生物化学实验课程讲义131106Word文档下载推荐.docx
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建立安全意识以及实验室安全操作细节的掌握。
三.讲授基本内容和要点
一、实验项目安排
第一阶段：
实验室基础知识讲解
生物化学实验安全知识及相关要求（整班）
2
冯唐锴
试剂发放及实验报告的要求（整班）
蔡新安
第二阶段：
蔡新安指导常规实验
1
糖类性质试验准备—溶液的配制（分2组）
糖类性质试验——颜色反应（分2组）
3
糖类性质试验——还原反应（分2组）
4
总糖的测定——蒽酮比色法（分2组）
第三阶段：
冯唐锴指导常规实验
5
氨基酸的分离鉴定-纸层析法（分2组）
6
氨基酸及蛋白质的呈色反应（分2组）
7
蛋白质的沉淀及变性（分2组）
8
紫外分光光度法测定蛋白质浓度（分2组）
9
酪蛋白的制备（分2组）
10
酶的性质1（分2组）
11
酶的性质2（分2组）
第四阶段：
冯唐锴老师带领的小组选作实验
12
几种重要的DNA提取缓冲液的配制（选做）
6课时
13
枯草芽孢杆菌的培养（选做）
14
枯草芽孢杆菌的培养及其DNA的提取（选做）
15
枯草芽孢杆菌基因组DNA的电泳鉴定（选做）
16
紫外分光光度法鉴定DNA浓度（选做）
17
植物中DNA的分离（选做）
18
酵母RNA的分离及组分鉴定（选做）
合计
32
备注：
小组选作实验中，重点进行前四个实验，选取自愿及表现良好的同学组建3-5人的实验小组进行，循环开展，未参与的同学撰写实验报告，进行学习。
二、实验室仪器设备
一般生化实验室所需仪器
仪器
型号
数量
备注
中央台
边台
双蒸水仪
SZ-96
正常使用
高速冷冻离心机
TGL20MII
高速离心机
TGL-16金坛精达
低速离心机
冰箱
电子天平
漩涡振荡器
烘箱
电泳仪电源
DYY-6C北京六一
电泳仪水槽
*
组织捣碎器
JJ-2
磁力搅拌器
28491
数显电热恒温水浴锅
HH-2
酸度计
微波炉
凯氏定氮仪
未使用
紫外分光光度计
棱光752sp
一台氘灯不亮，将返修
真空抽滤机
待装备
便携式三用紫外线分析仪
ZF-7A
黄路标和王炳山各外借1个
紫外分析仪
外借分子实验室
PCR仪
MGL-96G杭州朗基
转借至分子实验室
气浴恒温振荡器
ZD-85金坛精达
尚未借入
显微镜
玻璃器皿及耗材
名称
规格
不锈钢饭盒
17.5×
14×
5.5cm
30
枪头盒（10μl）
枪头盒（200μl）
枪头盒（1000μl）
离心管架
1.5ML/2ML
玻璃钟罩
19
龙头瓶
20L
塑料手套
1箱
三、实验室注意事项及要求
（一）课间注意事项
1、必须穿实验服进入实验室
2、实验室中不许追打吵闹。
3、没有必要的前提下，不允许看手机等做与实验项目无关的事情。
4、实验过程中有空闲的时候，请注意熟悉实验内容，撰写实验报告，勿聊天说话。
5、实验过程中有药品或器材的确实，应帮助老师填写药品器材申购单
6、缺少仪器药品请就近借用，克服困难。
7、除教材、实验报告，记录本以外，其他物品如书包，其他教材等勿带入实验室。
8、使用了实验仪器，都要填写实验记录。
9、实验室使用完毕之后，要安排专人打扫卫生。
10、组建实验准备小组，抽取空余时间，帮助老师配置药剂。
（二）课后需要同学们做的事情
1、打扫生物化学实验室
2、搬运实验试剂仪器。
3、清理玻璃器材，填写常规器材的补充购置单。
4、清点仪器药品，填写药品购买申报单。
四、实验室安全基础知识
（一）实验室的安全守则
1、了解实验室环境，熟悉水、电、煤气阀门、灭火器材，沙箱以及急救药箱的放置地点和使用方法，并妥善爱护。
安全用具和急救药箱不得转移他用。
进实验室前应检查仪器是否完整无损，装置是否正确。
离开实验室前，仔细检查水电，煤气阀门是否关好。
2、实验进行时，不得离开岗位，要注意反应进行时的情况和装置有无漏气和破裂等现象。
3、当进行有可能发生危险的实验时，要根据实际情况采取必要的安全措施，如带防护眼镜、面罩或橡皮手套等，但不能戴隐形眼镜。
4、使用易燃易爆药品时，应远离火源。
实验试剂不得入口。
严禁在实验室内吸烟或吃食物。
试验结束后要洗手。
（二）各种灭火器材及使用
1、泡沫灭火器
泡沫灭火器适用于扑救油制品、油脂等火灾不能扑救火灾中的水溶性可燃、易燃液体的火灾，如醇、酯、醚、酮等物质火灾；
也不能扑救带电设备。
2、四氯化碳灭火器
用于电气设备及汽油、丙酮等着火。
四氯化碳是一种阻火能力很强的灭火剂，但是当受热到250℃以上，能与水蒸汽作用生成盐酸和光气，如与赤热的金属，尤其是铁（如电焊机的外壳）接触，则生成光气更多，光气是剧毒气体，空所中最高允许浓度仅0.0005毫克/升。
所以在使用四氯化碳灭火器时，必须带防毒面具，并站在上风处。
因此尽量减少使用。
3、1211灭火器
适用范围
1、可燃气体火灾。
如甲烷、乙烷、丙烷、乙烯、煤气等气体的火灾。
2、甲、乙、丙类液体火灾，即易燃、可燃液体火灾。
如甲醇、乙醇、丙醇、苯、煤油、汽油、柴油等的火灾。
3、可燃得固体物质的表面火灾。
如纸张、木材、织物等的表面火灾。
4、电气设备和电气线路火灾。
如变配电设备、发电机组、电缆及电子设备等电气火灾。
禁用范围:
无空气仍能迅速氧化的化学物质和强氧化剂。
如硝化纤维、炸药、氧化氮、氟等。
活泼金属及其氢化物。
如钾、钠、镁、钛、锆、铀、钚、氢化钾、氢化钠等。
能自行分解的有机过氧化物、联氨等。
能自燃的物质。
如磷等。
可燃固体质的阴燃火灾。
4、二氧化碳灭火器
适用范围：
易燃可燃液体、易燃气体和油脂类，带电电气设备火灾。
5、干粉灭火器
干粉灭火器适用于可燃固体、可燃液体、可燃气体、电器着火等所引起的火灾，也适用于档案资料、纺织品及珍贵仪器着火等，干粉是不导电的，可以用于扑灭带电设备的火灾，是一种高效灭火器
（三）实验室事故的预防
1、火灾的预防
实验室中使用的有机试剂大多数是易燃的着火是有机实验室常见的事故之一，应尽可能避免使用明火。
防火的基本原则注意事项：
（1）远离火源，勿将易燃液体放在敞口容器直火加热；
加热必须在水浴中进行，切勿是容器密闭。
（2）在进行易燃物质实验时，应养成先将酒精一类易燃的物质搬开的习惯。
（3）蒸馏装置不能漏气，一旦漏气，必须停止加热，检查原因。
从蒸馏装置最好用橡皮管引入下水道或室外。
接受瓶出来的尾气的出口应远离火源，
（4）回流或蒸馏低沸点易燃液体时应注意：
加热时要搅拌，避免发生暴沸现象
严禁直接加热
瓶内液量不能超过瓶容积的三分之二
加热速度宜慢不宜快，避免局部过热。
总之，蒸馏或回流低沸点易燃液体时，一定要谨慎，不能大意
（5）油浴加热蒸馏或回流时，必须十分注意避免由于冷凝用水溅入热油浴中致使油外溅到热源上而引起火灾的危险。
通常发生危险的原因是由于橡皮管套进冷凝管上不紧密，开动水阀过快，水流过猛把橡皮管冲出来，或者由于套不进漏水。
所以要求橡皮管套入侧管时要紧密，开动水阀时也要慢动作，使水流慢慢通入冷凝管内。
（6）当处理大量的可燃性液体时，应在通风橱中或在指定地方进行，室内应无火源。
（7）不得把燃着或者带火星的火柴梗或纸条等乱抛掷，也不得丢入废物缸中。
否则，会发生危险。
（8）易燃液体不能随便倒入下水道，必须放在指定容器中。
（9）中午，晚上休息时间一定要注意水、电压力。
避免造成不必要的危险和错误。
（四）爆炸的预防
（1）蒸馏装置必须正确，不能造成密闭体系，应使装置与大气相通；
减压蒸馏时，要用圆底烧瓶做接收器，不可用三角烧瓶。
否则，容易爆炸。
（2）切勿使易燃易爆的气体接近火源，有机溶剂如醚类和汽油一类的蒸汽与空气相混时极为危险，可能会由于一个热的表面或者一个火花、电花而引起爆炸。
（3）易爆物品的残渣，必须经妥善处理后销毁，不得任意乱丢。
过氧化物则用还原剂处理。
又如银氨溶液也应随用随配，过后立即销毁，久放容易形成易爆物质-氮化三银。
（4）易爆物品的搬运和取用，不可受到猛烈撞击、震动和磨擦。
易爆有机溶剂，严禁倒入下水道，以免燃烧、爆炸。
（5）卤代烷勿与金属钠接触，因反应剧烈易发生爆炸。
钠屑需放于指定位置，并远离水源。
（五）有毒物品及化学药剂管理
1.一切有毒物品及化学药剂，要严格按类存放保管、发放、使用，并妥善处理剩余物品和残毒物品。
2.在实验中尽量采用无毒物质或少毒物质来代替有毒物，采用较好的实验方案、设施、工艺来减少或避免实验过程中有毒物质的扩散。
3.实验室应装设通风排毒的通风橱，在使用大量易挥发毒物的实验室应装设排风扇等强通风设备；
必要时也可用真空泵、水泵连接在发生器上，构成封闭实验系统，减少毒物在室内逸出。
4.注意保持个人卫生和遵守个人防护规程，绝对禁止在实验室内饮食、吸烟或存放食物。
应穿戴好防护衣物；
实验完毕及时洗手；
工作时间内，须经仔细洗手、漱口后，才能在指定的房间饮水、用餐。
5.在实验室无通风橱或通风不良、实验过程又有大量有毒物逸出时，实验人员应按规定分类使用防毒口罩或防毒面具，不得掉以轻心。
（六）事故的处理和急救
1.烧伤急救
⑴普通轻度烧伤，可擦用清凉乳剂于创伤处，并包扎好；
略重的烧伤应立即送医院处理。
⑵化学烧伤时，应迅速解脱衣服，首先清除残存在皮肤上的化学药品，用水多次冲洗，同时视烧伤情况立即送医院救治或通知医院前来救治。
⑶眼睛受到任何伤害时，应立即请眼科医生诊断。
但化学灼伤时，应分秒必争，在医生来前即抓紧时间，立即用蒸馏水冲洗眼睛，冲洗时须用细水流，而且不能直射眼球。
2.创伤的急救
小创伤可用消毒纱布清洗伤口，并用3.5%的碘酒涂在伤口周围，包扎起来。
若出血较多，可用压迫法止血，同时处理好伤口，扑上止血消炎粉等，较紧地包扎起来即可。
较大的创伤或者动、静脉出血，甚至骨折时，应立即用急救绷带在伤口出血部上方扎紧止血，用消毒纱布盖住伤口，立即送医院救治。
止血时间长时，应注意每隔1-2小时适当放松一次，以免肢体缺血坏死。
3.中毒的急救
对中毒者的急救主要在于把患者送往医院或医生到达之前，尽快将患者从中毒物质区域中移出，并尽量弄清致毒物质，以便协助医生排除中毒者体内毒物。
如遇中毒者呼吸停止，心脏停跳时，应立即施行人工呼吸、心脏按摩，直至医生到达或送到医院为止。
4.触电的急救
有人触电时应立即切断电源或设法使触电人脱离电源；
患者呼吸停止或心脏停跳时应立即施行人工呼吸或心脏按摩，并尽快送往医院救治。
5．化学灼伤的急救
⑴发现化学烧伤后，要立即脱去被污染的衣物、鞋袜，随后用大量清水冲洗创面15-20分钟。
有条件时边冲洗边用pH试纸不断测定创面的酸碱度，一直冲洗到中性（PH=7）。
⑵干石灰或浓硫酸烧伤时，不得先用水冲洗。
因它们遇水反而放出大量的热，会加重伤势。
可先用干布（纱布或棉布）擦试干净后，再用清水冲洗。
⑶、氢氟酸烧伤时，要引起足够的重视。
因为氢氟酸烧伤开始时不明显，病人也无不适的感觉，当稍有疼痛时，说明烧伤已到严重程度。
氢氟酸不但能腐蚀皮肤、组织和器官，还可腐蚀至骨骼。
经常是麻痹1-2小时后才感到疼痛。
万一被氢氟酸（包括氟化物，它们能水解成氢氟酸）烧伤，应立即用水冲洗几分钟，然后在伤口处敷以新配制的20％MgO甘油悬浮液。
⑷如完全可以确定是酸碱类化学烧伤，可慎用低浓度的弱酸、弱碱进行中和处理。
酸性烧伤可用清水或2％的碳酸氢钠（即小苏打）溶液冲洗；
碱性烧伤可用2％醋酸溶液或2％的硼酸溶液冲洗，冲洗后涂上油膏，并将伤口扎好。
重者送医院诊治。
⑸溴灼烧，应立即用酒精洗涤，涂上甘油，用力按摩，将伤处包好。
如眼睛受到溴蒸气刺激，暂时不能睁开时，可对着盛有氯仿或酒精的瓶内注视片刻。
⑹热沥青（柏油）烧伤时，千万不能用手去揭已沾在皮肤上的沥青，否则可加重创面皮肤的损伤，加重伤情。
清除沾在皮肤上的沥青可用棉花或纱布，沾上二甲苯或氯仿（也可用豆油或菜油），轻轻擦试。
擦干净后，再涂上一层抗生素药膏。
使用氯仿时要注意不宜过多，以防止引起局部麻醉。
6、口、眼的灼伤
口、眼皮肉对腐蚀性药物特别敏感，一旦灼伤，如不及时处理，容易发炎甚至溃烂。
在使用危险药品时，要特别注意保护口腔与眼睛，应戴上防护眼镜和口罩。
（1）眼睛的化学灼伤：
凡溶于水的化学药品进入眼睛，应立即用水洗涤，然后根据不同情况分别处理：
如属碱类灼伤，则用2％的医用硼酸溶液淋洗；
如属酸类灼伤，则用3％的医用碳酸氢钠溶液淋洗。
重者应立即羝医院治疗。
（2）口腔的化学灼伤：
迅速用蒸镏水或自来水漱口，然后酌情处理：
如属碱类灼伤，用2%的硼酸溶液反复漱口；
如属酸类灼伤，则用3％的碳酸氢钠溶液反复漱口。
最后，都应用洁净水多次漱洗。
（七）各种气体钢瓶的使用
一、气体钢瓶的搬运、存放与充装的注意事项
1、在搬动、存放气体钢瓶时，应装上防震垫圈，旋紧安全帽，以保护开关阀，防止其意外转动和减少碰撞。
2、搬运、充装有气体的钢瓶时，最好用特制的担架或小推车，也可以用手平抬或垂直转动，但绝不允许用手执着开关阀移动。
3、装车运输有气体的气瓶时，应视状况加以固定，避免途中滚动碰撞；
装、卸车时应轻，禁止采用抛丢、下滑或其他易引起碰撞的方法。
4、充装有互相接触后可引起燃烧、爆炸气体的气瓶（如氢气瓶和氧气瓶），不能同车搬运或同存一处，也不能与其他易燃易爆物品混合存放。
5、气瓶瓶体有缺陷、安全附件不全或已损坏，不能保证安全使用的，切不可再送去充装气体，应送交有关单位检查合格后方可使用。
常用有机试剂
聚乙二醇，苯酚，正己烷，异丙醇，苯甲酸，乙醇，三氟乙酸，二氯甲烷，苯甲醇，正戊烷，三氯甲烷，甲醇，甲醛，活性炭，正庚烷，二氧六环，水杨酸钠，醋酸钠，草酸钠，苯甲酸钠，柠檬酸钠，酒石酸钾钠，二甲基苯胺，三乙醇胺，四丁基溴化铵，N,N-二甲基甲酰胺，吡啶，丙酮，茚三酮，N-甲基吡咯烷酮，四氢呋喃，石油醚，苯乙酮，环己酮，二硫化碳，甲基叔丁基醚，二甲基亚砜，四氯化碳，过氧化苯甲酰，乙酸正丁酯，甲醛溶液，冰醋酸，间苯二酚，多聚甲醛，酸酐，硫脲，乙醛乙二醛，乙酸乙酯，三乙胺，酒石酸，苯甲酸甲酯，聚乙烯醇，氯苯，乙腈，甲苯，苯甲腈，苯乙腈，硝基苯
（八）生化实验室一般规则
1、遵守课堂纪律，不迟到早退，喧哗谈笑
2、实验前认真预习，看懂实验目的，原理，操作步骤，弄懂其意义，否则不宜开始试验。
3、实验过程中的数据现象要记录下来，用于撰写实验报告
4、试验台要摆放整齐整洁，公用药剂用完后要盖好盖子。
放回原处。
尽量不要使试剂洒落出来，特别不能滴撒在别人身上
5、注意仪器设备的节约，尽量不要打碎玻璃仪器，特别是贵重仪器，不需要使用时，不要乱动，需要使用时，按规定操作。
发现故障，立即报告。
使用以后写试用记录
6、实验室内严禁吸烟，灯火等做到人在灯火在，人走灯火灭。
易燃试剂不可直接加热如乙醇丙酮乙醚等。
尽量不带火源进入实验室。
实验完毕，关好水电气主闸阀。
认真检查。
7、所有废液倒入适当容器假意储存处理，不能到处乱扔。
8仪器顺坏，及时报修，填写损坏仪器登记表，然后补领。
9、实验室内物品，一律不得带出实验室，实验室中用于实验的食品类实验品（如牛奶、鸡蛋，水果等），一律不得食用。
10、实验课由班长或卫生委员负责安排值日，值日安排请打印或撰写后提交老师处。
值日生负责实验当天实验室的卫生安全等服务性工作，各组的实验台面由各组自行管理，出现人走实验台面未予清理的，值日生负责清理，但是需登记在册，该组同学将扣除实验课分数。
实验1糖类性质试验准备—糖类溶液的配制
一、实验目的
1、学习溶液浓度的不同表示方法及配制方法
2、学习缓冲溶液的概念及使用
3、配制糖类化合物的溶液
二、实验原理
一定的溶质可以溶于某种溶剂而形成一定浓度的溶液
三、仪器材料与试剂
（一）仪器/器具
烧杯（250ml），玻璃棒，电热套、100ml容量瓶
（二）材料
可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖、糠醛、a-萘酚、蒸馏水
四、实验方法及步骤
1、葡萄糖溶液
称取1g葡萄糖，倒入烧杯，往烧杯中加入70ml蒸馏水，不断搅拌至溶解，转移到100ml容量瓶中，往容量瓶中加入约30ml蒸馏水至刻度线，定容，盖上容量瓶盖，反复颠倒容量瓶，带溶液成分均匀分布后，将溶液全部移入试剂瓶，贴标签。
2、淀粉溶液
称取1g淀粉，倒入烧杯，往烧杯中加入70ml热蒸馏水，置于电热套中，一边加热，一边不断搅拌至溶解为澄清透明溶液，冷却后，转移到100ml容量瓶中，往容量瓶中加入约30ml蒸馏水至刻度线，定容，盖上容量瓶盖，反复颠倒容量瓶，带溶液成分均匀分布后，将溶液全部移入试剂瓶，贴标签。
3、蔗糖溶液
称取1g蔗糖，倒入烧杯，往烧杯中加入70ml蒸馏水，不断搅拌至溶解，转移到100ml容量瓶中，往容量瓶中加入约30ml蒸馏水至刻度线，定容，盖上容量瓶盖，反复颠倒容量瓶，带溶液成分均匀分布后，将溶液全部移入试剂瓶，贴标签。
4、果糖溶液
称取1g果糖，倒入烧杯，往烧杯中加入70ml蒸馏水，不断搅拌至溶解，转移到100ml容量瓶中，往容量瓶中加入约30ml蒸馏水至刻度线，定容，盖上容量瓶盖，反复颠倒容量瓶，带溶液成分均匀分布后，将溶液全部移入试剂瓶，贴标签。
5、糠醛溶液
称取0.25g糠醛，倒入烧杯，往烧杯中加入200ml蒸馏水，不断搅拌至溶解，转移到250ml容量瓶中，往容量瓶中加入约50ml蒸馏水至刻度线，定容，盖上容量瓶盖，反复颠倒容量瓶，带溶液成分均匀分布后，将溶液全部移入试剂瓶，贴标签。
重复一次，配制两瓶250ml糠醛溶液，备用。
6、a-萘酚溶液
称取5ga-萘酚，加95%乙醇至总体积约70ml,不断搅拌至溶解，转移到100ml棕色容量瓶中，往容量瓶中加入约30ml95%乙醇至刻度线，定容，盖上容量瓶盖，反复颠倒容量瓶，带溶液成分均匀分布后，将溶液全部移入棕色试剂瓶，贴标签。
五、实验结果
配制的溶液
浓度
颜色
状态
葡萄糖溶液
淀粉溶液
蔗糖溶液
果糖溶液
糠醛溶液
a-萘酚溶液
六、思考题
配制溶液应该注意什么事项。
实验2糖类性质试验—颜色反应
1、了解糖类某些颜色反应的原理。
2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。
Ⅰa-萘酚反应
糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与a-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对次反应均呈现阳性，故此反应不是糖类的特异反应。
（a-萘酚试法哼灵敏，0.001g/l的葡萄糖，0.001g/l的蔗糖溶液即有反应）
试管，试管架，滴管
a-萘酚，95%乙醇，葡萄糖，果糖，蔗糖，淀粉，糠醛，浓硫酸
（三）试剂
1、莫氏试剂：
50g/la-萘酚的乙醇溶液1500ml
2、10g/l葡萄糖溶液100ml
3、10g/l果糖溶液100ml
4、10g/l蔗糖溶液100ml
5、10g/l淀粉溶液100ml
6、1g/l糠醛溶液100ml
7、浓硫酸500ml
取5支试管，分别加入10g/l葡萄糖溶液、10g/l果糖溶液、10g/l蔗糖溶液、10g/l淀粉溶液、1g/l糠醛溶液各1ml。
再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂（操作中注意滴加莫氏试剂时试剂勿与管壁接触，否则加浓硫酸时，与莫氏试剂生成绿色，影响实验结果），充分混合。
斜执试管，沿管壁慢慢加入浓硫酸约1ml，慢慢竖起试管，切勿摇动。
浓硫酸在试液下形成2层。
在二液分界处有紫红色环出现。
观察记录各管颜色。
试剂
现象
解释现象
10g/l葡萄糖溶液
10g/l果糖溶液
10g/l淀粉溶液
10g/l蔗糖溶液
10g/l糠醛溶液
Ⅱ
在酸作用下，酮糖脱水生成经羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮糖的特意反应。
醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈现微弱的阳性反应。
在实验条件下，蔗糖有可能水解而呈现阳性反应。
试管，试管架，滴管，恒温水浴，天平
间苯二酚，浓盐酸，葡萄糖，果糖，蔗糖
1、塞氏试剂：
0.5g/l间苯二酚-盐酸溶液1000ml
称取间苯二酚0.05g溶于30ml浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100ml（配制时盐酸的浓度不能超过12%，否则最容易使糖生成糠醛及其衍生物，影响实验结果。
）
2、10g/l葡萄糖溶液1
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