜过多,否则日落黄与胭脂红峰重叠,糖精、苋菜红、苯甲酸峰重叠,因此远择流动相配比为：

甲醇-乙酸氨（0.02mol/L）-溴化四丁铵（0.007mol/L）=35:

问题：

9种组分，出峰时间相对比较集中。

调节流动相pH值

2..4流动相pH值选择

pH值主要决定流动相极性,调节9种组分出峰时间,能更好的将9种物质分离

（1）pH=7

图8九种组分分离图

由图8知，进混合样发现糖精与胭脂红峰重叠且与苯甲酸峰有重叠趋势，日落黄与胭脂红重叠，完全出峰时间13分钟

（2）pH=6.5

图9九种组分分离图

苋菜红与糖精分离不好,完全出峰时间14分钟

（3）pH=6

图10九种组分分离图

苋菜红与糖精基本分离,完全出峰时间15分钟

（4）pH=5.5

图11九种组分分离图

苋菜红与糖精基本分离,胭脂红与咖啡因重叠,完全出峰时间18分钟

（5）pH=5

图12九种组分分离图

苋菜红与糖精分离不开,苯甲酸与日落黄重叠，完全出峰时间20分钟

考虑到分离效果、检测时间与重现性,选择pH=6.0，为最佳pH值。

对以上三个条件综合考虑，流动相最终确定为：

甲醇—乙酸氨（0.02mol/L）—溴化四丁铵（0.007mol/L）配比为35:

4，pH=6.0

2..5线性关系考察

将配制好的以下一系列标准溶液，以C（g/L）对相应的

（mv）作外标物曲线（表一），得到相应的回归方程及相关系数（表二）：

表一

C（g/L）、

（mv）

C

1

0.6106

363411

0.5607

362352

1.000

109753

212817

214293

2

0.3503

214830

0.2804

224927

0.500

54592

0.5000

120675

113185

3

0.2035

148002

0.1869

157982

0.3333

29547

81527

78148

0.1527

117203

0.1402

115982

0.2000

23535

0.2500

68367

61791

5

0.1221

92047

0.1121

92123

54423

42905

6

0.1018

75741

0.1667

47039

37104

7

0.1429

29398

241437

112758

288726

0.8000

156085

181938

35519

218377

0.4000

79184

137484

0.1000

2400

169867

0.2667

55293

114908

145554

39093

79938

0.1600

32471

0.1333

27649

0.1143

22460

表2线性回归方程、相关系数

添加剂

线性回归方程LRE

相关系数（r）

Y=1422.5492+1.939e+005X

0.9997

Y=3062.8391+2.142e+005X

0.9983

Y=37100.3956+5.991e+005X

0.9918

Y=26745.0412+5.521e+005X

Y=18685.2031+4.612e+005X

0.9941

Y=51212.8427+4.813e+005x

0.9974

Y=-2987.6231+1.128e+005X

0.9954

Y=-630.0775+1.185e+005X

0.9698

Y=16334.6903+1.987e+005X

0.9988

注：

Y：

计算机给出的峰高响应值；

X:

组分质量浓度（g/L）

九种组分线形工作曲线图谱

2..6本方法准确度测试

取科力福、非常甜橙、醒目、绿茶样品，每个样品精确移取5ml置于10ml离心试管中，按本实验的方法处理及测定（n=3），以标准样品的测定结果作为本底值，结果见表4

表4样品中食品添加剂加标回收率（单位g/L）

食品添加剂

非常甜橙

本底值（g/L）

加标量（g/L）

测得值（g/L）

回收率（%）

RDS（%）

0.4500

0.6404

93.56

0.635

0.1752

0.3327

94.48

0.428

0.1123

0.2687

93.82

0.21

科力福（稀释液）

0.2250

0.4201

104.4

0.2

0.1944

0.3532

95.26

0.733

0.4240

0.5553

78.76

0.31

醒目

0.1725

0.3580

91.15

0.393

0.034

0.0834

0.1071

87.64

0.55

绿茶

0.125

0.2303

92.12

0.847

2..7样品的测定结果

四种饮料按本实验的色谱条件进样分析，得到四种样品的添加剂含量如表5

表5四种样品中添加剂含量测定结果（n=3）单位（g/L）

样品

未检出

科力福原液

1.125

0.972

2.120

检出

非常甜橙分离图科力福浓缩橙汁分离图

醒目分离图绿茶分离图

3原因讨论：

实验过程中发现糖精、咖啡因、胭脂红、苋菜红的峰型有脱尾、前瞻现象，分析原因：

（1）：

苯甲酸、山梨酸中混有杂质对分离峰型有影响。

（2）：

在紫外吸收带（200nm～400nm）以外有最大吸收峰在不加入改性剂溴化四丁铵情况下，对本实验的九种组分出峰情况不产生干扰（附表2）。

但加入溴化四丁铵后，造成甲醇吸收峰红移结果导致流动相甲醇—乙酸氨（0.02mol/L）—溴化四丁铵（0.007mol/L）在205nm处有最大吸收峰值（附表3）其紫外吸收带宽度为200nm～250nm而九种被测组分紫外吸收波长范围均集中203nm～262nm处，其结果导致九种组分尤其是糖精、咖啡因、胭脂红、苋菜红（其最大吸收波长分别为203nm、213nm、215nm、216nm）影响较大，并在分离过程中造成分离峰脱尾、前瞻，造成分离峰形效果不佳。

本实验参考文献，均未考虑改性剂-溴化四丁铵的紫外吸收峰值对被测组分的干扰，因此造成本实验定量部分与实际值有所偏差，由于本人实验水平有限和实验时间的限制，未对本实验条件下最佳波长加以深入研究。

经过比较九种被测物质最大吸收波长及流动相吸收波长，得出结论：

在本实验条件下最佳波长范围为240nm～245nm处。

4结论：

采用HPLC法同时测定饮料中防腐剂、甜味剂、色素、VC、咖啡因含量，其重现性好、准确度较高，同时操作简便、快捷，能在15min内将九种添加剂基本分离，达到测定饮料样品的要求。

参考文献：

[1]反相高效液相色谱法同时快速测定食品中常见的8种食品添加剂：

张秀尧（浙江平阳县卫生防疫站）

[2]反相高效液相色谱法同时测定果汁中8种添加剂：

陈卫东，邵景东，邹建宏（张家港出入境检疫局）

[3]高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂：

陈青川，于文莲，王静（中国进出口商品检验技术研究所②

[4]高效液相色谱法测定食品中防腐剂时样液PH值探讨：

马越峰（浙江省疾病预防控制中心）

[5]21世纪的分析化学：

科学出版社，汪尔康主编

[6]高效液相色谱方法及应用：

化学工业出版社，于世林主编

[7]高效液相色谱方法：

科学出版社，邹汉法等编著

[8]液相色谱检测方法：

化学工业出版社，张晓彤等编

致谢：

本论文是在指导教师孙欣老师悉心指导下完成的，从论文的选题、论文的写作、修改到校正，都得到了孙欣老师的帮助和关心。

在论文实验期间，孙欣老师在繁忙的情况下，给了我们无私、无限、无量的关怀和指导。

当我们在实验中碰到困难时，孙欣老师耐心与我们反复讨论研究。

孙欣老师饱满的工作热情、严谨的治学态度在指导实验过程中给了我们极大的鼓舞，使我们受益、值得我们学习。

另外，张兵建和刘铮两位同学也给了我很大帮助，在此一并感谢！

DeterminationofNighFoodAdditivesinFoodsbyHighPerformanceLiquidChromatographySimultaneously

Author:

2005NanQi

ThechemicaldepartmentofLangfangnormalcollege

tutor:

XinSun

Abstract:

ItisdescribedasimpleandrapidmethodforthedeterminationofnighfoodadditivesbyHPLC,Theyaresaccharin,benzoicacid,sorbicacid,VC,caffeine,sunsetyellow,ponceautartrazine,andamaranth.TheexperimentswerecarriedonC18withmethanol–20mmol/LNH4Ac-7mmoltetrabutylammoniumbromide（35:

4v/vPh6.0）asaflowrateof1.0ml/min.TheUVdetectionwavelengthwasfixedat230nm.Theaveragerecoveriesofallthenighadditiveswerebetween91.25%-101%,andtheRSDwerelowerthan9%（n=3）.Theanalysisofasinglesamplerequired15min.Themethodhasbeensuccessfullyappliedtotheroutineanalysisoftheadditivesinfoods

Keyword:

highperformanceliquidchromatography（HPLC）；

saccharin；

benzoicacid；

sorbicacid；

VC；

caffeine；

sunsetyellow；

ponceau；

tartrazine,andamaranth.