1型原胶原氨基末端前肽Word下载.docx
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内容更改说明（Descriptionof
Modifiedcontents）
审批人（Approvedby）
批准生效日期
（Approveddate）
1
换版
文件信息表
（Procedureinformationform）
表号：
KM-MP03?
04
文件名称（Titleof
document）（Doc.Co
de）
总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书（KM-SOP-0300?
363）
版本号
（EditionNo.）
Edition3.0
生效日期（Operative
date）
2008-03-13
文控部门
（Doc.ControlDept.）
实验室文控室
回顾日期/签名
（Reviewdate
/signature）
回顾日期（Review
回顾人员签名（Signature）
替代文件（Replaces）
总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书（Edition2.0）
存放地点（Location）/
No.Location（Holder）No.Location（Holder）
持有人（Holder）
1实验室文控室（陈彬）
2化学发光室（段学成）
作者签名/日期
付正乾
（Author
signature/date）
审批人签名/日期
陈建波
（Authorizedby:
Signature/Date）
接收人签名/日期
（Receiptor/Date）
副本数（CopyNo.）
本文件是第个文件拷贝/共发放2个文件拷贝。
总1型胶原氨基端延长肽检测检测作业指导书
（Totalprocollagentype1amino-terminal
propeptide（t-p1np）byRochecobase601）
1原理（Testprinciple）
“三明治”法，总检测时间：
18分钟。
第一次孵育：
20μl标本和一份生物素抗P1NP特异性单克隆抗体一起孵育。
第二次孵育：
在加入链亲和素包被的微粒和一份钌复合体标记的P1NP特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原－抗体复合体，复合体在链亲和素和生物素相互作用下形成固相。
将反应液吸入检池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。
未结合的物质通过ProCell除去。
在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。
2样本收集和储存（SpecimenCollectionandStorage）:
样本类型（sampletype）：
血清（serum）必须用标准试管或内有分离胶的试管收集。
使用肝素锂和EDTA-K3血浆（plasma）。
拒收标本（Specimenrejection）：
严重溶血、脂血、或用叠氮钠防腐标本。
标本用量（volume）：
200uL血清/血浆储存条件（samplestorageconditions）：
在15–25°
C可保存24小时；
在2--8°
可保存5天，C在-20°
C可保存6个月。
样品最多可以冻融5次。
3试剂（Reagent）：
3.1Rochecobase601原装试剂。
3.1.1试剂内组份（components）：
Ⅰ链霉亲和素包被的微粒
ⅡR1生物素化的抗totalP1NP抗体
ⅢR2三联吡啶钌标记的抗totalP1NP抗体
Ⅳ使用说明书，分英语、法语、德语、葡萄牙语、西班牙语各一份。
3.1.2未随试剂盒提供的组分
·
ElecsystotalP1NP定标液（P1NPCalSet）
Elecsys骨标志物质控品（PreciControlBone）
Elecsys系统缓冲液（ProCellM）
Elecsys测量池清洗液（CleanCellM）
Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）·
Elecsys反应杯/吸样头盒（AssayCups/AssayTipsCombimagazineM）·
Elecsys废物盒（wasteliner）
Elecsys系统清洗液支架（SysCleanAdapterM）
Elecsys系统清洗液（SysClean）
3.2试剂准备：
将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；
不同批号的试剂不能混用；
新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。
Putreagentfromrefregeratorytoroomtemperatureforpropertime;
Newreagentlotsmustbetestedinparallelwitholdlotsbeforeorconcurrentlywithbeingplacedinservicetoensurethatthecalibrationofthenewlotofreagenthasmaintainedconsistentresultsforpatientspecimens.Recodtheresults.
4仪器（Instrument）：
Rochecobase601。
4.1仪器准备（prepareapparatus）：
使用前确保仪器水通道、液体垃圾通道畅通，保证系统清洗液（SysClean）、测量池清洗液（CleanCellM）、反应杯/吸样头盒（AssayCups/AssayTipsCombimagazineM）、废物盒（wasteliner）、系统缓冲液（ProCellM）的足够。
然后开机，在仪器的试剂盘中加入所需的试剂。
5安全防范（SafetyPrecautions）：
操作时必须穿戴手套和工作服；
工作后的台面应消毒擦洗；
用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；
为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；
遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。
6校准（CalibrationifApplicable）：
6.1校准品储存和使用（calibrationmaterialstorageandusage）：
Rochecobase601原装校准品。
要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃
可稳定到有效期。
Stopusingoverduecalibrationmaterial.useitwithinexpirationdate,storagein2-8℃
配制（calibrationmaterialredissolve）：
用复溶专用加样枪准确吸取1mL去离
子水于瓶中，溶解静置3小时，混匀并用有盖小子弹头分装200μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。
Labelconfecting
date,calibrationlot,personwhoconfected,expirationdate.then复溶后校准品成分的稳定性：
保存于（-20）℃，可稳定2个月。
6.2每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：
试剂批号改变（Reagentlotchanges）
同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月（28天）同一试剂盒在分析仪上使用超过7天根据需要：
如质控数据超过额定的限度。
Recalibrationbasedonqualitycontrolproblem
6.3步骤：
当使用新批号试剂之前，都需要对试剂盒进行校准。
在校准（clibration）菜单中编辑校准液的资料，在两个样本管中分别加入至少200ul的1，2校准品并放到已指定位置的校准架中，放入样本通道中。
然后在计算机屏幕上选择START项，再次点击START界面中的绿色START健。
6.4结果判断：
仪器会自动提示是否通过校准。
如果未通过会有相应的原因解释以及解决方法的指导。
校准后必须及时做质控且须获得通过
6.5校准周期：
质控在控的情况下一个月内对同批号试剂有效。
如果质控值提示有需要校准时，应重新校准。
7操作过程（ProceduralSteps）：
7.1样本准备：
先检查标本是否合格（标本与作业指导书上标本要求是否一致），核对验单上的条码和标本上的条码是否一致，按样本每天唯一号原则进行编号。
将带有编号的标本离心取血清/血浆，将待测物加入相应的样本管。
7.2取出空样本架，将含有血清/血浆样本管按先后顺序加入样品架中，将样品架推入样品槽中。
因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul（样本用量75ul）。
7.3在[WORKLIST]界面中输入实验号，指定totalP1NP项目。
结果出来后，在[WORKLIST]菜单中选择需要打印的结果，打印后作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。
7.4数据联机入系统（senddatatoLIS）：
计算机：
设备管理→接口管理→点击罗氏全自动化学发光仪→点击开始，出现预处理窗口→仪器：
选择需要传送结果→SEND传送→回到计算机预处理窗口→传送。
7.5数据审核（datacheckup）：
在确保仪器与电脑数据处理系统正常联机的情况下（即数据传送和接收无中断），仔细核对每一个数据有无错误（如：
误传、漏传），是否与临床诊断相吻合，如发现异常情况，应仔细核对实验号与样本架号，原始导出结果与系统结果是否对应等，如有必要，复查该结果。
8质量控制（Qualitycontrol）：
室内质控：
使用罗氏骨代谢通用质控品（PCBONE）做质控，每天至少做两个浓度的值。
两个浓度要求符合本项目要求。
当质控达不到要求时，分析原因，或重新定标；
仍不能满足要求时，则做期间核查，检查仪器是否正常。
室内质控操作过程。
提前在仪器内设定好质控的靶值，SD值，在CONTROL菜单中指定质控架号、申请质控项目，质控品每管至少200ul质控品。
拒绝标准：
P1NP最大允许误差ALE为25%，室内质控CV为2.09%（低值），2.13%（高值），偏移为（低值）SD=1.52μg/（L高值）SD=18.42μg/L根据公式计算△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65，选择的质控规则为1-3s,2-2s,R4s,10x，当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理。
9线性范围
9.1分析测试范围（AMR）：
5-1200μg/L（-51200μg/L）
9.2病人结果报告范围（CRR）：
5-6000μg/L（-56000μg/L）
当结果超过AMR时，需要稀释，
稀释材料（dilutionmaterial）:
采用罗氏通用稀释液
最大稀释倍数（dilutiontimes）:
1:
5超出检测限度需要稀释的样品，要重新申请该项目在Dilution中指定并指定稀释倍数（最大1:
5）,.仪器会自动稀释检测
按项目打出结果，作为原始记录加以保留。
10计算（CalculationsifApplicable）：
无需人工计算。
11参考范围（ExpectValues）：
绝经前：
15.13~~58.59pg/ml
绝经后：
所有女性：
16.27~~73.87μg/L
接受HRT治疗：
14.28~~58.92μg/L
未接受HRT治疗：
20.25~~76.31μg/L
12结果解释（InterpretationofResults）：
可以直接报告所检测结果,无须进行结果解释。
13方法的局限性（MethodLimitations）：
接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。
检测结果可能与一些影响骨吸收的临床状况相混淆，如甲状旁腺功能亢进或甲状腺功能亢进。
在预测骨质疏松进程、骨折危险度、甲状旁腺功能亢进或甲状腺功能亢进等方面，本试验的应用尚待证实。
13.1精密度（Precision）：
批内精密度CV%≤2.67、批间精密度CV%≤2.13。
（批内精密度CV%≤2.9、批间精密度CV%≤3.7）
13.2灵敏度（Sensitivity）：
<
5.00ng/ml（<
5.00ng/ml）
13.3特异性（Specificity）：
所使用的单克隆抗体与如下项目交叉反应均<
1%：
β-CrossLaps,N-MID?
Osteocalcin,parathyroidhormone（PTH）,and25-OH
vitaminD。
13.4分析测试范围（AMR）：
5-1200μg/（L5-1200μg/L）
13.5病人结果报告范围（CRR）：
5-6000μg/L（-56000μg/L）
13.6干扰物质（InterferingSubstances）：
胆红素影响（bilirubin）：
样本中胆红素的浓度小于650mg/L，在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。
溶血影响（hemolysis）：
样本中血红蛋白的浓度小于1.8g/dl，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。
脂血影响（Lipemia）：
样本中内脂的浓度小于2000mg/dL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响
生物素影响（biotin）:
样本中生物素的浓度小于50ng/ml，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响
13.7注意事项（Notices）：
仅供体外诊断使用（useonlyforinvitrodiagnosis）
试剂：
2~8℃保存，对其处理应遵守相应的法律规定。
对于所有组分使用的注意事项和预防措施都要将其视为存在传染病原来处理。
源自人血清的原材料全部经过检验，与梅毒、HAV1&
2抗体、HBsAg和HCV抗体无反应。
13.8其他（Others）：
方法学比较或项目的特殊要求等。
14临床意义（Clinicmeaning）：
90%以上的骨基质由1型胶原蛋白组成，1型胶原蛋白主要在骨内合成7。
1型胶原蛋白来源于成纤维细胞和造骨细胞合成的1型前胶原蛋白。
1型前胶原蛋白有N-（氨基）和C-（羧基）端延长部分。
这些延长部分（前胶原肽）在由前胶原蛋白转化成胶原蛋过程中被特殊的蛋白酶除去，随后结合形成骨基质。
分析测定的延长部分是氨基端，故P1NP称为1型胶原蛋白氨基端前胶原肽。
P1NP是一种特殊的1型胶原蛋白沉积指示剂，因此可能作为骨形成的标志；
有骨代谢疾病存在时，血清总P1NP浓度显著增加，而肾功能不全的患者也可能出现这种现象。
同时伴有继发的骨疾病患者也可能影响总P1NP浓度。
有骨代谢疾病存在时，血清总P1NP浓度显著增加，而肾功能不全的患者也可能出现这种现
四、参考文献（References）
1．BoscatoLM,StuartMC.Heterophilicantibodies:
aproblemforallimmunoassays.ClinChen1988:
34:
27-33
2.罗氏totalP1NP试剂说明书
3．中华医学检验全书
4．Rochecobase601操作说明书
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