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饲料营养价值的测定

A.水分的测定

饲料中的水分有两种存在形式,游离水和结合水。

饲料分析中经常测定总水分,采用干燥失重的方法。

对于不同饲料,干燥的方法应考虑其理化性质而有所区别。

尽管饲料中的水分营养价值不大,但是测定饲料中的水分可得出饲料干物质的含量,这与饲料的能量含量密切相关,因此水分的测定意义重大。

本方法依据GB6435—86饲料中水分的测定,它适用于配合饲料和单一饲料水分含量的测定,但不适用于做饲料的奶制品、动植物油中的水分测定。

1.方法原理

试样在(105±2)℃烘箱内和常压条件下烘干至恒重的质量为水分。

2.仪器设备

(1)植物样品粉碎机或研钵;

(2)试验筛:

孔径0.42mm(40目)

(3)分析天平:

分度值0.0001g;

(4)称量皿:

玻璃或铝质,直径40mm、高25mm

(5)电热式恒温烘箱:

控制±2℃;

(6)干燥器:

变色硅胶干燥剂

3.样品的制备

(1)选取有代表性的原始样品不少于1000g。

按四分法缩分到250g,风干或以60℃烘干,用植物样品粉碎机碾细,过0.42mm试验筛(注意一定要将样品全部过筛,并混合均匀)。

封入样品袋,放在阴凉处保存,以备测定。

(2)如果饲料样品是含多汁的鲜样,如青贮、牧草等,无法直接粉碎,应进行预干燥处理:

称取200-300g(准确至0.01g)鲜样,在105℃烘箱中烘杀15min,立即把温度降至65℃,烘6-8h,取出,在空气中冷却4h,称量。

失重即初水分w0(H20)。

将得到的烘干样,粉碎,过筛,装袋,以备测定。

4测定步骤

(1)将称量皿洗净,在(105±2)℃烘箱内烘干1—2h,取出在干燥器内冷却30min,用分析天平称量。

再放入烘箱烘干30min,冷却,称量,直至两次称量之差小于0.0005g为恒重。

(2)用分析天平称取2-5g样品,均匀平摊在已恒重的称量皿中,厚度小于0.5cm。

不盖称量皿盖,在(105±2)℃恒温烘箱内烘干2—4h。

取出,盖上称量皿盖,放在干燥器内冷却30min,称量,同样再烘1h,冷却、称量。

直至两次称量之差小于0.002g为恒重。

5.结果计算

(1)饲料中水分含量按公式(3—1)计算

W(H2O)={(m1-m2)/(m1-m0)}*100

式中:

W(H2O)—饲料中水分的质量分数,%;

m1—105℃烘干前试样和称量皿总质量,

m2一105℃烘干后试样和称量皿总质量,

m0—105℃烘干的称量皿质量,g。

(2)每个试样应取两个平行样测定,以算术平均值为测定结果。

两个平行样的相对误差应小于0.2%。

B.饲料中总总磷的测定

一范围

  本方法规定了用钼黄分光光度法测定饲料中总磷量。

  本方法适用于饲料原料(除磷酸盐外)及饲料产品。

 

  二原理

  将试样中有机物破坏,使磷元素游离出来,在酸性溶液中,用钒钼酸铵处理,生成黄色的[(NH4)PO4NH4VO3﹒16MoO3]络合物,在波长400nm下进行比色测定。

  三试剂

  实验用水应符合GB/T6682中三级水的规格,本方法中所用试剂,除特殊说明外,均为分析纯。

 1盐酸溶液,1+1。

 2硝酸,ρ约1.40g/mL。

  3高氯酸,ρ约1.68g/mL。

 4钒钼酸铵显色剂:

称取偏钒酸铵1.25g,加水200mL加热溶解,冷却后再加入250mL硝酸,另称取钼酸铵25g,加水400mL加热溶解,在冷却的条件下,将两种溶液混合,用水定容至1000mL,避光保存,若生成沉淀,则不能继续使用。

  5磷标准液,将磷酸二氢钾在105℃干燥1h,在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水,定量转入1000mL容量瓶中,加硝酸3mL,用水稀释至刻度,摇匀,即为50μg/mL的磷标准液。

  四仪器设备

  1实验室里样品粉碎机或研钵。

  2分析筛,孔径0.42mm(40目)。

3分析天平,感量0.0001g。

  4分光光度计,可在400nm下测定吸光度。

  5比色皿,1cm。

  6高温炉,可控温度在(550±20)℃。

  7瓷坩埚,50mL。

  8容量瓶,50、100、1000mL。

  9移液管,1.0、2.0、5.0、10.0mL。

  10三角瓶,250mL。

  11凯氏烧瓶,125、250mL。

  12可调温电炉,1000W。

  6五试样制备

  取有代表性试样至少2kg,用四分法将试样缩分至250g,粉碎过0.42mm孔筛,装入样品瓶中,密封保存备用。

六操作步骤

  1试样的分解

  1.1干法{不适用于含磷酸氢钙[Ca(H2PO4)2]的饲料}

  称取2g~5g试料(精确至0.0002g)于坩埚中,在电炉上小心炭化,再放入高温炉,在550℃下灼烧3h(或测定粗灰分后连续进行),取出冷却,加入10mL盐酸和硝酸数滴,小心煮沸约10min,冷却后转入,100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,为试样分解液。

  1.2湿法

  称取0.5g~5g试料(精确于0.0002g)于凯氏烧瓶中,加入硝酸30mL,小心加热煮沸至烟逸尽,稍冷,加入高氯酸10mL,继续加热至高氯酸冒白烟(不得蒸干),溶液基本无色,冷却,加水30mL,加热煮沸,冷却后,用水转移水100mL容量瓶中并稀释至刻度,摇匀,为试料分解液。

  1.3盐酸溶解法(适于微量元素顶混料)

  称取0.2g~1g试料(精确至0..0002g)于100mL烧杯缓缓中入盐酸10mL,使其全部溶解,冷却后转入100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,为试料分解液。

  2工作曲线

  准确移取磷标准液0.0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mL于50mL容量瓶中,各加10mL钒钼酸铵显色剂,用水稀释到刻度,摇匀,常温下放置10min以上,以0.0mL溶液为参比,用1cm比色皿,在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度,以磷含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制工作曲线。

  3试料的测定

  准确移取试料分解液1.0mL~10.0mL(含磷量50μg~750μg)于50mL容量瓶中,加入钒钼酸铵显色剂10mL,用水稀释到刻度,摇匀,常温下放置10min以上,用1cm比色皿在400nm波长下测定试样分解液的吸光度,在工作曲线上查得试样分解液的磷含量。

  七结果计算

  1测定结果按式

(1)计算:

  X=m1V/104V1m…………

(1)

  式中:

X——以质量分数表示的磷含量,%;

  m1——由工作曲线查得试样分解液磷含量,μg;

  V——试样分解液的总体积,mL;

  m——试样的质量,g;

  V1——试样测定的移取试样分解液体积,mL;

  2结果表示

每个试样取每个平行样进行测定,以其算术平均值为结果,所得结果应表示至小数点后两位。

C.饲料中粗纤维的测定

1适用范围

本标准适用于各种饲料和单一饲料。

2原理

用固定量的酸和碱,在特定条件下消煮样品,再用乙醚、乙醇除去醚溶物,经高温灼烧扣除矿物质的量,所余量称粗纤维。

它不是一个确切的化学实体,只有在公认强制规定的条件下,测出的概略养分。

其中以纤维素为主,还有少量半纤维素和木质素。

3仪器和设备

3.1实验室用样品粉碎机或研钵。

 3.2分样筛:

孔径0.45mm(40目)。

 3.3分析天平:

感量0.0001g。

 3.4电热恒温箱:

可控制温度在130℃。

 3.5高温炉:

电加热,有高温计且可控制炉温在550-600℃。

 3.6消煮器:

有冷凝球的高型烧杯(500ml)或有冷凝管的锥形瓶。

 3.7过滤装置:

抽真空装置、吸滤瓶及漏斗。

 3.8滤器:

200目不锈钢网或尼龙网,或G2号玻璃滤器。

 3.9古氏坩锅:

30ml,预先加入30ml酸洗石棉悬浮液,再抽干,以石棉厚度均匀、不透光为宜。

 3.10干燥器,以氯化钙(干燥试剂)或变色硅胶为干燥剂。

4试剂

4.1硫酸(GB625-77):

分析纯,0.255±0.005N,每100ml含硫酸1.25g,应用氢氧化钠标准溶液标定。

 4.2氢氧化钠(GB629-81):

分析纯,0.313±0.005N,每100ml含氢氧化钠1.25g,应用邻苯二甲酸氢钾法标定,不含或微含碳酸钠。

 4.3酸洗石棉:

市售或自制(中等长度酸洗石棉在1:

3的盐酸中煮沸45min,过滤后于550℃灼烧16h,用0.255N硫酸浸泡且煮沸30min,过滤且用水洗净酸,同样用0.313N氢氧化钠溶液煮沸30min,过滤,用少量硫酸溶液洗一次,再用水洗净,烘干后于550℃灼烧2h,其空白试验结果为每克石棉含粗纤维值小于1mg。

 4.495%乙醇(GB679-80):

化学纯。

 4.5乙醚(HG3-1002-79):

化学纯。

 4.6 正辛醇:

分析纯,防泡剂。

5试样的选取和制备

取具有代表性试样,粉碎至40目,用四分法缩减至200g,放入密封容器,防止试样成分变化和变质量。

6测定步骤

称取1-2g试样,准确至0.0002g,用乙醚脱脂(含脂肪小于1%可不脱脂,含脂肪1-10%不是必须的,但建议脱脂。

含脂肪在10%以上必须脱脂,或用测脂肪后的试样残渣),放入消煮器,加浓度准确为0.255N的且已沸腾的硫酸溶液200ml和1滴正辛醇,立即加热,应使其在2min内沸腾,且连续微沸30±1min,注意保持硫酸浓度不变,试样不就离开溶液沾到瓶壁上(可补加沸蒸馏水)。

随后过滤,用沸蒸馏水洗至不含酸,取下不溶物,放入原容器中,加浓度准确且已沸腾氢氧化钠溶液200ml,同样准确微沸

30min。

立即在铺有石棉的古氏坩埚*上抽滤,先用硫酸溶液25ml洗涤,再用沸蒸馏水洗至洗液为中性。

用乙醇15ml洗残渣,再将古氏坩埚和残渣放入烘箱,于130±2℃下烘干2h,在干燥器中冷却至室温,称重。

再于550±25℃的高温炉中灼烧30min,于干燥

容器中冷却至室温后称重。

7测定结果的计算

7.1计算见下式:

W2-W1

粗纤维(%)=──────×100

W

  式中:

W1─130℃烘干后坩埚及试样残渣重,g;

W2─550℃灼烧后坩埚及试样残灰重,g;

W─试样(未脱脂时)重量,g。

 7.2重复性

每个试样取两平行样进行测定,以其算术平均值为结果。

  粗纤维含量在10%以下,允许相差(绝对值)为0.4。

  粗纤维含量在10%以上,允许相对偏差为4%。

*铺两层玻璃纤维有利于过滤。

D.饲料中粗脂肪的测定

一、适用范围:

本方法适用于各种单一、混合、配合饲料和预混料。

二、原理:

索氏脂肪提取器中用乙醚提取风干试样中的脂肪,计算样品的失重。

其中失重除脂肪外,还有有机酸、磷脂、脂溶性维生素、叶绿素等,因而测定结果称粗脂肪或乙醚提取物。

三、仪器设备:

1、实验室用样品粉碎机或研钵。

2、分析筛:

孔径0.45mm(40目)。

3、分析天平:

感量0.0001g。

4、电热恒温水浴锅:

室温—100℃。

5、干燥箱:

50℃—200℃。

6、索氏脂肪提取器(带球形冷凝器):

100或150ml。

7、滤纸:

中速、脱脂。

8、干燥器:

用变色硅胶为干燥剂。

9、棉线绳。

四、试剂:

无水乙醚(分析纯)。

五、试样的选取和制备:

取具有代表性试样,用四分法缩减至50g,粉碎至40目。

六、测定步骤:

1、将棉线绳剪成适当大小置于无水乙醚中浸泡24小时(注意密闭、防火)后取出,晒干备用。

将滤纸置于105℃干燥箱中干燥2小时,取出称其恒重。

2、将待测试样粉碎过40目后,取适量于135℃干燥箱内干燥40分钟,制成风干样品。

3、用分析天平精确称取2.5g风干试样,置于预先标号恒重的滤纸中包好,并用处理好的棉线绳系好。

4、滤纸包放于抽提管内,在抽提瓶中加入60—100ml无水乙醚,在40—45℃的水浴中加热,使乙醚回流。

待3小时左右(油高的5小时)用滤纸检查抽提管流出的乙醚,挥发后不留下油迹为抽提终点。

5、取出试样后,置于恒重的铝盒内,于135℃干燥箱内,恒重40分钟,并将棉线剪去,置于干燥器中冷却30分钟后,称重。

七、测定结果的计算和表达:

1、风干样中粗脂肪含量:

EE%=M0-(M3-M2-M1)×100

M0

其中:

M0为风干试样重,g。

M1为滤纸恒重,g。

M2为铝盒恒重,g。

M3为烘后铝盒+滤纸包重,g。

2、原样中粗脂肪含量:

EE%=(1-原样中水份含量)×风干样中粗脂肪含量

3、重复性:

每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。

粗脂肪含量在10%以上(含10%)允许相对偏差为3%;

粗脂肪含量在10%以下时,允许相对偏差为5%。

E.饲料中维生素B1的测定方法

  适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、维生素预混料中维生素B1的测定。

萃取液的浓度范围为0.02~0.2μg/mL(不适用在有吸附硫胺素或影响硫色素荧光干扰物质的情况下)。

  2引用标准

  GB6682实验室用水规格

  3方法原理

  试样中的维生素B1(即硫胺素C12H17ON4SCl)经稀酸消化、酶分解、吸附剂的吸附分离提纯后,在碱性条件下被铁氰化钾氧化生成荧光色素——硫色素,用正丁醇萃取。

硫色素在正丁醇中的荧光强度与试样中维生素B1的含量成正比,依此进行定量测定。

  4试剂和溶液

  除特殊规定外,本标准所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或相应纯度的水。

  4.1盐酸溶液,0.1mol/L:

将8.5mL盐酸(GB622)用水稀释至1000mL。

  4.2硫酸溶液,0.05mol/L:

将2.8mL浓硫酸(GB625)加入水中,稀释至1000mL。

  4.3乙酸钠溶液,2.0mol/L:

取164g无水乙酸钠(GB694)或272g结晶乙酸钠(CH2COONa·3H2OGB693)溶于水,稀释至1000mL。

  4.4淀粉酶悬浮液,100g/L:

用2.0mol/L乙酸钠溶液(4.3)悬浮10g淀粉酶制剂(Takadiastase,或相当活性的其他磷酸酯酶),稀释至100mL,使用当日制备。

  4.5氯化钾(GB646)溶液,250g/L。

  4.6酸性氯化钾溶液:

将8.5mL浓盐酸加入至氯化钾溶液(4.5)中,惭稀释至1000mL。

  4.7氢氧化钠(GB629)溶液,150g/L。

  4.8铁氰化钾(GB644)溶液,10g/L。

  4.9碱性铁氰化钾溶液:

4.0mL的铁氰化钾溶液(4.8)与氢氧化钠溶液(4.7)混合使之成100mL,此液4h内使用。

  4.10冰乙酸(GB676)溶液,30mL/L。

  4.11人造沸石(Q/HG12-445-63,60~80目)使用前必需活化,方法如下:

  将适量人造沸石置于大烧杯中,加入10倍容积的热乙酸溶液(4.10),用玻璃棒均匀搅动10min,使沸石在乙酸溶液中悬浮,待沸石沉降后,弃去上层乙酸液。

重复上述操作两次。

换用5倍其容积的热氯化钾溶液(4.5)搅动清洗两次,每次15min。

再用热乙酸溶液洗10min。

最后用热蒸馏水清洗沸石至无氯离子(用10g/L硝酸银水溶液检验)。

用布氏漏斗抽滤,100℃烘干,贮于磨口瓶中备用。

使用前,检查沸石对硫胺素标准溶液的回收率,如达不到92%,需重新活化沸石。

  4.12硫胺素标准溶液

  4.12.1硫胺素贮备液Ⅰ:

盐酸硫胺素纯品(中国药典参照标准),于五氧化二磷干燥器24h,称取0.0500g,溶解于ph4.5~4.3的20%(V/V)乙醇溶液中并定容至500mL,盛于棕色瓶中低温保存。

该溶液每毫升含0.1mg硫胺素。

  4.12.2硫胺素贮备液Ⅱ:

取硫胺素贮备液Ⅰ(4.12.1)10mL用酸性20%乙醇溶液定容至100mL,盛于棕色瓶中低温保存。

该溶液每毫升中含10μg硫胺素。

  4.12.3硫胺素标准工作液:

取贮备液Ⅱ(4.12.2)2mL与65mL盐酸溶液(4.1)和5mL乙酸钠溶液(4.3)混合,用水定容至100mL。

现用现配。

该溶液每毫升中含0.2μg硫胺素。

  4.13硫酸奎宁(Q/HG22-797-68)溶液

  4.13.1硫酸奎宁贮备液:

称取硫酸奎宁0.1000g,用0.05mol/L硫酸(4.2)溶解并定容至1000mL,贮于棕色瓶中低温保存。

若溶液混浊则需重新配制。

该溶液每毫升中含0.1mg硫酸奎宁。

  4.13.2硫酸奎宁工作液:

取贮备液(4.13.1)3mL,用0.05mol/L硫酸定容至1000mL,盛于棕色瓶中,低温保存。

该溶液每毫升中含0.3μg硫酸奎宁。

  4.14正丁醇(HG3-1012),其荧光强度不超过硫酸奎宁工作液的4%,否则需用全玻璃蒸馏器重蒸馏,取114℃~118℃馏份。

  4.15无水硫酸钠(HG3-123)。

  5仪器、设备

  5.1荧光分光光度计,备1cm石英比色杯。

  5.2电热恒温水浴。

  5.3电热恒温箱。

  5.4实验室用样品粉碎机。

  5.5分析天平:

感量0.0001g。

  5.6注射器:

10mL。

  5.7吸附分离柱:

全长235mm,外径×长度如下:

  上端贮液槽容量约为50mL,35mm×70mm;中部吸附管8mm×130mm;下端35mm;下端35mm拉成毛细管。

  5.8反应瓶:

具塞离心管25mL。

  6试样的制备

  选取有代表性的饲料样品,至少500g,四分法缩减至100g,磨碎,过0.28mm孔筛,混匀,装入密闭容器中,避光低温保存备用。

  7分析步骤

  7.1称样:

称取单一饲料、配合饲料或浓缩饲料1~2g(约含硫胺素4~20μg),精确至0.001g。

维生素预混料0.25~0.5g,精确至0.0001g,置于100mL容量瓶中。

  7.2提取

  7.2.1水解:

将0.1mol/L盐酸(4.1)65mL加入试样瓶(7.1)中,经沸水浴加热30min,开始加热5~10min内不时摇动容量瓶,以防结块。

或于121℃~123℃15磅高压釜中加热30min。

  7.2.2酶解:

冷却容量瓶至50℃以下,加5mL淀粉酶悬浮液(4.4),摇匀。

该试液的pH约为4.0~4.5,将容量瓶于45℃~50℃恒温箱中保温3h,取出冷却调整pH4.5,用水稀释至100mL。

  7.2.3过滤:

将试液通过无灰滤纸过滤弃去初滤液5mL,收集滤液于锥形瓶中。

预混料提取液需逐级稀释,使之含硫胺素约为0.2μg/mL。

  7.3提纯

  7.3.1制备吸附柱:

取1.5g活化人造沸石(4.11)置于50mL小烧杯中,加入3%乙酸溶液(4.10)浸泡。

将脱脂棉置于吸附柱底部,用玻璃棒轻压。

然后将乙酸浸泡的沸石全部洗入柱中(勿使吸附柱脱水),过柱流速≤1mL/min为宜。

再用10mL近沸的洗柱一次。

  7.3.2吸25mL提取液(7.2.3),慢慢加入制备好的吸附柱中,弃去滤液,用每份5mL近沸的水洗柱三次,弃去洗液。

  7.3.3用25mL60℃~70℃酸性氯化钾(4.6)分三次连续加入吸附柱,收集洗脱液于25mL容量瓶中,冷却后用酸性氯化钾定容,混匀。

  7.3.4同时用25mL硫胺素标准工作液(4.12.3)。

重复7.3.1~7.3.3操作,作为外标。

  7.4氧化与萃取(以下操作避免紫外光照射)

  7.4.1于两只反应管中各吸入5mL洗脱液(7.3.3),记作A、B。

  7.4.2向B管加3mL氢氧化钠溶液(4.7),再向A管中加3mL氧化剂碱性铁氰化钾溶液(4.9),轻轻旋摇。

依次立即向A管加15mL正丁醇加塞,剧烈地振摇15s,再向B管加入15mL正丁醇加塞。

共同振摇90s,静置分层。

  7.4.3用注射器吸去下层水相,向各反应管加入约2g无水硫酸钠(4.15),旋摇,待测。

  7.4.4同时将5mL作为外标的洗脱液(7.3.4),置入另两只反应管,相应地记作C、D,按7.4.1~7.4.3操作。

  7.5测定

  7.5.1用硫酸奎宁工作液(4.13.2)调整荧光仪,使其稳定于一定数值,作为仪器工作的固定条件。

  7.5.2于激发波长365nm,发射波长435nm处测定各反应管中萃取液[(7.4.3)和(7.4.4)]的荧光强度。

  8分析结果的计算和表述

  8.1计算公式

  硫胺素(维生素B1)含量以mg/kg(或g/kg)表示,按下式计算:

  硫胺素(VB1mg/kg)=〔(T-T0)/(S-S0)〕×C×(V2/V1)×(V0/m)

  式中:

T──A管试液的荧光强度;T0──B管试液空白的荧光强度;S──C管标准溶液的荧光强度;S0──D管标准溶液空白的荧光强度;C──硫胺素标准工作液浓度,μg/mL;0──提取液总体积,mL;V1──分取提取液过柱的体积,mL;V2──酸性氯化钾洗脱液体积,mL;m──试样质量,g。

  8.2平行测定结果用算术平均值表示,保留有效数3位。

  9重复性

同一分析者对同一试样同时或快速连续进行两次测定,所得结果之间的差值;在硫胺素含量小于或等于5.0mg/kg时,不得超过平均值的15%。

在硫胺素含量大于5.0mg/kg时,不得超过平均值的10%。

在硫胺素含量大于50mg/kg时不得超过平均值的5%

F.饲料中粗蛋白测定方法

1主题内容与适用范围

  本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

2引用标准

  GB601 化学试剂 滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备

3原理

  凯氏法测定试样中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵。

加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。

4试剂

4.1硫酸(GB625):

化学纯,含量为98%,无氮。

4.2混合催化剂:

0.4g硫酸铜,5个结晶水(GB665),6g硫酸钾(HG3—920)或硫酸钠(HG3—908),均为化学纯,磨碎混匀。

4.3氢氧化钠(GB629):

化学纯,40%水溶液(m/V)。

4.4硼酸(GB628):

化学纯,2%水溶液(m/V)。

4.5混合指示剂:

甲基红(HG3—958)0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿(HG3—1220)0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为三个月。

4.6盐酸标准溶液:

邻苯二甲酸氢钾法标定,按GB601制备。

4.6.1盐酸标准溶液:

c(HCl)=0.1mol/L。

8.3mL盐酸(GB622,分析纯),注入1000mL蒸馏水中。

4.6.2盐酸标准溶液:

c(HCl)=0.02mol/L。

1.67mL盐酸(GB622,分析纯),注入1000mL蒸馏水中。

4.7蔗糖(HG3—1001):

分析纯。

4.8硫酸铵(GB1396

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