生物12课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数测教师版含答案Word格式.docx
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分解尿素的细菌属于异养微生物,需要加葡萄糖作为碳源。
B无氮源、C无碳源,D中牛肉膏、蛋白胨可作为氮源.答案是A。
2。
分离土壤中分解尿素的细菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是（）
A．制备浸出液的土壤取自土壤的表层
B．涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌
C．牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源
D．接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒
【答案】C
【解析】土壤的表层含有细菌较少，但仍含有分解尿素的细菌,经过培养可以得到尿素分解菌，A错误；
未灼烧灭菌的涂布器虽含有杂菌,但在以尿素为唯一氮源的培养基上不能生存，B错误；
分离土壤中分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，牛肉膏蛋白胨培养基中含有氮,实验不能得到分解尿素细菌的单菌落,C正确；
未用酒精棉进行消毒的双手，可能将杂菌带入培养基，但杂菌在以尿素为唯一氮源的培养基上不能生存，D错误。
3.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是（）
A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂
B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂
C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂
D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂
【解析】酚红指示剂只能用来检测尿素分解菌，故A正确；
二苯胺试剂常用来进行DNA的鉴定，故B错误；
苏丹Ⅲ试剂可以用来检测脂肪，故C错误；
双缩脲试剂可以用来检测蛋白质，故D错误。
4.下列就“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的有关叙述，不正确的是（）
A.经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置
B。
同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数
C。
在稀释度足够高时，所形成的单个菌落中所有细胞的遗传信息必定相同
D。
在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长说明培养基没有被杂菌污染
【解析】“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数"
实验中,经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置，以防止杂菌污染，A正确；
同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数，并求其平均数,B正确;
细菌进行二分裂增殖，不能保证遗传物质平均分配，在稀释度足够高时，所形成的单个菌落中所有细胞的遗传信息不一定相同,C错误；
在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长说明培养基没有被杂菌污染，D正确。
5。
在以尿素作为唯一氮源的培养基上大部分微生物无法生长；
在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；
在培养基中加入10％酚可以抑制细菌和霉菌.利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出（）
A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌
B．分解尿素的细菌、大肠杆菌、放线菌
C．分解尿素的细菌、霉菌、放线菌
D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌
【解析】乳酸菌属于异养厌氧微生物，不能在缺氮培养基上生存；
金黄色葡萄球菌属于细菌，不能在添加青霉素的选择培养基上生存，A错误；
在缺乏氮源的选择培养基上可以筛选分离固氮微生物,大肠杆菌不能在添加青霉素的选择培养基上生存，B错误；
在缺乏氮源的选择培养基上可以筛选分离固氮微生物，在添加青霉素的选择培养基上可以筛选分离真菌（如霉菌），加入10％的酚可以抑制细菌和霉菌的生长可以筛选分离放线菌,C正确；
在缺乏氮源的选择培养基上可以筛选分离固氮微生物,金黄色葡萄球菌属于细菌，不能在添加青霉素的选择培养基上生存，D错误.
6。
欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌,下列实验操作中不正确的是（）
A．将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释
B．用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌
C．同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板
D．可将未接种的培养基在相同条件下培养作为空白对照
【答案】B
【解析】要土壤中分离出能分解尿素的细菌,可先将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；
用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解纤维素的细菌，用加入酚红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌,B错误；
同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，计数时取其平均值，C正确；
可将未接种的培养基在相同条件下培养作为空白对照，D正确.
7。
下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。
据图分析正确的是（）
A．3号试管中的菌落稀释倍数为103倍
B．4号中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号的10倍
C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×
109个
D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高
【解析】3号试管是稀释104倍，A错误；
4号中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号的低10倍,如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号的10倍,B正确；
5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为（168+175+167）÷
3×
105×
10=1.7×
108个，C错误；
稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，D错误。
8.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落。
产生A同学结果的原因可能有（）
①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照
A。
①②③B.②③④C。
①③④D.①②③④
【解析】A同学获得的菌落远大于其他同学，可能是由于所取的土样不同，也可能操作过程被污染（培养基灭菌不彻底或操作过程没有保证无菌操作都会导致菌落数偏多），还可能是操作失误，比如培养基的稀释倍数搞错了，或培养基中混入了其他含氮物质等，但与是否设置对照无关，故A项正确，B、C、D项错误.
9.下列关于微生物的分离和培养的叙述中,正确的是（ ）
A.进行微生物培养前,需对培养瓶进行消毒处理
B.对细菌的分离和计数可用平板划线法和稀释涂布平板法
获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染
用含刚果红的尿素培养基筛选鉴别出能分解尿素的菌株
【解析】选项A,应对培养瓶进行灭菌处理。
选项B，对细菌进行计数时不能用平板划线法。
选项D，用含酚红的尿素培养基筛选和鉴别出分解尿素的菌株。
10。
下列关于“检测土壤中细菌总数"
实验操作的叙述中，不正确的是（ ）
A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高压蒸汽灭菌后倒平板
取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL涂布到不同平板上培养
C.将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24~48小时
D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数
【答案】D
【解析】制备培养基时,需要将培养基用高压蒸汽灭菌,A正确；
接种方法为稀释涂布平板法，即需要制备不同的土壤稀释液，B正确；
对照组和实验组需要放置在恒温培养箱中培养，C正确；
一般选择菌落数在30~300间的平板进行计数,D错误。
二、非选择题（30分）
11.（20分，每格2分）在农业用地中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解,长期使用可污染土壤。
为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度一定，该除草剂的培养基不透明）。
（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行________处理。
（2）要从________的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基的特点是:
________体培养基且以________。
若需要调节培养基pH,应该在各种成分都溶化后且分装________（填“前"
或“后”）进行.对培养基进行灭菌，常采用的方法是________。
（3）若对活菌进行计数，常用的接种方法为_____________。
（4）培养后发现，只有很少菌落出现,大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________
，或有氧条件抑制了这些细菌的生长.
（5）为了计数微生物的数量，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0．1mL，培养后菌落数分别为155、160、176、149个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为___________。
【答案】
（1）稀释
（2）富含（或长期使用）该除草剂固除草剂为唯一氮源前高压蒸汽灭菌
（3）稀释涂布平板法（4）培养基中缺少这些细菌可利用的氮源（5）1．6×
109
【解析】
（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。
（2）要从富含（或长期使用）该除草剂的土壤中分离目的菌;
利用该培养基的目的是筛选能降解除草剂的细菌，因此需要使用选择培养基,该培养基的特点是：
固体培养基且以除草剂为唯一氮源;
若需要调节培养基pH,应该在各种成分都溶化后且分装前进行，以保证各种pH相同；
培养基一般采用高压蒸汽灭菌。
（3）若对活菌进行计数，常用的接种方法为稀释涂布平板法.
（4）培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是培养基中缺少这些细菌可利用的氮源或有氧条件抑制了这些细菌的生长。
（5）在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0．1mL,培养后菌落数分别为155、160、176、149个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为（155＋160＋176＋149）÷
4÷
0．1×
106＝1．6×
109个。
12。
（10分,每格1分））每生物兴趣小组为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。
培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。
请分析回答问题：
KH2PO4
1．4g
Na2HPO4
2．1g
MgSO4·
7H2O
0．2g
葡萄糖
1g
尿素
10g
琼脂
15g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
（1）简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂，细菌合成的________将尿素分解为________，pH升高,使指示剂变为红色。
（2）培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌，这种培养基属于________培养基.
（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和________,实验中需要振荡培养，原因是______________。
（4）下图是利用________法进行微生物接种,把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
通常还可以________方法分离到一个细胞繁殖形成的菌落
（5）关于上图的操作方法和结果，叙述正确的是________。
A．操作时要将接种环放在火焰上灼烧灭菌
B．划线操作须在火焰旁进行
C．多次划线后培养才可以分离到一个细胞繁殖形成的菌落
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌
（1）酚红脲酶氨
（2）选择（3）尿素葡萄糖为目的菌提供氧气
（4）平板划线稀释涂布平板法（5）ABCD
（1）鉴定土壤中可分解尿素的细菌的方法及原理是：
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨可使培养基的碱性增强（pH升高），使酚红指示剂变红。
（2）培养基中加入尿素的目的是筛选能高效降解尿素的目的菌，这种培养基属于选择培养基。
（3）培养基中的尿素和葡萄糖，可分别为“目的菌”的生长提供氮源和碳源.振荡培养的目的是为目的菌提供氧气。
（4）依图示信息可推知，该图是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.欲分离到一个细胞繁殖形成的菌落，还可以采用稀释涂布平板法对微生物进行接种。
（5）在实验过程中,为了防止接种环上可能存在的微生物污染培养物，每次划线操作须在火焰旁进行,而且操作时要将接种环放在火焰上灼烧灭菌；
平板划线法，需通过数次划线培养，才可分离到由一个细胞繁殖形成的菌落,因此A、B、C、D四项均正确。
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