饲料中基本营养成分测定标准精文档格式.docx

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2.仪器设备

（1植物样品粉碎机或研钵;

（2试验筛:

孔径0.42mm（40目

（3分析天平:

分度值0.0001g;

（4称量皿:

玻璃或铝质,直径40mm、高25mm

（5电热式恒温烘箱:

控制±

2℃;

（6干燥器:

变色硅胶干燥剂

3.样品的制备

（1选取有代表性的原始样品不少于1000g。

按四分法缩分到250g,风干或以60℃烘干,用植物样品粉碎机碾细,过0.42mm试验筛（注意一定要将样品全部过筛,并混合均匀。

封入样品袋,放在阴凉处保存,以备测定。

（2如果饲料样品是含多汁的鲜样,如青贮、牧草等,无法直接粉碎,应进行预干燥处理:

称取200-300g（准确至0.01g鲜样,在105℃烘箱中烘杀15min,立即把温度降至65℃,烘6-8h,取出,在空气中冷却4h,称量。

失重即初水分w0（H20。

将得到的烘干样,粉碎,过筛,装袋,以备测定。

4测定步骤

（1将称量皿洗净,在（105±

2℃烘箱内烘干1—2h,取出在干燥器内冷却30min,用分析天平称量。

再放入烘箱烘干30min,冷却,称量,直至两次称量之差小于0.0005g为恒重。

（2用分析天平称取2-5g样品,均匀平摊在已恒重的称量皿中,厚度小于0.5cm。

不盖称量皿盖,在（105±

2℃恒温烘箱内烘干2—4h。

取出,盖上称量皿盖,放在干燥器内冷却30min,称量,同样再烘1h,冷却、称量。

直至两次称量之差小于0.002g为恒重。

5.结果计算

（1饲料中水分含量按公式（3—1计算

式中:

W（H2O—饲料中水分的质量分数,%;

m1—105℃烘干前试样和称量皿总质量,

m2一105℃烘干后试样和称量皿总质量,

m0—105℃烘干的称量皿质量,g。

（2每个试样应取两个平行样测定,以算术平均值为测定结果。

两个平行样的相对误差应小于0.2%。

（二粗灰分

粗灰分是饲料中有机物被全部氧化除去后剩余的残渣,主要为矿物质氧化物和盐类等无机物质。

粗灰分的测定方法为高温灼烧法,即将饲料样品放入别550℃±

5℃的高温电炉中灼烧,至灰白色,称残渣的重量。

测定饲料中的粗灰分含量,对评定饲料矿物质营养价值意义不大。

（三粗蛋白质

饲料中的一切合氮物质的总称为粗蛋白质,用饲料中的含氮量乘以6.25进行计算。

粗蛋白质包括真蛋白质（TP和非蛋白质性含氮化合物。

饲料总氮中的非蛋白氮（NPN部分对水产动物几乎无用,评定饲料蛋白质营养价值有时需要对饲料中真蛋白质进行分析,如虾粉中含有大量的几丁质氮。

本方法依据GB/T6432—94饲料中粗蛋白测定方法,适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中粗蛋白的测定。

1原理

凯氏法测定试样蛋白质含量,是在催化剂作用下用浓硫酸将含氮化合物转化为硫酸铵,将生成的硫酸铵在强碱性条件下馏出氨,经硼酸溶液吸收,再用标准酸溶液滴定,将测得的氮含量乘以换算系数6.25,即粗蛋白的含量。

2仪器设备

（1植物样品粉碎机或研钵。

孔径0,42mm（40目。

分度值0.0001g

（4专用消煮炉或可调电炉。

（5酸式滴定管:

10mL或25mL。

（6专用消化管或250mL凯氏瓶。

（7凯氏蒸馏装置:

常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏也可采用专用定氮仪。

（8三角烧瓶:

150mL或250mL。

3试剂

（1硫酸（AR,ρ=1.84。

（2混合催化剂:

0.4硫酸铜（CuSO4·

5H2O,AR和6g硫酸钾（K2SO4,AR,磨细混均。

（340%氢氧化钠溶液:

称取40g氢氧化钠（NaOH,CP溶于1mL蒸馏水中。

（42%硼酸溶液:

称取20g硼酸（H3BO3,AR1000mL蒸馏水中。

（5混合指示剂:

将0.1%甲基红乙醇溶液与0.5%溴甲酚绿乙醇溶液,按1:

1等体积混合。

（60.1000mol/L盐酸（HCl标准溶液:

取8.3mL盐酸（AR注入1000ml蒸馏水。

用无水碳酸钠（280℃烘干法标定准确浓度。

称取0.2000g,溶于50mL水,加混合指示剂,用0.1mol/L盐酸滴定至暗红色。

同时滴定空白,加以校正。

（7蔗糖（AR

（8硫酸铵（AR

4操作步骤

（1选取有代表性的样品用四分法缩分至200g,风干或以65℃烘干后粉碎,过0.42mm试验筛,封入样品袋,在阴凉处保存,以备分析。

（2用分析天平准确称取0.3—1.0g制好的试样,放入专用消化管或凯氏瓶中,加入混合催化剂2.0g和12mL硫酸,盖好专用消化管盖或凯氏瓶口盖一漏斗,置于专用消煮炉或可调电炉上消煮,开始用小火加热消煮,待泡沫消失后再加大火力保持微沸状态,直至溶液透明呈蓝绿色并继续消煮2h.

（3将消化的试样放冷,加入50-60mL蒸馏水,摇匀,冷却。

将蒸馏装置冷凝管末端浸入内装25mL2%硼酸溶液的三角瓶底部,加入2滴混合指示剂。

然后小心地向消化液内加入50mL40%氢氧化钠溶液,立即进行加热蒸馏,直至馏出液体体积为100mL为止。

取下三角瓶使冷凝管末端离开液面,继续蒸馏1-2min,并用蒸馏水冲洗冷凝管末端,停止蒸馏。

（4滴定:

用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变为红色为终点。

（5空白测定:

称取0.5g蔗糖代替试样,按上述操作步骤测定。

（1饲料中粗蛋白质的含量按公式计算

w（CP—饲料中粗蛋白的质量分数,%;

V—滴定试样时所消耗的标准盐酸溶液的体积,mL

V0—滴定空白时所消耗的标准盐酸溶液体积,mL

CB—标准溶液盐酸的量浓度,MryLI

0.0140—氮的摩尔质量,kg/mol;

m—试样质量,g

（2每试样取两个平行样进行测定,取平均值为分析结果方法允许相对偏差≤5%。

6注意事项

（1方法的可靠程度可用硫酸铵代替试样进行测定氮含量,与化学式计量氮作比较,误差应为±

0.2%。

例如,准确称取0.2000g硫酸铵测定含氮量应为（21.19±

0.2%

（2如果试样中蛋白质含量高,可适当减少称样量,同时考虑蒸馏完全的问题,可适当多蒸几分钟,以保证蒸馏完全,防止对下一个样品造成的记忆效应。

（3凯氏定氮法己沿用了l00多年,目前已有全自动定氮仪,这类仪器从消化、蒸馏到滴定可自动完成,但仪器价格较贵。

目前国产半自动定氮仪实际上是一套蒸馏装置,消化、滴定还要另行试验。

（4GB6432—94国标方法中规定样品消化时要加入玻璃球以防爆沸,但我们的经验证明,由于加入大量混合催化剂呈颗粒状,不产生爆沸,故无需加入。

另外,本实验考虑消化需要回流过程和减少蒸馏逸出造成的氨损失,建议消化管或凯氏瓶要加盖消化。

（5国标方法中使用邻苯二甲酸氢钾作为基准物标定盐酸溶液。

实际上使用无水碳酸钠基准物质标定盐酸溶液也是很方便的。

（四粗脂肪

粗脂肪包括了饲料中可溶于乙醚的所有成分,故又称乙醚浸出物。

通常用索氏抽提器回流浸提饲料样品进行粗脂肪的测定。

按照国标GB/T6433—94,饲料中粗脂肪的测定方法适用于各种单一饲料、混合饲料和配合饲料的分析。

采用索氏（Soxhlet脂肪提取器用乙醚抽提试样,抽提物的总质量为粗脂肪含量。

2.仪器设备

（1植物样品粉碎机或研钵.

孔径0.42mm（40目

分度值0.0001g

（4电热恒温水浴锅:

室温-100℃。

（5鼓风电热烘箱:

50-200℃。

（6索氏脂肪提取仪（带球形冷凝管100-150mL

（7滤纸或滤纸筒:

中速,脱脂。

（8干燥箱:

变色硅胶或无水氯化钙作干燥剂

无水乙醚（AR

4.分析步骤

（1选取有代表性的试样,用四分法缩分至200g,风干或以65℃烘干后粉碎,过0.42mm试验筛,混匀封于样品袋内,于阴凉处保存,以备分析。

（2索氏提取器应干燥无水,把抽提瓶（内装数粒沸石在（150±

2℃烘箱内烘干1—2h,取出放入干燥器内冷却30min,称量。

再烘30min,同样冷却,称重。

两次称量之差小于0.0008g为恒重。

（3视饲料中脂肪含量称取l—5g（准确至0.0002g置于滤纸筒内,或用滤纸包好,放入l05℃烘干1—2h,取出放入抽提器内,滤纸包应完全浸入乙醚,向抽提瓶内加60-100mL乙醚,装好回流装置,在65-75℃水浴上加热回流,控制乙醚回流速度为每小时8-10次,共回流50-70次。

取出试样,仍用原抽提瓶回收乙醚,取抽提瓶,在水浴上蒸除残存乙醚。

（4将抽提瓶外水分擦干,放入（150±

2℃烘箱内烘干2h,取出放入干燥器内冷却30min,

称量。

同样再烘lh,冷却,称量。

两次称量之差小于0.001g为恒重。

5结果计算

（1饲料中粗脂肪的含量按公式计算

w（EE——饲料中粗脂肪的质量分数,%:

m2——己恒重的抽提瓶质量,g;

ml——己恒重的拍提瓶和粗脂肪的总质量

m——风干试样质量,g。

（2母个试秤取两个平行样测定,取平均值作为分析结果相对误差应小于5%。

6.注意事项

（1本文介绍的方法又称为油重法,GB/T6433—94中称为仲裁法。

如果样品数量多,又不作为仲裁,可采用减重法。

将风干样称量装入于105℃烘干恒重的滤纸筒内,包好,在105℃烘干,冷却称量。

放入拍提瓶内抽提50—70次。

取出滤纸包,吹干乙醚,放入（105±

2℃烘箱内烘干2h.取出放入干燥器内冷却30min,称量。

滤纸包的减量为粗脂肪含量。

该方法抽提器内一次可放3-5个样品抽提。

由于样品量大,抽提次数可适当多些。

（2目前,全自动脂肪测定仪已有销售,使用这类仪器可按仪器说明书操作。

（五粗纤维

粗纤维是植物细胞壁的主要组成成分,它包括纤维素、半纤维素、多缩戊糖、木质素及角质素等成分。

粗纤维影响饲料的消化,但适宜的水平对动物是必需的。

测定饲料中粗纤维的含量是控制饲料中适宜的粗纤维水平的前提。

通常用稀硫酸和稀Na0H溶液溶解饲料样品,不溶性残渣为粗纤维。

概略养分分析法测定粗纤维时,由于部分半纤维素、木质素溶解于酸、碱中,导致结果出现误差。

VanSoest（1976腾出了改进方案,用中性洗涤纤维（NDF、酸性洗涤纤维（ADF、酸性洗涤木质素（ADL,作为测定饲料中纤维性物质的指标。

国标GB/T6434-94饲料中粗纤维的测定方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

牧草、青贮等饲料中粗纤维高达60%—80%（干物质计,而精料中,如玉米、豆粕中粗纤维不过2%—4%。

1原理

饲料用稀酸和稀碱在规定条件下分别进行消煮,再用乙醇除去可溶物,经高温灼烧后扣除矿物质所剩余的物质总称。

主要包括纤维素、半纤维素、木质素和少量杂质,如果胶等。

2仪器设备

孔径1mm。

分度值0.0001g。

（4可调电炉。

（5高温电阻炉。

（6电热恒温箱。

（7消煮器:

有冷凝球的600mL高型杯或有冷凝管的瓶。

（8抽滤装置:

包括真空泵、吸滤瓶和30ML滤埚（内铺孔径0.42mm不锈钢网或G2玻璃砂滤埚。

（9干燥器:

变色硅胶或无水氯化钙作干燥剂。

3.试剂

（10.225mol／L硫酸（1/2H2SO4溶液：

6.93mL硫酸（AR，将98％移入500mL蒸馏水，冷却后定容至1000mL。

用氢氧化钠标准溶液标定其浓度，允许误差±

0.005mol/L。

（20.313mol/L氢氧化钠（NaOH溶液：

准确称取12.52g氢氧化钠溶于500mL蒸馏水，冷却后定容至1000mL。

该溶液可用邻苯二甲酸氢钾基准物质标定，浓度允许误差±

0.005mol/L。

标定方法：

称取1.8000g105-110℃烘干的邻苯二甲酸氢钾基准物，溶于5mL不合二氧化碳的蒸馏水中，加2滴1％酚酞指示剂，用配好的氢氧化钠溶液滴定至粉红色。

同时滴定空白。

按以下式计算氢氧化钠溶液的量浓度c（NaoH：

式中：

c（NaOH—NaOH标准溶液浓度，mol/Lm—邻苯二甲酸氢钾的质量，gV1—滴定时所用NaoH溶液体积，mL；

V0—滴定空白时所用NaoH溶液体积，mL：

0.2042—邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，kg/mL。

（3酸洗石棉：

将市售的酸洗石棉先用盐酸溶液（1+3煮沸30min，过滤烘干后于550℃高温电阻炉内灼烧16h。

用0.255mol/L硫酸（1/2H2SO4溶液浸泡并煮沸30min，过滤，用水洗净，再用0．313nDl／L氢氧化钠（NaOH溶液煮沸30min，过滤，可先用少量酸洗一次，再用水冲洗至中性，烘干后于550℃高温电阻炉内灼烧2h。

冷却装瓶备用，此酸洗石棉空白试验每克含粗纤维值应小于0.001g。

（495％乙醇（CP（5乙醚（CP（6正辛醇：

（AR。

4．测定步骤（1取有代表性饲料样品用四分法缩至200g，风干或以65℃烘箱烘干后，用植物粉碎机粉细，全部通过lmm试验筛，混匀，封入样品袋，作为试样以备测定。

（2用分析天平准确称取1—2g试样，放入消煮器内，加入200mL0.255mol/L硫酸（1/2H2SO4溶液和一滴正辛醇，装好冷凝球或冷凝管立即快速加热至沸，调节加热器保持微沸状态30min。

立即抽滤（古氏坍塌内铺孔径6.5μm尼龙布。

残渣用蒸馏水洗至中性，抽干，用200mL0．313mol/L氢氧化钠（Na0H溶液将残渣完全转入原消煮溶器内，同样煮沸30min。

立即用已于550℃恒重的滤埚铺酸洗石棉0.2-0.3g过滤。

先用25mL0.255mol/L硫酸（1/2H2SO4溶液洗涤一次，再用蒸馏水沉至中性。

抽干后用15mL乙醇洗涤一次。

（3抽干后将滤埚放入130℃烘箱内烘干2h取出放入干燥器内冷却30min，称量。

再移入550℃高温电阻炉内灼烧1h，取出冷却至130℃左右，放入干燥器内冷却30min，称量。

5计算结果饲料中的粗纤维含量按下式计算式中：

w（CF——饲料中粗纤维的质量分数，％：

m1——130℃烘干后滤埚和试样残余物总质量，gm2—550℃灼烧后滤埚和试样残渣总质量，g；

m一称取的试样质量，g。

6注意事项（1饲料样品脂肪含量一般不超过l0％，但肉骨粉类等动物性饲料，脂肪超过10％，应先用乙醚进行脱脂后再按消化步骤处理样品。

（2目前市售的专用粗纤维测定仪种类很多，不同仪器操作步骤可按仪器说明书进行，但基本步骤为：

称取1—2g试样于G2玻璃砂滤埚，放入热萃取器，从顶部加入预热至沸的0.255mol/L硫酸（1/2H2SO4溶液200mL和正辛醇2滴，将加热钮开至最大，当溶液沸腾时，调节至微沸保持30min，抽滤，用沸蒸馏水沉至中性，抽干，加入预热至沸的0．313mol/L氢氧化钠溶液200mL，同样煮沸30min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性。

再用25mL95％乙醇洗涤，抽干。

移入（130±

2℃烘箱烘干2h，取出放入干燥器冷却30min，称量。

再放入550℃高温电阻炉内灼烧1-2h至灰分变白，冷却，称重。

按上式计算粗纤维含量。

（六无氮浸出物概略养分分析法中不直接分析无氮浸出物，而是将总量减去水分、灰分、粗蛋白质、粗纤维和粗脂肪，所得的差定义为无氮浸出物。

它主要包括糖和淀粉，但也有部分半纤维素和木质素。