常用缓冲液及培养基配方.docx
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常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方
LB液体培养基：
Bacto-蛋白胨
10g
酵母抽提物
5g
氯化钠
10g
加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
LB固体培养基：
每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。
SOB液体培养基
Bacto-蛋白胨20g
酵母抽提物5g
NaCl0.5g
加950ml水溶解，加入250mmol/LKCl溶液10ml，用5NNaOH调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。
SOC液体培养基
SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。
麦康凯固体培养基
CTAB/NaCl溶液（10%CTAB/0.7mol/LNaCl）
在80mlH2O中溶解4.1gNaCl,缓慢加入10一CTAB（十六烷基三乙基溴化铵），同时加热并搅拌。
如果需要，可加热至65℃溶解。
定容终体积至100ml.
CTAB沉淀液
1%（w/v）CTAB
50mmol/LTris.Cl,pH8.0
10mmol/LEDTA,pH8.0
PBS缓冲液：
十二水磷酸氢二钠
15g
磷酸二氢钾
1g
氯化钠
40g
氯化钾
1g
定容至5000ml,调pH至7.2。
ELISA包被液：
碳酸钠
1.59g
碳酸氢钠
2.93g
定容至1000ml，调pH至9.6。
ELISA洗涤液（0.01MPBST）：
5000mlPBS中加2.5ml吐温-20
显色液（底物溶液-邻苯二胺溶液）：
pH5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液：
0.1M柠檬酸（19.2g/L）24.3ml、0.2MNa2HPO4（28.4g/L）25.7ml、临用时取上述溶液10ml,加邻苯二胺（OPD）4mg，溶解后加入30％H2O215µl；
终止液：
2MH2SO4
TE缓冲液（pH8.0）：
Tris·HCl（pH8.0）
10mmol/L
EDTA（pH8.0）
1mmol/L
高压灭菌。
10%SDS：
10g十二烷基硫酸钠溶于90ml水中，加热至68℃溶解，加几滴浓盐酸调pH至7.2，定容至100ml，过滤除菌。
50×TAE缓冲液
Tris242g
冰醋酸57.1ml
0.5mol/LEDTA（pH8.0）100ml
用水定容至1000ml，用时稀释50倍。
5×TBE缓冲液：
Tris碱*
54g
硼酸
27.5ml
0.5mol/LEDTA（pH8.0）
20ml
加水定容至1000ml，0.5×使用。
6×DNA上样缓冲液：
0.25%溴酚蓝*
0.25%二甲苯青FF*
30%甘油
甲醛凝胶加样缓冲液（DEPC处理水配制）：
50%甘油
1mmol/LEDTA（pH8.0）
0.25溴酚蓝*
0.25二甲苯青FF*
适量溴化乙锭*
20×SSC：
氯化钠
175.3g
柠檬酸钠
88.2g
蒸馏水
900ml
溶解后用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌保存。
预杂交液：
6×SSC
5×Denhardt试剂
0.5%SDS
100ug/ml经变性并断裂成片段的鲑精DNA
5×甲醛凝胶电泳缓冲液：
0.1mol/LMOPS（pH7.0）*
40mmol/L乙酸钠
5mmol/LEDTA（pH8.0）*
甲醛变性凝胶配方：
加入0.7g琼脂糖到49.7mlDEPC-H2O中，用煮沸法溶解琼脂糖，待溶液冷却至55℃同时加入7ml10×MOPS（0.2mol/LMOPSpH7.0,20mmol/L乙酸钠，10mmol/LEDTApH8.0）电泳缓冲液和13.3ml甲醛，摇匀，制板待用。
0.5mol/L磷酸缓冲液（PH7.2）
134gNa2HPO4,4ml85%H3PO4,用水定容至1L。
探针标记中的逆转录终止液1×TEN
40mmol/LTris-Cl（PH7.5）,1mmol/LEDTA（PH8.0）,150mmol/LNaCl。
洗膜液Ⅰ2×SSC，0.1％（m/V）SDS
洗膜液Ⅱ0.1×SSC，0.1％（m/V）SDS
SDS-PAGE电泳分析所用的试剂：
30%丙烯酰胺：
29g丙烯酰胺和1gN，N’亚甲基双丙烯酰胺，加入60mlddH2O，完全溶解后定容至100ml，过滤，置棕色瓶中备用。
Tris-甘氨酸电泳缓冲液：
Tris3.00g，甘氨酸14.4g，SDS1g，调pH至8.3，用水定容至1L。
12%分离胶：
ddH2O3.3ml，30%丙烯酰胺4ml，Tris-HCl（pH8.8）2.5ml，10%SDS0.1ml，10%过硫酸铵0.1ml，TEMED0.006ml。
5%浓缩胶：
ddH2O1.4ml，30%丙烯酰胺0.33ml，Tris-HCl（pH6.6）0.25ml，10%SDS0.02ml，10%过硫酸铵0.02ml，TEMED0.002ml。
考马斯亮蓝染色液：
乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddH2O450ml，考马斯亮蓝R-2502.5g。
脱色液（1L）：
乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddH2O450ml。
2×上样缓冲液：
100mmol/LTris-HCl（pH6.8），200mmol/L二硫苏糖醇（DTT），4%SDS，0.2%溴酚蓝，20%甘油。
蛋白纯化所需的缓冲液：
BufferB（pH8.0）：
8Murea、100mMNaH2PO4、10mMTris-Cl
BufferC（pH6.3）：
8Murea、100mMNaH2PO4、10mMTris-Cl
BufferD（pH5.9）：
8Murea、100mMNaH2PO4、10mMTris-Cl
BufferE（pH4.5）：
8Murea、100mMNaH2PO4、10mMTris-Cl
电洗脱缓冲液：
SDS
0.1-0.5g
Tris-Base
3g
甘氨酸
18.8g
定容至1000ml
蛋白提取缓冲液：
Tris-HCl，pH6.8
50mmol/L
SDS
4.5%
-疏基乙醇
尿素
7.5%
9mol/L
电转移缓冲液：
Tris-Base3.00g，甘氨酸14.4g，SDS1g，甲醇200ml，调pH至8.3，用水定容至1L。
Westernblot所用试剂：
1×PBS（pH7.4）：
NaCl8g，KCl0.2g，KH2PO40.24g，Na2HPO41.44g，用蒸馏水溶解至1L
1×PBST：
5L1×PBS中加入2.5mlTween-20
封闭液：
100mlPBS缓冲液中加入5克脱脂奶粉
植物基本培养基溶液
大量元素（1L）
七水硫酸镁
370mg
磷酸二氢钾
170mg
硝酸钾
1900mg
硝酸氨
1650mg
二水氯化钙
440mg
微量元素（1L）
硼酸
6.2mg
一水硫酸锰
15.6mg
七水硫酸锌
8.6mg
二水钼酸钠
0.25mg
五水硫酸铜
0.025mg
六水氯化钴
0.025mg
碘化钾
0.83mg
七水硫酸亚铁
27.8mg
乙二铵二乙酸二钠
37.3mg
有机（1L）
盐酸硫胺素
0.5mg
盐酸吡哆辛
0.5mg
烟酸
0.05mg
肌醇
100mg
MSs培养基
10×大量
100ml
100×微量
10ml
100×铁盐
10ml
500×B5有机
2ml
6-BA
1mg
蔗糖
30g
琼脂
0.8%
调PH5.8并加水定容至1L
Msr（1L）
10×大量元素
100ml
100×微量元素
10ml
100×Fe盐
10ml
500×B5有机
2ml
蔗糖
3g
葡萄糖
7g
琼脂
0.8%
PH5.8加水定容至1L
水稻转化用培养基
培养基
成分
NB（基本培养基）
（刘巧泉等,1998）
N6大量元素营养液、EDTA-Fe营养液、B5微量元素营养液、B5维生素营养液
Nbi（愈伤诱导和继代培养基）
NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、2mg/L2,4-D、2.6g/L植物胶，pH5.8
高渗培养基
Nbi、47g/L山梨醇、47g/L甘露醇，pH5.8
NBs（筛选培养基）
NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、2mg/L2,4-D、40mg/LHyg（第二次筛选用量为50mg/L）、2.6g/L植物胶，pH5.8
MS（再生培养基）
MS大量元素营养液、EDTA-Fe营养液、MS微量元素营养液、B5维生素营养液、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、30g/L山梨醇、2.0mg/L6-BA、0.5mg/LNAA、30mg/LHyg、3.0g/L植物胶，pH5.8
NBr（再生培养基）
NB、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、30g/L山梨醇、2.0mg/L6-BA、0.5mg/LNAA、30mg/LHyg、3.0g/L植物胶，pH5.8
1/2MS（生根培养基）
1/2（MS大量元素营养液+EDTA-Fe营养液+MS微量元素营养液）、B5维生素营养液、3g/L蔗糖、7g/L葡萄糖、40mg/LHyg、2.6g/L植物胶，pH5.8
水稻转化用激素和化合物的配制
（1）2,4-D（1mg/ml）：
称取100mg2,4-D置于小烧杯内，加少量无水乙醇使之完全溶解后，将水缓慢加入不停搅拌的2,4-D酒精溶液中，不可出现沉淀，定容至100ml，过滤除菌。
（2）6-BA（1mg/ml）：
称取100mg6-BA置于小烧杯内，加少量1MKOH溶解，慢慢加灭菌蒸馏水至100ml，过滤除菌，4℃保存。
（3）NAA（1mg/ml）：
称取100mgNAA置于小烧杯内，用1MKOH溶解，慢慢加灭菌蒸馏水至100ml，过滤除菌，4℃保存。
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