届浙科版基因工程 单元 测试.docx

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届浙科版基因工程单元测试

基因工程

学校:

___________姓名：

___________班级：

___________考号：

___________

一、单选题

1．下图为利用转基因技术将控制人α一抗胰蛋白酶基因导入受体细胞，最终培育出能在乳腺细胞表达人α一抗胰蛋白酶的转基因羊的过程简图，图中GEP基因为绿色荧光蛋白基因。

下列相关叙述错误的是

A．α—抗胰蛋白酶基因和GEP基因的基本组成单位相同

B．GEP基因可作为标记基因

C．图中受体细胞为羊的乳腺细胞

D．可用显微注射法将重组质粒导入受体细胞

【答案】C

【解析】α—抗胰蛋白酶基因和GEP基因的基本组成单位均是脱氧核苷酸，A项正确；GEP基因可作为标记基因，用于检测目的基因是否进入受体细胞，B项正确；培育转基因动物应把基因表达载体转入受精卵，C项错误；可用显微注射法将重组质粒导入受体细胞，D项正确。

2．下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点。

如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点。

现用PstⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是（）

A．1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为EcoRⅠ，4为PstⅠ

B．1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为PstⅠ

C．1为EcoRⅠ，2为PstⅠ，3为PstⅠ，4为BamHⅠ

D．1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ

【答案】D

【解析】

试题分析：

BamHⅠ酶在目的基因的1处和3处有切割位点，因此目的基因两端将被切割成相同的黏性末端，这将会导致自身环化，故A错误；EcoRⅠ酶只在目的基因的2处有切割位点，只用这一种酶无法切割目的基因，故B错误；表格中可以看出，BamHⅠ酶和EcoRⅠ酶识别序列和切割位点不同，并且EcoRⅠ酶的切割位点在2处，即两种酶处理后目的基因的2处和3处被切割，并形成不同的黏性末端，可以防止目的基因自身环化，故C正确；PstⅠ酶的切割位点在4处，即不影响BamHⅠ酶3处的切割位点，因此用这三种酶处理后，目的基因仍在2处和3处被切割，因此可以防止目的基因的自身环化，故D正确．

考点：

本题主要考查限制酶的特点，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系和识图的能力。

3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（）

A．将目的基因导入受体细胞不需要进行碱基互补配对

B．限制性内切酶只用于获得目的基因

C．质粒都可以作为运载体

D．重组DNA（或重组质粒）就是目的基因

【答案】A

【解析】限制性内切酶不仅在获得目的基因时运用，在切割质粒等运载体时也要运用；质粒作为运载体必须满足一定的条件；重组DNA（重组质粒）携带有目的基因。

4．基因工程中，常用的细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，主要原因是（  ）

A．结构简单，操作方便B．繁殖速度快

C．遗传物质含量少D．性状稳定，变异少

【答案】B

【解析】

试题分析：

由于微生物多为单细胞，繁殖速度快，常被用作基因工程是受体细胞。

B正确。

考点：

本题考查微生物的特点，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。

5．下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。

以下相关叙述正确的是（）

A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与

B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒全部整合到了④的染色体上

C．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤一定会表现出抗虫性状

D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异

【答案】D

【解析】重组质粒的构建需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶参与，DNA聚合酶用于DNA复制过程，A错误；③侵染植物细胞后，重组Ti质粒上的T-DNA整合到棉花细胞的染色体上，B错误；如果受体细胞的染色体上若含抗虫基因，但不代表该基因就一定成功表达，因此不能确定⑤是否表现出抗虫性状，C错误；⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异，D正确。

【点睛】本题考查了基因工程的工作原理和操作步骤等方面的知识，要求学生能够识记基因工程的工具酶；能够区分识记DNA连接酶和DNA聚合酶；识记目的基因导入受体细胞后需要检测与鉴定。

6．关于基因工程下列说法正确的有（）

①不同的限制酶切的黏性末端一定不同

②基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工

③限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列

④我国转基因抗虫棉的抗虫基因来自于大肠杆菌

⑤限制酶、DNA连接酶和DNA聚合酶作用部位相同

⑥基因工程可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物身上

⑦质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的载体

A．2项B．3项C．4项D．5项

【答案】B

【解析】不同的限制酶切的黏性末端可能不同,①错误；基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工，②正确；限制酶的切口不一定是GAATTC碱基序列，③错误；我国转基因抗虫棉的抗虫基因来自苏云金芽孢杆菌，④错误；限制酶、DNA连接酶和DNA聚合酶均作用于脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，⑤正确；基因工程可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物身上，⑥正确；质粒是基因工程中常用的用作运载目的基因的载体，其他载体动植物病毒，噬菌体等，⑦错误；选B。

7．下图所示为某质粒被BamHI切割后得到一个线性载体DNA，经过末端核苷酸转移酶作用将多个相同的脱氧核苷三磷酸（dATP或dTTP或dCTP或dGTP）连续加到切割后的两个黏性末端上。

相关说法正确的是

A．末端核苷酸转移酶作用时不需要模板链

B．末端核苷酸转移酶的作用是催化形成磷酸二酯键

C．末端核苷酸转移酶的作用特点与DNA连接酶相同

D．该技术的重要意义是防止线性载体DNA自身环化

【答案】ABD

【解析】A、末端核苷酸转移酶的作用是将多个相同的脱氧核苷三磷酸连续加到切割后的两个黏性末端上,这不需要模板链,A正确;

B、末端核苷酸转移酶的作用是催化形成磷酸二酯键,这样可将多个相同的脱氧核苷三磷酸连续加到切割后的两个黏性末端上,B正确;

C、末端核苷酸转移酶的作用是将多个相同的脱氧核苷三磷酸连续加到切割后的两个黏性末端上,而DNA连接酶是将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来,两者的作用特点不同,C错误;

D、末端核苷酸转移酶的作用是将多个相同的脱氧核苷三磷酸连续加到切割后的两个黏性末端上,这样可以防止线性载体DNA自身环化,D正确.

【考点定位】基因工程

【名师点睛】1、基因工程的工具:

（1）限制酶:

能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂.

（2）DNA连接酶:

连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键.

（3）运载体:

常用的运载体:

质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒.

2、末端核苷酸转移酶的作用是将多个相同的脱氧核苷三磷酸连续加到切割后的两个黏性末端上.

8．家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。

将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。

下列说法不正确的是（）

A．家蚕细胞培养所需二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH

B．来自cDNA文库的干扰素基因片段必须插入表达载体的启动子和终止子之间

C．采用PCR技术扩增干扰素基因的实验中是以干扰素基因为模板

D．进行转基因操作前，需用纤维素酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞

【答案】D

【解析】胚胎干细胞培养中需一定的气体环境（95%的氧气和5%的二氧化碳），其中二氧化碳的主要作用是维持培养液的PH，A正确；外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行表达，B正确；采用PCR技术大量扩增目的基因时，其体系主要包括：

扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种脱氧核糖苷酸、模板DNA（干扰素基因）、耐高温的DNA聚合酶（taq酶）和DNA引物，C正确；进行转基因操作前，需用胰蛋白酶处理幼蚕组织，以便获得单个细胞，D错误。

9．普通番茄中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制多聚半乳糖醛酸酶的合成，该酶能够破坏细胞壁，使番茄软化而不易储藏，科学家通过基因工程的方法，将一种抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，获得了抗软化番茄，保鲜时间长，口味也更好。

主要机理是采用了RNA干扰技术，使相关基因保持沉默（如下图所示）。

请根据所学生物学知识判断微小RNA片断最可能影响哪一细胞器发挥其生理作用（）

A．线粒体B．核糖体C．内质网D．高尔基体

【答案】B

【解析】本题考查了学生的识图能力、知识迁移能力。

从图中看，mRNA2与mRNA1结合，干扰了多聚半乳糖醛酸酶基因表达的翻译过程，故影响了核糖体发挥作用。

10．PCR技术扩增DNA时，需要的条件是

①目的基因

②DNA解旋酶

③四种脱氧核苷酸

④热稳定DNA聚合酶等

⑤mRNA

⑥引物

A．①②③④B．②③④⑤C．①③④⑥D．①②③⑥

【答案】C

【解析】本题考查PCR技术及其所需的条件，要求考生理解PCR技术是模拟体内DNA复制过程，在PCR扩增仪中进行的目的基因的扩增过程，以实现目的基因的指数式增加。

PCR技术即体外扩增DNA的技术，其利用的是DNA双链复制的原理，该过程需要的条件有：

目的基因、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、引物、缓冲溶液。

适宜的温度和pH值等，因此C正确，ABD错误。

【点睛】诠释PCR技术：

①原理：

体外DNA复制

②需要条件：

模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）

③过程：

DNA受热（90～95℃）变性解旋为单链、冷却（55～60℃）后RNA引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下延伸（70～75℃）合成互补链。

11．图甲、乙中的箭头表示三种限制性核酸内切酶的酶切位点，ampr表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。

下列叙述正确的是

A．用PstⅠ和HindⅢ酶切，可以保证重组DNA序列的唯一性

B．图甲中的质粒用BamHⅠ切割后，含有4个游离的磷酸基团

C．在构建重组质粒时，可用PstⅠ和BamHⅠ切割质粒和外源DNA

D．导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长

【答案】A

【解析】【分析】本题以图文结合为情境综合考查学生对基因工程的基本操作程序，特别是基因表达载体构建等相关知识的识记和理解能力。

【详解】用PstⅠ和HindⅢ酶切，可防止质粒和目的基因的自身环化，从而保证重组DNA序列的唯一性，A正确；图甲中的质粒只有一个BamHⅠ切割位点，用BamHⅠ切割后，有1个切口，含有2个游离的磷酸基团，B错误；图乙显示：

目的基因中含有BamHⅠ的酶切位点，若用BamHⅠ切割外源DNA，则会破坏目的基因的结构，因此在构建重组质粒时，不能用BamHⅠ切割外源DNA，C错误；在构建重组质粒时，是用PstⅠ和HindⅢ切割质粒和外源DNA的，Ampr（氨苄青霉素抗性基因）的结构已被破坏，因此导入目的基因的大肠杆菌不能在含氨苄青霉素的培养基中生长，D错误。

【点睛】对限制酶切割位点的两点要求：

①位置要求：

限制酶切割位点所处的位置必须在标记基因外，进而保证标记基因的完整性。

②数量要求：

选择限制酶切割目的基因时，被选择的限制酶在目的基因的两侧都要有识别序列，这样切割出来的目的基因才能与质粒结合。

12．下图是4种限制酶的识别序列及其酶切位点，下列叙述错误的是

A．不同类型的限制酶切割后，有的产生黏性末端，有的产生平末端

B．不同类型的限制酶切割后可能产生相同的黏性末端

C．用酸1和酶2分别切割目的基因和质粒，连接形成重组DNA分子后，重组DNA分子仍能被酶2识别

D．用酶3和酶4分别切割目的基闪和质粒后，其产物经T4DNA连接酶催化不能连接形成重组DNA分子

【答案】D

【解析】不同类型的限制酶切割后，有的产生黏性末端（酶1和酶2），有的产生平末端（酶3和酶4），A正确；不同类型的限制酶切割后可能产生相同的黏性末端，如图中的酶1和酶2，B正确；用酶1和酶2分别切割目的基因和质粒，形成的末端序列相同，连接形成重组DNA分子后，重组DNA分子仍能被酶2识别，C正确；用酶3和酶4分别切割目的基因和质粒后，其产物经T4DNA连接酶催化可以连接形成重组DNA分子，D错误。

【点睛】解答本题关键能够掌握基因工程的操作工具，识记不同限制酶的作用特点，明确具有不同末端序列的平末端均可以经T4DNA连接酶催化连接。

13．在基因工程中，科学家所用的“剪刀”“针线”和“运载体”分别是指（）

A．大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶

B．噬菌体、质粒、DNA连接酶

C．DNA限制酶、RNA连接酶、质粒

D．DNA限制酶、DNA连接酶、质粒

【答案】D

【解析】试题分析：

（1）在基因工程的操作中，“分子手术刀”是限制酶．

（2）“分子缝合针”是DNA连接酶．

（3）“分子运输车”是基因进入受体细胞的载体（或运载体），常用的运载体包括质粒、动植物病毒、噬菌体等．

故选：

D．

14．如表为几种限制酶的切割位点，相关叙述不正确的是

A．限制酶能够水解DNA上特定的磷酸二酯键B．BamHI切割的序列一定能被Sau3AI切割

C．BclI切割的序列一定能被Sau3AI切割D．以上信息说明限制酶没有特异性和专一性

【答案】D

【解析】限制酶能够识别特定的核苷酸序列，并将特定碱基之间的磷酸二酯键切割，A正确；BamHI和Sau3AI切割漏出的粘性末端相同，所以BamHI切割的序列一定能被Sau3AI切割，B正确；同理BclI切割的序列一定能被Sau3AI切割，C正确；酶具有特异性和专一性，D错误。

15．对基因治疗安全性的问题叙述不当的是：

A．基因治疗中最常用的载体是病毒，它们能自我复制

B．在基因治疗中，科学家抑制逆转录病毒的某种活性防止它们引起疾病，使之能被安全地使用

C．使用病毒载体运载基因，它们可能会更多地改变目标细胞

D．目的基因插入载体DNA的位置可能出现错误，导致癌症和其他损伤的产生

【答案】A

【解析】基因治疗中最常用的载体是病毒，此时科学家抑制逆转录病毒的某种活性防止它们引起疾病，使之能被安全地使用，它们不能自我复制。

16．天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。

现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是（）

A．提取矮牵牛蓝色花mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B

B．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞

C．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞

D．将基因B导入玫瑰细胞后即可通过植物组织培养培育出蓝玫瑰

【答案】A

【解析】

试题分析：

获取目的基因的方法有①从基因文库中获取②利用PCR技术扩增③人工合成，本题可以采用逆转录获取目的基因并采用PCR技术扩增；A正确。

利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接形成重组质粒后导入玫瑰细胞，B错误。

受体细胞是植物细胞时，常采用农杆菌转化法，即将基因B直接导入农杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞，CD错误。

考点：

本题考查基因工程相关知识，意在考查考生的识记能力和理解能力。

17．关于真核细胞基因结构的正确叙述是

A．不同基因中外显子的碱基对在整个基因碱基对中所占比例很大

B．外显子所含碱基对的数目一般多于内含子所含碱基对的数目

C．内含子是不能转录、不能编码蛋白质序列的核苷酸序列

D．非编码区对基因的表达起调控作用

【答案】D

【解析】真核细胞基因结构中的非编码区对基因的表达起调控作用。

18．下列关于生物工程中常见的几种酶的叙述，正确的是（）

A．DNA连接酶可把目的基因与载体的黏性末端的碱基黏合，形成重组DNA

B．纤维素酶是细胞工程中常用的工具酶，可获得单个动物细胞

C．Taq酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA聚合酶

D．纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体，便于植物杂交育种

【答案】C

【解析】DNA链接酶不能将碱基黏合，而是将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，A错误；纤维素酶是植物细胞工程中常用的工具酶，其作用是去除植物细胞壁，获原生质体，B错误；Taq酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA聚合酶，C正确；用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体，用来进行植物体细胞杂交，D错误。

19．科研人员利用相关技术改变了胰岛素β链的第9位氨基酸，从而避免了胰岛素结合成无活性的二聚体形式，下列相关叙述中，不正确的是

A．胰岛素的本质是蛋白质不宜口服使用

B．可通过测定DNA的序列确定突变是否成功

C．该过程的操作对象是胰岛素分子

D．对胰岛素结构的改造属于蛋白质工程

【答案】C

【解析】A项正确；胰岛素的本质是蛋白质，在人体的呼吸道内会被分解而失效，不宜口服使用，B项正确；基因突变的本质就是碱基对的增添、缺失或替换，通过测定DNA的序列可确定突变是否成功，C项错误；蛋白质工程的操作对象是基因（DNA），D项正确。

对胰岛素结构的改造属于蛋白质工程，

【点睛】由于基因控制蛋白质的合成，所以蛋白质工程技术的操作对象还是基因。

20．图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。

现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。

下列分析中正确的是

A．若用限制酶MspⅠ完全切割图1中DNA片段，会破坏2个磷酸二酯键

B．若图1虚线方框内的碱基对被T－A替换，那么基因D就突变为基因d，用限制酶SmaⅠ完全切割杂合子个体中图1的DNA片段，会产生3种不同的DNA片段

C．若需切割图2中的质粒以便于拼接目的基因D，应选择限制酶BamHⅠ和MboⅠ

D．若用上述条件构建含有目的基因D的重组质粒并成功导入细菌体内，则此细菌在添加抗生素A和B的培养基中不能存活

【答案】D

【解析】

试题分析：

根据图1可知，该图中有两个MspⅠ识别序列，因此用限制酶MspⅠ切割DNA片段，能断裂4个磷酸二酯键，故A错；若图1虚线方框内的碱基对被T－A替换，则图1的DNA片段中只有1个限制酶SmaⅠ识别序列，用限制酶SmaⅠ切割后，能形成2种不同的DNA片段，故B错；切割目的基因和质粒都用BamHⅠ，MboⅠ切割质粒会破坏质粒上的两个标记基因，故C错误；MboⅠ切割质粒会破坏质粒上的两个标记基因，因此若用上述条件构建含有目的基因D的重组质粒并成功导入细菌体内，则此细菌在添加抗生素A和B的培养基中不能存活，故D正确。

考点：

本题主要考查基因工程，意在考查考生意在考查运用所学知识与观点结合信息，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力。

21．1970年，特明和巴尔德摩证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。

下面为形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。

请根据图解分析，下列说法中不正确的是（　　）

A．催化①过程的酶是逆转录酶

B．从图示可以看出要将碱基对之间的氢键断开可以用核酸酶H和高温处理

C．从图中信息分析可知，②⑤过程为DNA复制，催化⑤过程的酶能耐高温

D．如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶30个

【答案】D

【解析】

试题分析：

过程①是以RNA为模板合成DNA的逆转录过程，需要逆转录酶的催化，故A正确；在PCR中通过控制温度达到解旋的目的，同时核酸酶也能断裂氢键，故B正确；②～⑤过程为PCR，其原理是DNA复制，该过程需要耐高温的DNA聚合酶，故C正确；RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，表明RNA中A和U共有40个，则C和G共60个，所以DNA每条单链中C和G均是60个，即DNA双链中C和G共120个，由于C＝G，因此C有60个，故D错。

考点：

本题主要考查DNA分子结构和复制，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系和识图、图文转化的能力。

22．下列生物工程技术中原理相同的有

A．植物基因工程　动物基因工程

B．植物组织培养　动物细胞培养

C．植物细胞融合　动物细胞融合

D．胚胎分割移植　克隆动物

【答案】ACD

【解析】

试题分析：

植物基因工程和动物基因工程运用的都是基因重组，故A正确。

植物组织培养运用的是植物细胞的全能性，动物细胞培养是细胞增殖，故B错误。

植物体细胞杂交是细胞膜的流动性，动物细胞融合运用的是细胞膜的流动性，故C正确。

胚胎分割移植和克隆动物的原理都是动物细胞核的全能性，故D正确。

因此选ACD。

考点：

本题考查现代生物技术相关知识，意在考察考生对知识点的理解掌握程度。

23．基因工程与蛋白质工程的区别是

A．基因工程需对基因进行分子水平操作，蛋白质工程不对基因进行操作

B．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质

C．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）

D．蛋白质工程完全不同于基因工程

【答案】B

【解析】基因工程需对基因进行分子水平操作，蛋白质工程是通过修改基因或创造合成新基因来改变生物的遗传和表达性状，合成新的蛋白质，A项错误；基因工程是将一种生物的基因转移到另一种生物体内，产生它本不能产生的蛋白质，进而表现出新的性状，但只能生产自然界已存在的蛋白质。

蛋白质工程是通过修改基因或创造合成新基因来改变生物的遗传和表达性状，合成的可以不是天然存在的蛋白质，B项正确；基因工程和蛋白质工程都是分子水平操作，C项错误；基因工程是蛋白质工程的关键技术，故蛋白质工程又被称为第二代基因工程，D项错误。

24．下图为DNA分子在不同酶作用下所发生的变化，图中作用过程使用酶的顺序是（）

A．解旋酶、限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶

B．DNA连接酶、限制酶、DNA聚合酶、解旋酶

C．限制酶、DNA连接酶、解旋酶、DNA聚合酶

D．DNA聚合酶、DNA连接酶、限制酶、解旋酶

【答案】C

【解析】本题考查目的基因的获取、构建基因表达载体、DNA复制等过程，要求考生能理解上述过程的操作要点，正确区分限制酶、DNA连接酶、解旋酶及DNA聚合酶在相关过程中的作用。

分析图形可知，①图是利用限制酶切割DNA形成黏性末端，②图是利用DNA连接酶将黏性末端连接起来，③图是利用解旋酶使DNA解开双链的过程，④图是利用DNA聚合酶进行DNA复制的过程，所以C正确，ABD错误。

【点睛】与DNA相关的六种酶的比较是考试的热点，也是学生易错的知识点，现归纳整理如下：

名称

作用部位

作用底物

作用结果

限制酶

磷酸二酯键

DNA

将DNA切成两个片段

DNA连接酶

磷酸二酯键

DNA片段

将两个DNA片段连接为一个DNA分子

DNA聚合酶或热稳定DNA聚合酶

磷酸二酯键

脱氧核苷酸

将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端

DNA（水解）酶

磷酸二酯键

DNA

将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸

解旋酶

碱基对之间的氢键

DNA

将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链

RNA聚合酶

磷酸二酯键

核糖核苷酸

将单个核糖核苷酸依次