饲料营养成分的测定Word下载.docx

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W1为烘干前试样及称量瓶重（g）；

W2为105℃烘干后试样及称量瓶重（g）；

W0为已恒重的称量瓶重（g）。

1.2.4.2重复性：

每个试样应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

两个平行样测定值相差不得超过0.2%，否则重做。

精密度：

含水量在10%以上，允许相对偏差为1%；

含水量在5-10%时，允许相对偏差为3%,含水量在5%以下时，允许相对偏差为5%。

相对偏差=每个平行测定结果与两次平行测定结果平均值之差/两次平行测定结果平均值。

1.2.5注意事项

1.2.5.1加热时样本中有挥发物质可能与样本中水分一起损失，例如青贮料中的VFA。

1.2.5.2某些含脂肪高的样品，烘干时间长反而增重，为脂肪氧化所致，应以增重前那次重量为准。

1.2.5.3含糖分高的易分解或易焦化试样，应使用减压干燥法（70℃，600mm汞柱以下，烘干5h测定水分）。

1.3SC69-02C型水分快速测定仪

1.3.1原理:

使试样受红外线辐射波的热能后，游离水分迅速蒸发后，即能通过仪器上的光学投影装置直接读出试样物质含水率的百分比。

1.3.2操作步骤

1.3.2.1干燥预热：

预热5分钟，关灯冷却至常温。

1.3.2.2开灯20分钟后，用10g砝码校正零点。

在加码盘中放置5克砝码，并在天平或仪器上称取试样5g。

1.3.2.3加热测试：

开启红外灯，对试样进行加热，在一定的时间后刻度移动静止，表示水分蒸干，记录读数即为水分数。

1.3.2.4取下被测物和砝码。

1.4饲料总水分的计算

饲料分析结果，通常都用风干状态样本的百分含量表示。

为了将这些数字换算成原始饲料或绝干饲料的百分含量，必须计算总水分。

计算公式：

OB=Y+（100-Y）*X/100

OB为饲料中总水分的百分数；

Y为初水分的百分数；

X为吸附水百分数。

2饲料中粗蛋白质的测定

2.1国标法

2.1.1测定原理

凯氏法测定试样含氮量，即在催化剂存在下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。

加入强碱并蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，用标准盐酸滴定测得含氮量，乘以氮与蛋白质的换算系数6.25，计算粗蛋白质含量。

2.1.2仪器设备

样品粉碎机，常量直接蒸馏装置或半微量水蒸汽蒸留装置，凯氏烧瓶（100或150ml），三角瓶（150或250ml），洗瓶（500ml），酸式滴定管（25ml），移液管（10ml），消化电炉。

2.1.3试剂及配制

2.1.3.1浓硫酸：

比重1.84。

2.1.3.2硫酸铜、硫酸钾或硫酸钠。

2.1.3.340%NaOH溶液：

40gNaOH溶于100ml蒸馏水中。

2.1.3.4标准硫酸胺：

优级纯于105℃烘1-2h，干燥器内冷却备用。

2.1.3.52%硼酸溶液：

2g硼酸溶于100ml蒸馏水中。

2.1.3.60.1mol/L盐酸：

8.3mlHCL，加蒸馏水定容于1000ml容量瓶中，混合均匀标定。

2.1.3.7甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：

0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存3个月以内。

2.1.3.8盐酸溶液的标定：

基准物无水碳酸钠于270-300℃灼烧1h至恒重，称0.2g（准至0.0002g），溶于50ml蒸馏水中，加2滴指示剂，用HCL溶液滴定至灰红色。

C（HCL）=W（Na2CO3）/0.053V（HCL）

2.1.4测定步骤

2.1.4.1试样的消化

取0.5-1g试样（含氮量5-80mg），准确至0.0002g，无损地放入凯氏烧瓶中，加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾，与试样混合均匀，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃球。

把凯氏烧瓶放在通风柜里的电炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加大火力（360-410℃），直至全部内容物呈透明的浅蓝色或白色为止。

试剂空白测定：

另取凯氏烧瓶一个，加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃球。

加热消化至瓶内溶液澄清。

另称量标准硫酸铵0.2g，同时按上述方法处理。

结果应为21.19±

0.2%。

2.1.4.2氨的蒸馏

2.1.4.2.1常量直接蒸馏法

待试样消化液冷却，加蒸馏水60-100ml，摇匀，冷却。

沿瓶壁小心加入50mlNaOH溶液，立即与蒸馏装置相连，蒸馏装置冷凝管的末端应浸入25ml硼酸吸收液1cm。

加混合指示剂2滴，轻摇凯氏烧瓶，使溶液混匀，加热蒸馏。

直至馏水液体积约150ml。

先将吸收液取下，再停止加热。

2.1.4.2.2半微量水蒸汽蒸馏法

待试样的消化液冷却，加蒸馏水20ml，移入100ml容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。

取20ml硼酸溶液，加混合指示剂2滴，使半微量装置的冷凝管末端浸入此溶液。

准确移取试样分解液10-20ml，注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mlNaOH溶液，小心拉起玻璃塞使之进入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏4min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。

注：

上述两种蒸馏法测定结果相近，可任选一种。

2.1.4.3滴定

吸收氨后的吸收液立即用0.1mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色即为终点。

将试剂空白测定之消化液和测回收率的硫酸铵的消化液同样处理。

2.1.5测定结果计算

2.1.5.1计算公式

粗蛋白质=C（V1-V2）*0.014*6.25/（WV3/V）*100%

C为HCL标准液的浓度（mol/L）；

W为样本重（g）；

V1为滴定样品时所用HCL标准液体积数（ml）；

V2为空白滴定所用盐酸标准液体积数（ml）；

V为试样分解液总体（ml）；

V3为试样分解液蒸馏用体积（ml）；

0.014为氮的毫克当量；

6.25为氮换算成蛋白质的平均系数。

2.1.5.2重复性

每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

当CP含量在25%以上，允许相对偏差为1%；

当CP含量在10-25%，允许相对偏差为2%；

当CP含量在10%以下，允许相对偏差为3%。

2.2凯氏定氮仪法

2.2.1仪器及试剂准备

同仲裁法

2.2.2操作步骤

2.2.2.1消化前准备

2.2.2.1.1将抽气泵的螺口同水咀的内螺纹联接牢，然后将毒气罩上的胶管一头接在抽气泵的横出口处，抽气泵下端用胶管能止下水道（注：

出水胶管长度不得超出30cm并不准弯曲），开足水咀，使抽气泵有足够的吸力。

2.2.2.1.2接通消化炉上的电源插座，开电源开关。

2.2.2.2消化操作

2.2.2.2.1称取0.3-1g试样、液体2-5ml（含氮量5-80mg）准确到0.0002，干净无损失地转入清洗干净的消化、加入催化剂6.4g再加入浓硫酸8-25ml。

2.2.2.2.2将装有试样的消化管放在消化炉支架上，盖上毒气罩，向下压紧毒气罩锁牢两面锁钩。

2.2.2.2.3手提毒气罩中间连同装有试样的消化管一起移到电热炉上保持消化管在电炉中心，开始样品消化，保持消化管中液体连续沸腾　，沸酸在瓶颈部下冷凝回流。

待溶液消煮至无微小碳粒、呈兰绿色时继续消煮30-40min。

2.2.3蒸馏

2.2.3.1蒸馏前准备

2.2.3.1.1仪器保持目测水平

2.2.3.1.2接通进水口、排水口，注意　排水胶管出水口，不得高于仪器底平面，同时关闭排水阀门。

2.2.3.1.3接通电源　，电源线必须有良好的接地线，时时必须保持同仪器相同，禁止接地借用零线，再检查电源是否牢靠。

2.2.3.2蒸馏操作

2.2.3.2.1先于电源总开关后开自来水龙头，使自来水经过给水口分别进入冷凝管和稳压泵，由稳压泵对蒸汽发生炉供水并进行汽的稳压。

注意水流量以保证冷凝管起到冷却作用并预热15分钟。

2.2.3.2.2开蒸馏开关，待蒸汽导出管放出蒸汽时，关闭蒸汽开关，从观察窗观察待蒸发炉水位稳定（水位保持在电极底部）。

2.2.3.2.3在接收瓶托架上，放上已经加入适量（15ml）接收液（硼酸和混合批示剂）的锥形瓶，使蒸馏导出管未端浸入接收液中。

2.2.3.2.4按下消化管托架将消化好并冷却后的消化管，单个套在防溅管的密封圈上稍加旋转，其保持接口密封，抬上托架，关上防护罩。

2.2.3.2.5开蒸馏水开关，加蒸馏水约10ml左右，再加碱液开关，加适量NaOH溶液至蒸馏液碱性颜色变黑为止。

2.2.3.2.6开抽吸开关，抽出消化管内残存废液，然后关抽吸开关，开蒸馏开关至蒸汽清洗约1min后关蒸馏开关，取下消化管，按上步骤可连续蒸馏。

2.2.4滴定

吸收氨后的吸收液，用标定后的盐酸溶液进行滴定，溶液由兰绿色变为灰紫色为终点。

2.2.5空白测定

用0.1g糖代替样品或不加样品作空白测定。

2.2.6测定结果计算

2.2.6.1计算公式

粗蛋白质%=（V2-V1）*C*0.014*6.25/W*100

V2---滴定试样时消耗酸标准溶液的体积（ml）

V2---滴定空白时消耗酸标准溶液的体积（ml）

C---酸标准溶液的mol/L浓度

W---度样质量

2.2.6.2平等测定的结果用算术平均值表示，保留小数后二位。

2.3饲料中真蛋白质的测定

2.3.1原理

蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水中。

用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀再测蛋白，得出真蛋白质的含量，用真蛋质与粗蛋白质含量之比（蛋白质比率），可判断出鱼粉中是否掺入水溶性非蛋白含氮物质。

鱼粉真蛋白质比率与指标：

进口鱼粉中真蛋白质比率不得小于80%，国产鱼粉中真蛋白质比率不得小于75%。

2.3.2仪器设备

样品粉碎机，常量直接蒸馏装置或半微量水蒸汽蒸留装置，凯氏烧瓶（100或150ml），三角瓶（150或250ml），洗瓶（500ml），酸式滴定管（25ml），移液管（10ml），消化电炉，中速定性滤纸，表面皿，玻璃棒，漏斗。

2.3.3试剂与溶液

2.3.3.1浓硫酸：

2.3.3.2硫酸铜、硫酸钾或硫酸钠。

2.3.3.340%NaOH溶液：

2.3.3.4标准硫酸胺：

2.3.3.52%硼酸溶液：

2.3.3.60.1mol/L盐酸：

8.3mlHCL，加蒸馏水定容于1000ml容量瓶。

2.3.3.7硫酸铜水溶液：

100g/L。

2.3.3.825g/LNaOH溶液：

25gNaOH溶于1000ml蒸馏水中。

2.3.3.9氯化钡试液：

50g/L氯化钡水溶液。

2.3.4样品选取与制备

2.3.5测定步骤

2.3.5.1试样的处理：

称取试样1-2克（精确至0.0001g）于200ml烧杯中，加水50ml煮沸，加入10%的硫酸铜溶液20ml和2.5%的氢氧化钠溶液20ml，边加边搅拌，加完后继续搅拌1min，放置1小时以上或静置过夜，沉淀物以中速定性滤纸过滤，用70℃以上热水反复洗残渣，直至滤液无硫酸根离子为止（取5%氯化钡试液5滴于表面皿中，加2mol/L盐酸1滴，滴入滤液，在黑色背景处观察应无白色沉淀）。

将滤纸与残渣包好，放入烘箱，在65-75℃干燥2h.

2.3.5.2试样的消化：

将烘干的试样连同滤纸一起放入消化管中，以下操作同仲裁法或凯氏定氮仪法。

2.3.6结果计算

2.3.6.1计算公式

粗蛋白质与真蛋白质含量计算方法同仲裁法或凯氏定氮仪法。

真蛋白质比率（%）=真蛋白质含量/粗蛋白质含量*100

2.3.6.2重复性

蛋白质含量在40%以上时允许相对平均偏差2%；

蛋白质含量在40%以下时允许相对平均偏差2.5%。

3饲料中粗脂肪的测定

饲料脂肪的测定，通常是将试样放在特制的仪器中，用脂溶性溶剂（乙醚、石油醚、氯仿等）反复抽提，可把脂肪抽提出来，浸出的物质除脂肪外，还有一部分类脂物质也被浸出，如游离脂肪酸、磷脂、蜡、色素以及脂溶性维生素等，所以称为粗脂肪。

测定粗脂肪的方法常用的有油重法、残余法、浸泡法等。

3.1粗脂肪测定仪法

3.1.1仪器和用具

3.1.1.1分析天平：

感量0.0001g

3.1.1.2实验室用粉碎机或研钵

3.1.1.3干燥箱

3.1.1.4备有变色硅胶的干燥器

3.1.1.5脱脂棉、广口瓶、脱脂细纱、脱脂线

3.1.1.6脂肪测定仪及用具

3.1.1.7滤纸筒：

用直径125mm圆形滤纸摺成外径24mm左右，长度50mm左右的滤纸筒

3.1.2试剂

无水乙醚，AR级

3.1.3操作步骤

3.1.3.1检查电源　上否完好，水源是否接牢，开电源开关，设定温控仪和调温旋扭温度，预热15分钟。

3.1.3.2将抽提筒用开水洗净，洗至筒内无任何杂质，置于干燥箱内烘1小时左右（105℃）取出编号，称重后移入干燥器内冷却备用，编号并称重。

3.1.3.3试样准备

3.1.3.3.1粮食、饲料等低油样品，可直接称取粉碎样品2克左右，精确至0.0002克，先在滤纸筒内底部塞一层脱脂棉，然后将样品转入筒内，再用脱脂棉盖在试样上。

3.1.3.3.2油料等高油样品在备用试样中称取2克左右试样，倒入烘盒中，放入干燥箱中在105℃温度下烘30分钟趁热加入研钵中进行研磨，磨粹后，加入适量的脱脂细砂（约2克左右）与试样同磨，将试样研至出油状后，干净地转入在底部塞脱脂棉滤纸筒内，用脱脂棉醮少许乙醚，揩净研钵上试样和脂肪，并入滤纸筒内，再用脱脂棉盖在试样上。

3.1.3.4试样转入仪器，手握提把，使速节通近软轴提至适当位置，将滤纸筒上口对准速节吸合即可，然后拉下提把，将滤纸筒移至适当高度（使抽提筒放入时不碰），并观察滤纸筒时否在冷凝管中心。

3.1.3.5将抽提筒从干燥器中取出，置于托架上，在抽提　内加入适量的无水乙醚约50ml，然后手握托架手柄将抽提筒移入加热板上，然后用托架将抽提筒抬上，使抽提筒上口对准下保护套的园柱孔，保证二平面接触良好，拉下压杆使锁紧勾子同座子锁牢，然后再将抽提筒稍加旋转，以保证二平面接触良好。

3.1.3.6接通水源给水管、排水管，开启冷凝管旋塞至手柄方向垂直于水平面。

3.1.3.7手握提把上移，将试样降入抽提筒底浸泡，此时，将温控仪和调温旋扭温度设置为60-70℃，具体按溶剂沸点及室温度。

3.1.3.8从溶剂挥发开始浸泡适当时间，将滤纸筒年长约5cm，进行抽提，再将滤纸筒提升1cm，同时将冷凝管旋塞塞至手柄方向平行于水平面进行溶剂回收，时间约为15分钟。

3.1.3.9关闭电源，左手握住压杆，拉开锁紧勾子，使冷凝管复位，同时右手握住托架手柄将托架上抬，等冷凝管复位后，用托架皎抽提筒在加热板上取出，待溶剂完全挥发后转入干燥箱中烘去水分，一般为45分钟（105℃）后移入干燥器内冷却称量，计算含油量，最好使所得油脂达到恒重（即多次烘干、冷却、称量，使最后二次称重，前后重差在0.002g以内）。

3.1.3.10将滤纸筒移至适当位置，摘下滤纸筒后，取出回收溶剂，回收时将溶器放在冷凝管下部，容器口对准冷凝管下口完全打开旋塞，等到聚集在冷凝管内的溶剂流完为止，取出盛有回收溶剂的容器，倒入大容　器中以备用。

3.1.3.11使用结束　，关闭电源　，擦洗干净。

3.1.4时间表

含油量（%）

浸泡时间（h）

提抽时间（h）

0.5-5

0.5

1

5-15

15-25

1.5

25-35

35-45

2.5

2

45-60

3

3.1.5结果计算

粗脂肪%＝W1/W2*100

W1---粗脂肪重量

W2---试样重

3.2国标法

3.2.1测定原理

用乙醚等有机溶剂反复浸提饲料样本，使其中脂肪溶于乙醚，并收集于盛醚瓶中，然后将所有的浸提溶剂加以蒸发回收，直接称量盛醚瓶中的脂肪重，即可计算出饲料样本中的脂肪含量。

3.2.2仪器设备

索氏脂肪抽提器，恒温水浴锅，干燥器，坩埚坩，烘箱，镊子，称量瓶，分析天平，滤纸或滤纸筒（中速脱脂）。

3.2.3试剂

无水乙醚（化学纯）。

3.2.4测定步骤

3.2.4.1索氏提取器应干燥无水，将抽提瓶洗净于105℃±

2℃干燥箱中烘干30min，然后置于干燥器中冷却30min，称重，如此反复进行，至最后两次重量之差小于0.0008g为止。

3.2.4.2精称风干样品2g左右于滤纸筒中或用滤纸包好，并用铅笔注明标号，放入105℃烘箱中烘干2h。

滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度，滤纸包长度。

应以可全部浸泡于乙醚中为准。

3.2.4.3将滤纸筒或包放入抽提管中，在抽提瓶中加无水乙醚60-100ml，在60-75℃的水浴上加热，使乙醚回流每小时约为8-10次。

浸提时间依样品中脂肪含量而定。

一般约需8-16h或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。

3.2.5结果计算

3.2.5.1计算公式

粗脂肪=（W2-W3）/W1*100%

W1为样品重（g）；

W3为抽提瓶重（g）；

W2为盛有脂肪的抽提瓶重量（g）。

3.2.5.2重复性

粗脂肪含量在10%以上，允许相对偏差为3%。

粗脂肪含量在10%以下时，允许相对偏差为5%。

4饲料中粗纤维的测定

4.1粗纤维测定仪

4.1.1仪器和用具

4.1.1.1粗纤维测定仪

4.1.1.2分析天平

4.1.1.3干燥箱

4.1.1.4高温炉

4.1.1.5粉碎机及分样筛

4.1.1.6干燥器

4.1.2试剂

硫酸、氢氧化钠、95%乙醇、乙醚、正辛醇

4.1.3操作前准备

4.1.3.1试剂制备

4.1.3.1.1　硫酸溶液（0.128mol/L）：

取浓硫酸约75ml，用蒸馏水稀释到1000ml，用已知浓度的NaOH液标定后，调整其浓度至1.28±

0.005mol/L的硫酸原液，用前用蒸馏水稀释10倍即可。

4.1.3.1.2碱溶液（0.312mol/L）：

取饱和NaOH溶液（680g/L）约190ml，用不含CO2蒸馏水稀释500ml，用已知浓度的酸液标定后，调整其浓度至3.12±

0.005mol/L的碱原液，用前用蒸馏水稀释10倍即可。

4.1.3.2　样品制备

4.1.3.2.1取有代表性的样品，拣去杂质，按四分法取25g左右。

4.1.3.2.2将样品置在60-65℃烘箱骨干燥8小时左右，冷却后粉碎，全部通过0.84mm2（20目）筛子，其中大于40目的不得小于50%，小于60目不得大于10%。

4.1.3.2.3　样品中的脂肪含量超过1%需要脱脂，（可用测定粗脂肪后残渣分析）。

4.1.3.2.4　将坩锅用开水洗净，洗至坩锅内无杂质，置于干燥箱内105℃烘1小时，移入干燥器内冷却至室温，编号，再置于干燥箱内备用。

4.1.4操作步骤

4.1.4.1在已编号后的坩锅内准确地称取净干的平均试样或烘干无水的脱脂1-3g（谷物2-3g）准确至0.0001g。

4.1.4.2接通电源、水源、开启主机电源开关（自来水尽是开足保证冷凝）。

4.1.4.3打开酸、碱预热瓶上盖，分别　加入已制备的酸碱溶液及蒸馏水，加至预热瓶的90%，盖上冷凝球。

4.1.4.4开启酸预热电源开关，预热酸至微沸。

4.1.4.5将装有试样的坩锅移入仪器温室中，下部放入坩锅座中心，上部对准消煮管下的保护套的内孔，压下手柄并锁紧再一次检查坩锅位置是否准确后，将下阀全部关闭，逐个拉出加热器手柄。

4.1.4.6开启酸阀，逐个开上阀，在消煮管内加入少量约5ml硫酸溶液，再开吸开关，逐个开下阀，抽尽溶液　，关吸开关和全部下阀。

然后将乙预热好的硫酸溶液加至150ml后，再在每个消煮管内加入3-4滴正辛醇，开定时器同时按需要分别开中热器电源开关，调节选位旋钮可观察单个加热电压。

并将电压调至最高（220V）同时开启蒸馏水预热开关（预热水至沸点）。

待消煮液微沸，将电压逐个调至样品无沉淀时将定时旋钮旋至30min，保持消煮液微沸（如发现试样粘壁可补加消煮液），到时加温自动停止。

4.1.4.7开吸开关，再逐个开下阀将消煮液快速抽掉（在10min内抽尽）并用热水洗涤残渣至中性（约三次）后抽尽洗液，在抽滤过程中如发现坩锅被堵塞时关吸开关，开吹开关用气流反冲，发现消煮管内出现气泡后关吹开关开吸开关继续抽吸。

4.1.4.8按4.6步骤进行碱消煮。

4.1.4.9按4.7方法抽洗碱消煮液，逐个推进加热器手柄。

4.1.4.10脱色和胶脂，全部关闭下阀，用胖肚吸管分别在消煮管上口分三次加入95%乙醇浸泡、抽滤（总共约20ml，每次泡浸时间约1min）后，再分三次加入乙醚冲洗（每次约20ml），若已脱脂样品不需要用乙醚冲洗。

4.1.4.11左手压下手柄拉出锁紧勾子缓缓上升，使其复位，带好手套取出存有试样的坩锅，待乙醚和乙醇全部挥发完，再移入干燥箱内在130℃温度下烘2小时，取出置于干燥器内冷却至室温称重（A1）。

4.1.4.12将称重后的坩锅置　入550℃电阻炉内灼烧30min，待炉温降至200℃以下，从电阻炉内取邮置于干燥器内冷却至室温称重（A2）。

4.1.5结果计算

CF%＝（A1-A2）÷

S1×

100

CF—粗纤维的百分含量（%）

A1—坩锅+