现代分子生物学实验docWord文档格式.docx
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通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒和酶切的方法。
二、实验内容
1、碱裂解法提取质粒DNA；
2、酶切DNA。
三、实验仪器及用品
1、仪器：
恒温培养箱、恒温摇床、台式高速离心机、高压灭菌锅、指管（微量离心管）、指管（微量离心管）架、加样枪、移液器架子、超声波清洗仪、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器
2、用（药）品：
葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）、NaOH、SDS、乙酸、钾、冰乙酸、氯仿、乙醇、胰RNA酶、氨卡青霉素、蔗糖、溴酚蓝、8-羟基喹啉、β疏基乙醇、盐酸、含pUC19质粒、EcoRI吸头、小指管
四、实验人数：
每班分2次，每次分6~8组，每组3~4人。
五、实验学时：
3学时
六、实验类型：
设计
实验要求：
选修
实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA
一、实验目的：
通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
二、实验内容：
1．制备琼脂糖凝胶
2．加样
3．电泳
4．染色
5．观察电泳结果、拍照
1．仪器：
恒温培养箱、琼脂糖凝胶电泳系统、台式离心机、高压灭菌锅、紫外线透射仪、指管（微量离心管）、指管（微量离心管）架
2．用（药）品：
蔗糖、三羟甲基、氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸（EDTA）、硼酸DNAmarker、溴酚蓝、溴化乙、含pUC19质粒、吸头
每班分2次，每次分6---8组，每组3~4人。
实验三大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术。
1．培养大肠杆菌
2．制备大肠杆菌感受态细胞
超净工作台、低温离心机、恒温摇床、恒温箱、-70冰箱（超低温冰箱）、恒温水浴锅、50ml离心管和离心机、吸头、试管、培养皿、锥形瓶、试管架、吸量管、量筒、滴管、吸耳球
2.用（药）品：
CaCI2、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、氨卡青霉素、大肠杆菌DH5a、Puc19质粒
每班分2次，每次分6—8组，每组3~4人。
必修
实验四哺乳动物基因组DNA的提取
通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA的琼脂糖凝胶电泳技术。
1．制备哺乳动物肝脏匀浆
2．提取DNA
台式高速离心机、玻璃匀浆器、高压灭菌锅、微量指管、一次性灭菌过滤器、10ml注射器、水浴锅、加样枪、移液器架子、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器、液氮罐
鼠肝脏、Tris、SDS、EDTA、蛋白脉K、RNA酶、DNA相对分子质量标准物、λDNA/EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物、HCI、NaCI、NaAc、平衡酚、氯仿、异戊醇、硼酸、溴酚蓝、蔗糖
验证
实验五植物总RNA的提取
通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法。
1．总RNA的提取
2．甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析总RNA
低温离心机、台式离心机、200℃以上烘箱、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪、高压灭菌锅、液氮罐、50ml离心管、研钵、剪刀、橡胶手套
DEPC、异硫氰酸胍、乙酸钠、LiCI、酚、氯仿、乙醇、甲醛、吗啉代丙烷磺EDTA、琼脂糖
实验六植物基因组DNA的提取
通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。
从植物组织中提取DNA
高速离心机和离心管（50ml）、台式离心机、吸头、研钵、玻璃匀浆器、高压灭菌锅、微量指管、一次性灭菌过滤器、10ml注射器、水浴锅、移液器、超净工作台、稳压稳流电泳仪、多用途紫外分析仪、微波炉、恒温磁力搅拌器、液氮罐
Tris、EDTA、NaCI、异丙醇、琼脂糖、SDS、HCI、KCI、β巯基乙醇、TE
实验七PCR基因扩增
通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。
1．配制反应体系
2．PCR扩增
3．琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果
PCR热循环仪、琼脂糖凝胶电泳系统、吸头、指管、移液器、超净工作台、紫外透射仪、凝胶成像系统
DNA摸板、dNTP、引物1引物2、Taq酶、琼脂糖、DNA相对分子质量标准物、MgCI2、明胶、石蜡油、KCI
实验八DNA重组实验
通过本实验学会重组DNA连接以及鉴定重组子的方法。
1．质粒DNA的制备
2．制备重组DNA
3．制备涂菌的琼脂板
4．制备感受态细胞
5．转化
6．重组子的鉴定
恒温摇床、恒温水浴锅、恒温培养箱、台式离心机、培养皿、接种针、玻璃涂棒、试管、酒精灯、镊子、牙签
胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、氨卡青霉素、氯化钙、二甲基甲酰胺、EcoRI酶、T4DNA连接酶、DH5a、λDNA、pUC19质粒
五．参考文献：
《分子生物学实验》，高等教育出版社，魏群，2003
《分子生物学理论和技术》，顾晓松，潭湘林，北京科学技术出版社，2002
《生物化学与分子生物学实验技术》，厉朝龙，浙江大学出版社，1999
六.实验报告要求：
1.要求写出实验目的
2.要求写出实验原理
3.要求写出实验步骤
4.要求写出实验结果：
实验结果是实验中最重要的部分。
应将实验过程中所观察的现象真实、正确、详细地记述下来。
实验中的每次观察都应随时作原始记录。
5.要求对实验结果进行讨论和分析：
要判断实验结果是否为预期的，如果出现非预期结果，应该再考虑和分析其可能原因。
实验结论是从实验结果中归纳出一般的、概括性的判断，也就是这一实验所能验证的概念、原则或理论的简明总结。
结论中一般不要罗列具体的结果。
在实验中未能得到充分证据的理论分析不应写入结论。
七．附表：
分子生物学实验一览表
序号
实验项目
实验类型
实验要求
学时
每组人数
实验仪器及用品
1
综合
3
4
恒温培养箱、恒温摇床、台式离心机、高压灭菌锅、电泳仪、电泳槽、移液器
2
琼脂糖凝胶电泳系统、台式离心机、紫外线透射仪、微波炉、移液器、超净台
实验三大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
超净台、低温离心机、恒温摇床、超低温冰箱
台式高速离心机、玻璃匀浆器、一次性灭菌过滤器、高压灭菌锅、超净台、分光光度计、电泳系统、紫外线透射仪
5
低温离心机、台式离心机、烘箱、紫外线透射仪、高压灭菌锅、超净台、
6
离心管（50ml）、台式离心机、吸头、指管、Tris、高压灭菌锅、超净台、分光光度计、电泳系统、紫外线透射仪
7
PCR热循环仪、DNA摸板、4中dNTP、引物、移液器、超净台、电泳系统、紫外线透射仪
8
摇床、水浴锅、培养箱、离心机、胰蛋白胨
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