初级检验技师考试《临床检验基础》讲义第一章血液样本采集和血涂片制备Word文档格式.docx

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血液比密与红细胞含量、红细胞内血红蛋白含量有关：

血浆比密和血浆内蛋白浓度有关。

　　②血浆渗透量：

正常人约为290～310mOsm/（kg·

H20）。

　　3.血液特性：

悬浮稳定性、黏滞性（纤维蛋白原、球蛋白）、凝固性。

　　4.血液生理功能：

具有运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能。

　　血液组成

　　血液标本类型

　　①全血适用于临床血液学检查。

　　②血浆全血+抗凝剂+离心适用于内分泌激素、血栓与止血检查。

　　③血清全血+离心（静置）适用于临床化学和免疫学检测。

　　不加抗凝剂，血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。

　　血浆与血清的区别

　　血浆抗凝出凝血

　　血清清白缺因子

　　二、采血方法

（一）静脉采血法

　　1.概述

　　通常采用肘部静脉、手背静脉、内踝静脉或股静脉。

小儿可采颈外静脉血液。

为避免血小板激活，要使用塑料注射器和硅化处理后的试管或塑料试管。

　　2.操作方法和注意事项

　　准备→检查→选择→消毒→扎压脉带→穿刺→抽血→放血与混匀

（二）皮肤采血法（毛细血管采血法）

　　皮肤采血法曾称为毛细血管采血法，是采集微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，同时含细胞间质和细胞内液。

　　采血针

　　部位→手指（WHO推荐左手无名指指端内侧）和耳垂。

　　耳垂采血痛感较轻，操作方便，但血循环较差，受气温影响较大，检查结果不够恒定（如红细胞、白细胞、血红蛋白和血细胞比容等测定结果比手指血或静脉血高），一般情况下不宜使用。

手指采血操作方便，检查结果比较恒定。

　　2.操作方法

（1）准备：

取合适试管，加适量稀释液。

取微量吸管和乳胶吸头相连，检查连接处是否漏气，或取一次性微量吸管备用。

（2）按摩：

轻轻按摩左手中指或无名指指端内侧，使局部组织自然充血。

　　（3）消毒：

用75%乙醇棉签擦拭采血部位，待干。

　　（4）针刺：

用左手拇指和食指固定采血部位使皮肤和皮下组织绷紧，右手持一次性消毒采血针自指端腹内侧刺入，深度2～3mm，立即出针。

　　（5）拭血：

待血液自然流出后，用无菌干棉球擦去第1滴血。

　　（6）吸血：

用一次性微量吸管吸血，然后用无菌干棉球压住伤口止血。

如血流不畅，可用左手自采血部位远端向指端稍施压使血液流出。

　　（7）稀释：

用无菌干棉球擦净微量吸管外部，将吸管伸入装有稀释液的试管底部，慢慢排出吸管内的血液，并用上清液冲洗管内余血2～3次，最后将试管内的液体混匀。

　　3.注意事项

　　●所选择采血部位无烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症等。

　　●本试验具有创伤性，必须严格按无菌技术操作，防止采血部位感染，做到一人一针一管，避免交叉感染，最好用一次性器材。

　　●皮肤消毒后，应待75%乙醇挥发后采血，否则流出的血液扩散而不成滴。

　　●因第1滴血混有组织液，应擦去。

如血流不畅切勿用力挤压，以免造成组织液混入，影响结果的准确性。

　　●进行多项检查时，采血的顺序依次为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数等。

　　【口诀】

　　静脉肘部是首选，

　　放血别忘拔针头，

　　皮肤通常选手指，

　　婴儿趾或足跟，

　　多项检查小板先。

　　（三）真空采血法

　　真空采血装置有套筒式、头皮静脉式两种。

真空定量采血容器，根据需要标有不同的色码，适于不同检验项目。

　　常用彩色真空采血容器的用途

盖子颜色

添加抗凝剂

注意事项

用途

红色

无

凝块形成约30min

化学、血清学、血库

紫色

EDTA

须颠倒混匀6～8次

全血细胞计数（CBC）

淡蓝色

枸橼酸钠

须颠倒混匀；

血液与抗凝比例为9:

1

凝血检查（PT、APTT、因子测定）

绿色

肝素钠、肝素锂、肝素铵

根据实验需要，选择不同类型的肝素

化学

灰色

氟化钠、草酸钾

不能用于其他化学检查

葡萄糖、糖耐量、乙醇浓度

黄色

多茴香脑磺酸钠

须颠倒混匀8次

血培养

黑色

血液与抗凝剂比例为4:

血沉

　　质量控制

　　1.患者：

患者活动情况、精神状态、药物、年龄、性别、种族、样本采集时间、吸烟、季节等都会影响检测结果。

　　2.采血：

止血带结扎时间应小于1分钟，如超过2分钟，大静脉血流受阻而使毛细血管内压增高，使分子质量＜5000的物质逸入组织液，或缺氧引起血液成分的变化，使检查结果增高或减低。

　　3.溶血：

因容器不洁、接触水、强力振荡、操作不慎等可引起溶血，使红细胞计数、血细胞比容、血浆或血清化学成分（如钾、镁、转氨酶、胆红素）等多项指标检验结果发生变化。

　　4.样本处理：

血液样本采集后应立即送检，并尽快进行检查，样本保存不当直接影响实验结果。

　　5.实验结果分析：

分析结果时，应考虑药物、饮食等因素对结果的影响。

同时，应密切结合临床。

　　三、抗凝剂选择

　　1.乙二胺四乙酸（EDTA）盐

　　常用有钠盐（EDTA-Na2·

H2O）或钾盐（EDTA-K2·

2H2O）。

　　①抗凝原理：

螯合钙离子。

　　②使用方法：

量为1.5～2.2mg/ml血液。

　　③适用范围：

对血细胞形态、血小板计数影响很小。

适用于血液学检查，尤其是血小板计数。

但钠盐溶解度低于钾盐，有时影响抗凝效果。

　　根据国际血液学标准化委员会（ICSH）建议，CBC抗凝剂用EDTA-K2·

2H2O。

不适于凝血检查、血小板功能试验。

　　2.草酸盐

草酸钙沉淀。

　　②适用范围：

双草酸盐。

　　血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等检查，不适于血小板计数、白细胞分类计数。

　　草酸盐对凝血因子V的保护作用差，影响凝血酶原时间测定，而且草酸盐与钙结合后形成的沉淀物，影响自动凝血仪检测结果，因此，草酸盐不适于凝血检查。

　　双草酸盐抗凝剂：

草酸钾可使红细胞体积缩小，草酸铵则可使红细胞胀大，两者按适当比例混合，恰好不影响红细胞形态和体积。

　　3.肝素

　　①抗凝原理：

加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固。

　　②使用方法：

每毫升血液肝素用量为（15±

2.5）U，多为肝素钠盐或钾盐。

　　③适用范围：

红细胞渗透脆性试验，肝素可引起白细胞聚集，瑞氏染色后产生蓝色背景，不适于CBC、细胞形态学检查。

　　4.枸橼酸盐

能与血液中钙离子结合形成螯合物。

配成109mmol/L的浓度。

　　1:

9------凝血

4------红细胞沉降率

凝血、红细胞沉降率、输血保养液。

　　四、血液涂片制备

　　新载玻片常带有游离碱质，必须用约1mol/LHCl浸泡24h，清水冲洗，干燥后备用。

要保持载玻片的清洁、干燥、中性、无油腻。

　　一张良好的血片：

　　①厚薄适宜

　　②头体尾明显

　　③细胞分布均匀

　　④血膜边缘整齐

　　⑤并留有一定空隙

　　血涂片的制备

　　①手工推片法25°

～30°

夹角

　　血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容。

　　②厚血膜涂片法：

疟原虫、微丝蚴等。

　　五、血液细胞染色

　　瑞氏染色法

　　1.染料组成

　　染料组成

　　酸性染料伊红（E-）钠盐阴离子

　　碱性染料亚甲蓝（M＋）氯盐阳离子

　　将适量伊红、亚甲蓝溶解在甲醇中。

　　甲醇的作用：

一是溶解亚甲蓝和伊红；

二是固定细胞形态。

　　2.染色原理

　　既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。

各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。

　　③中性颗粒

　　呈等电状态与E-和M+结合→淡紫红色

　　④红细胞

　　原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁，染成较浓厚的蓝色；

中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；

完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

　　3.pH值的影响

　　细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色；

在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。

　　①pH＜pI→Pr带正电荷多→易与E-结合→染色偏红

　　②pH＞pI→Pr带负电荷多→易与M+结合→染色偏蓝

　　磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8），保证细胞受色时恒定最佳pH条件

　　4.注意事项

（1）血涂片面积太小会影响结果观察，故应在距载玻片另一端2cm处结束涂抹为宜。

（2）血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

　　（3）加染液应适量，过少易蒸发形成沉淀，使细胞不易检查。

　　（4）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上。

冲洗时间不能过久，以防脱色。

如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。

　　（5）染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。

染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

　　【方法学评价】

　　1.血涂片制备

　　用血量少、操作简单，是应用最广泛的方法。

　　疟原虫、微丝蚴等检查可采用厚血膜涂片法。

　　2.血液细胞染色

　　瑞氏染色法：

最经典、最常用。

对于细胞质成分、中性颗粒等可获得很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差。

　　吉姆萨染色法：

对细胞核、寄生虫（如疟原虫等）着色较好，结构更清晰，但对细胞质成分的着色能力略差。

　　瑞-吉姆萨复合染色：

使细胞胞质、颗粒、胞核等均获得满意的染色效果。

　　瑞氏染料的质量规格用吸光度比值（rA）来评价。

　　新配置rA接近2，降到（1.3±

0.1）染料即可使用。

　　新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待亚甲蓝逐渐变为天青B，贮存时间愈久，染色效果愈好。

在贮存过程中，必须加塞，以防甲醇挥发和氧化成甲酸，所用甲醇须为AR级，若其中含过多丙酮，会使染色偏酸，白细胞着色不良。

　　【质量控制】

　　血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之则愈薄。

　　血细胞比容增高、血液黏度较高时，应采用小血滴、小角度、慢推；

血细胞比容减低、血液较稀时，应采用大血滴、大角度、快推。

　　2.血液细胞染色

　　染色深浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。

　　【习题】

　　血清与血浆的区别是

　　A.血清缺少某些凝血因子

　　B.血浆缺少某些凝血因子

　　C.血清缺少凝血酶

　　D.血浆缺少凝血酶

　　E.血清缺少纤维蛋白

『正确答案』A

『答案解析』血清与血浆的差别是：

血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。

　　婴幼儿做血常规检查时，多使用的采血部位是

　　A.颈外静脉

　　B.耳垂毛细血管

　　C.足跟毛细血管

　　D.肘部静脉

　　E.以上都是

『正确答案』C

『答案解析』手指采血操作方便，检查结果比较恒定，世界卫生组织（WHO）推荐采集左手无名指指端内侧血液，婴幼儿可采集大拇趾或足跟内外侧缘血液，严重烧伤患者，可选择皮肤完整处采血。

　　下列说法错误的是

　　A.采血前要仔细检查针头是否安装牢固

　　B.采血前要仔细检查针筒内是否有空气和水分

　　C.如患者静脉暴露不明显，可以用左手食指经消毒后在采血部位触摸

　　D.抽血时针栓可以外抽和内推

　　E.如果患者发生眩晕，应让其平卧休息

『正确答案』D

『答案解析』抽血时只能外抽，不能内推。

　　适用于红细胞沉降率和凝血检查的抗凝剂是

　　A.乙二胺四乙酸（EDTA）盐

　　B.草酸盐

　　C.肝素

　　D.枸橼酸盐

　　E.以上都不是

『答案解析』枸橼酸钠与血液的抗凝比例为1∶9或1∶4。

适用于红细胞沉降率、凝血检查，是输血保养液的成分。

　　影响血涂片时血膜厚度的因素有

　　A.血滴大小

　　B.血黏度高低

　　C.推片角度

　　D.推片速度

『正确答案』E

『答案解析』制备涂片时，血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之则愈薄。

血细胞比容增高、血液黏度较高时，应采用小血滴、小角度、慢推，可得满意结果；

　　瑞氏染色中起溶解作用的有机溶剂是

　　A.无水乙醇

　　B.甲醇

　　C.氯仿

　　D.二甲苯

　　E.乙二醇

『正确答案』B

『答案解析』瑞氏染色中甲醇的作用：

　　下列有关瑞氏染色法的叙述中，哪些是正确的

　　A.是酸性染料亚甲蓝和碱性染料伊红组合的复合染料

　　B.细胞核被染成红色

　　C.新鲜配置的染料可以马上使用

　　D.对细胞的染色原理仅有正负电荷的作用

　　E.是血涂片染色最常用的方法

『答案解析』瑞氏染色法：

是最经典、最常用的血涂片染色方法。