溶液配制方法p.docx
《溶液配制方法p.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《溶液配制方法p.docx（27页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
溶液配制方法p
实验室常用试剂、缓冲液的配制方法
1MTris-HCl（pH7.4,7.6,8.0）组份浓度：
1MTris-HCl，配制量：
1L
配制方法：
1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N）
浓盐酸的体积（ml）
pH
8.6
14
21
28.5
38
46
56
66
71.3
76
9.0
8.8
8.6
8.4
8.2
8.0
7.8
7.6
7.4
7.2
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
Tris–HCl冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。
pH
X（毫升）
pH
X（毫升）
7.10
7.20
7.30
7.40
7.50
7.60
7.70
7.80
7.90
8.00
45.7
44.7
43.4
42.0
40.3
38.5
36.6
34.5
32.0
29.2
8.10
8.20
8.30
8.40
8.50
8.60
8.70
8.80
8.90
26.2
22.9
19.9
17.2
14.7
12.4
10.3
8.5
7.0
三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2-CH2OH-CHOCH2-NH2分子量=121.14;0.1M溶液为12.114克/升。
Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
0.5MEDTA（pH8.0）组份浓度：
0.5MEDTA，配制量：
1L，配制方法：
1.称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水，充分搅拌。
2.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）。
注意：
pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
3.加去离子水将溶液定容至1L，适量分成小份后，高温高压灭菌，室温保存。
10×TEBuffer（pH7.4,7.6,8.0）组份浓度：
100mMTris-HCl,10mMEDTA，配制量：
1L
3M醋酸钠（pH5.2）组份浓度：
3M醋酸钠，配制量：
100ml
配制方法：
1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。
PBSBuffer（1×）组份浓度：
137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4，配制：
1L
配制方法：
称量试剂:
8gNaCl,0.2gKCl,1.44gNa2HPO4,0.24gKH2PO4，置于1L烧杯中。
加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
高温高压灭菌后，室温保存。
PB缓冲液（pH8.0）：
1LNaH2PO40.16537g,Na2HPO46.7817g.
注意：
上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
10M醋酸铵组份浓度：
10M醋酸铵，配制量：
100ml
配制方法：
1.称量77.1g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100ml。
3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意：
醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
常用缓冲液的配制方法
1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M）
Xml0.2M甘氨酸+Yml0.2M盐酸再加水稀释至200ml.
pHX/mlY/mlpHX/mlY/ml
2.25044.03.05011.4
2.45032.43.2508.2
2.65024.23.4506.4
2.85016.83.6505.0
甘氨酸分子量＝75.070.2M甘氨酸溶液含15.01g/L.
2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05M）
Xml0.2M邻苯二甲酸氢钾+Yml0.2M盐酸再加水稀释至200ml.
pHXYpHXY
2.254.6703.251.470
2.453.9603.450.990
2.653.2953.650.597
2.852.6423.850.263
3.052.032
邻苯二甲酸氢钾分子量＝2.4.230.2M邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85g/L.
3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
pH0.2MNa2HPO4/ml0.1M柠檬酸/mlpH0.2MNa2HPO4/ml0.1M柠檬酸/ml
2.20.4019.65.210.729.28
2.41.2418.765.411.158.85
2.62.1817.825.611.608.40
2.83.1716.835.812.097.91
3.04.1115.896.012.637.37
3.24.9415.066.213.226.78
3.45.7014.306.413.856.15
3.66.4413.566.614.555.45
3.87.1012.906.815.454.55
4.07.7112.297.016.473.53
4.28.2811.727.217.392.61
4.48.8211.187.418.171.83
4.69.3510.657.618.731.27
4.89.8610.147.819.150.85
5.010.309.708.019.450.55
Na2HPO4分子量＝141.980.2M溶液含28.40g/L
Na2HPO4·2H2O分子量＝178.050.2M溶液含35.61g/L
C6H8O7·H2O分子量＝210.140.1M溶液含21.01g/L
4.柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液
pH钠离子浓度/M柠檬酸C6H8O7·H2O/g氢氧化钠NaOH/g浓盐酸HCl/ml终体积/L
2.20.202108416010
3.10.202108311610
3.30.202108310610
4.30.20210834510
5.30.352451446810
5.80.4528518610510
6.50.3826615612610
使用时可以每升中加入1g酚，若最后pH有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1M）
pH
0.1M柠檬酸/ml
0.1M柠檬酸钠/ml
pH
0.1M柠檬酸/ml
0.1M柠檬酸钠/ml
3.0
18.6
1.4
5.0
8.2
11.8
3.2
17.2
2.8
5.2
7.3
12.7
3.4
16.0
4.0
5.4
6.4
13.6
3.6
14.9
5.1
5.6
5.5
14.5
3.8
14.0
6.0
5.8
4.7
15.3
4.0
13.1
6.9
6.0
3.8
16.2
4.2
12.3
7.7
6.2
2.8
17.2
4.4
11.4
8.6
6.4
2.0
18.0
4.6
10.3
9.7
6.6
104
18.6
4.8
9.2
10.8
C6H8O7·H2O分子量＝210.140.1M溶液含21.01g/L
Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.120.1M溶液含29.41g/L
6.乙酸-乙酸钠缓冲液（0.2M）
pH0.2MNaAc/ml0.2MHAC/mlpH0.2MNaAc/ml0.2MHAC/ml
3.60.759.254.85.904.10
3.81.208.805.07.003.00
4.01.808.205.27.902.10
4.22.657.355.48.601.40
4.43.706.305.69.100.90
4.64.905.105.89.400.60
NaAc分子量＝136.090.2M溶液为27.22g/L
7.磷酸盐缓冲液（PB）磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）
pH
0.2MNa2HPO4/ml
0.2MNaH2PO4/ml
pH
0.2MNa2HPO4/ml
0.2MNaH2PO4/ml
5.8
8.0
92.0
7.0
61.0
39.0
5.9
10.0
90.0
7.1
67.0
33.0
6.0
12.3
87.7
7.2
72.0
28.0
6.1
15.0
85.0
7.3
77.0
23.0
6.2
18.5
81.5
7.4
81.0
19.0
6.3
22.5
77.5
7.5
84.0
16.0
6.4
26.5
73.5
7.6
87.0
13.0
6.5
31.5
68.5
7.7
89.5
10.5
6.6
37.5
62.5
7.8
91.5
8.5
6.7
43.5
56.5
7.9
93.0
7.0
6.8
49.5
51.0
8.0
94.7
5.3
6.9
55.0
45.0
Na2HPO4·2H2O分子量＝178.050.2M溶液含35.61g/L
Na2HPO4·12H2O分子量＝358.220.2M溶液含71.64g/L
NaH2PO4·H2O分子量＝138.010.2M溶液含27.6g/L
NaH2PO4·2H2O分子量＝156.030.2M溶液含31.21g/L
（2）磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15M）
pH
1/15MNa2HPO4/ml
1/15MKH2PO4/ml
pH
1/15MNa2HPO4/ml
1/15MKH2PO4/ml
4.92
0.10
9.90
7.17
7.00
3.00
5.29
0.50
9.50
7.38
8.00
2.00
5.91
1.00
9.00
7.73
9.00
1.00
6.24
2.00
8.00
8.04
9.50
0.50
6.47
3.00
7.00
8.34
9.75
0.25
6.64
4.00
6.00
8.67
9.90
0.10
6.81
5.00
5.00
9.18
10.00
0
6.98
6.00
4.00
Na2HPO4·2H2O分子量＝178.051/15M溶液含35.61g/L
KH2PO4分子量＝136.091/15M溶液含9.078g/L
8.磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05M）
Xml0.2MKH2PO4+Yml0.2MNaOH再加水稀释至20ml
pH（20℃）X/mlY/mlpH（20℃）X/mlY/ml
5.850.3727.052.963
6.050.5707.253.500
6.250.8607.453.950
6.451.2607.654.280
6.651.7807.854.520
6.852.3658.054.680
9.巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）
pH0.04M巴比妥钠/ml0.2M盐酸/mlpH0.04M巴比妥钠/ml0.2M盐酸/ml
6.810018.48.41005.21
7.010017.88.61003.82
7.210016.78.81002.52
7.410015.39.01001.65
7.610013.49.21001.13
7.810011.479.41000.70
8.01009.399.61000.35
8.21007.21100
巴比妥钠分子量＝206.180.04M溶液为8.25g/L
11.硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）
pH0.05M硼砂/ml0.2M硼酸/mlpH0.05M硼砂/ml0.2M硼酸/ml
7.41.09.08.23.56.5
7.61.58.58.44.55.5
7.82.08.08.76.04.0
8.03.07.09.08.02.0
硼砂Na2B4O7·10H2O分子量＝381.430.05M（=0.2M硼酸根）溶液为19.07g/L
硼酸H3BO3分子量＝61.840.2M溶液为12.37g/L
硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存
12.甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（0.05M）
Xml0.2M甘氨酸+Yml0.2M氢氧化钠再加水稀释至200ml
pHX/mlY/mlpHX/mlY/ml
8.6504.09.65022.4
8.8506.09.85027.2
9.0508.810.05032.0
9.25012.010.45038.6
9.45016.810.65045.5
甘氨酸分子量＝75.070.2M甘氨酸溶液含15.01g/L
13.硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）
Xml0.05M硼砂+Yml0.2M氢氧化钠再加水稀释至200ml
pHX/mlY/mlpHX/mlY/ml
9.3506.09.85034.0
9.45011.010.05043.0
9.65023.010.15046.0
硼砂Na2B4O7·10H2O分子量＝381.430.05M（=0.2M硼酸根）溶液为19.07g/L
14.碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）Ca2+，Mg2+存在时不得使用
pH20℃9.169.409.519.789.9010.1410.2810.5310.83
37℃8.779.129.409.509.729.9010.08102810.57
0.1M碳酸钠/ml123456789
0.1M碳酸氢钠/ml987654321
Na2CO3·10H2O分子量＝286.20.1M溶液28.62g/L，NaHCO3分子量＝84.00.1M溶液8.40g/L
3M醋酸钠（pH5.2）组份浓度：
3M醋酸钠，配制量：
100ml
配制方法：
1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。
10M醋酸铵，配制量：
100ml，配制方法：
1.称量77.1g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100ml。
3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意：
醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
Tris-HCl平衡苯酚
配制方法：
1.使用原料：
大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。
但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。
同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。
因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2.操作注意：
苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。
所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3.苯酚平衡：
因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。
从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。
该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
苯酚/氯仿/异戊醇（25:
24:
1）
配制方法：
1.说明：
从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:
24:
1）。
氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配制方法：
将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:
1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
10%（W/V）SDS组份浓度：
10%（W/V）SDS，配制量：
100ml
配制方法：
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解;2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2;3.将溶液定容至100ml后，室温保存。
2NNaOH组份浓度：
2NNaOH，配制量：
100ml
配制方法：
1.量取80ml去离子水置于100～200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。
4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
SolutionI（质粒提取用试剂）
组份浓度：
25mMTris-HCl（pH8.0）,10mMEDTA,50mMGlucose，配制量：
1L
配制方法：
1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
2.高温高压灭菌后，4℃保存。
3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml）。
SolutionII（质粒提取用）组份浓度：
200mMNaOH，1%（W/V）SDS，配制量：
500ml
配制方法：
1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10%SDS 50ml,2NNaOH50ml;
2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀，3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月，注意：
SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌
SolutionIII（质粒提取用）组份浓度：
3MKOAc,5M乙酸，配制量：
500ml
配制方法：
1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。
2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至500ml。
4.高温高压灭菌后，4℃保存。
1MDTT组份浓度：
1MDTT，配制量：
20ml，配制方法：
1.称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。
2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。
3.适量分成小份后，-20℃保存。
IPTG（Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside）异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，别名Isopropylβ-D-Thiogalactoside白色或白色粉末,溶于水后呈清亮无色液体分子式：
C9H18O5S分子量:
238.30，2-8°C冷藏保存。
10mMATP组份浓度：
10mMATP，配制量：
20ml
配制方法：
1.称取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料离心管内。
2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。
3.适量分成小份后，-20℃保存。
饱和硫酸铵
1.不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据
温度（℃）
0
10
20
25
30
重量百分数
41.42
42.22
43.09
43.47
43.85
摩尔浓度
3.9
3.97
4.06
4.10
4.13
每1000g水中含硫酸铵摩尔数
5.35
5.53
5.73
5.82
5.91
1000ml水中用硫酸铵克数
706.8
730.5
755.8
766.8
777.5
每1000ml溶液中含硫酸铵克数
514.8
525.2
536.5
541.2
545.9
2.调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）
在25℃硫酸铵终浓度，%饱和度
硫酸铵初浓度，％饱和度
10
20
25
30
33
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
90
100
每1000ml溶液加固体硫酸铵的克数
0
56
114
144
176
196
209
243
277
313
351
390
430
472
516
561
662
767
10
57
86
118
137
150
183
216
251
288
326
365
406
449
494
592
694
20
29
59
78
91
123
155
189
225
262
300
340
382
424
520
619
25
30
49
61
93
125
158
193
230
267
307
348
390
4
升级会员 