免疫荧光-石蜡切片资料下载.pdf
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4)goat血清5)一抗稀释液:
3%BSAinTBS,pH7.4操作流程1.脱蜡和水化脱蜡前,应将组织切片在室温中放置60min或60恒温箱中烘烤20min。
1)组织芯片置于二甲苯中浸泡10min,更换二甲苯后再浸泡10min;
2)无水乙醇中浸泡5min;
3)95%乙醇中浸泡5min;
4)70%乙醇中浸泡5min;
2.PBS洗两次各5min。
3.抗原修复,用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。
煮沸热修复电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液(pH6.0)至95左右,放入组织芯片加热1015min,必须等缓冲液冷却后,方能将切片取出。
4.PBS洗5min。
5.滴加5%正常山羊血清,室温封闭30min,甩去多余液体。
6.滴加一抗,室温1小时或者4过夜或者371小时(4过夜后在37复温45min)。
7.PBS洗3次每次5min。
8.滴加荧光标记的二抗,室温避光孵育1h。
(注意抗体针对的种属,使用浓度:
Alexa488、Alexa555为1:
1000,Cy3、FITC为1:
200,用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。
)9.PBS洗3次每次5min。
10.Hoechst染色:
把1000Hoechst用PBS稀释,50ul/片,染色10min。
11.PBS洗3次每次2min。
12.封片:
MountingMedium封片,等MountingMedium凝固后再拍照。