实验室菌种管理规程.docx
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实验室菌种管理规程
实验室菌种管理规程
目的:
保证菌种合理、有效地使用和保存,最大限度降低变异率,确保菌种的溯源性与稳定性,保证实验室和社会的生物安全。
职责:
主管负责菌种的出入库保管、保存、分发,组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
范围:
本规程适用于实验室菌种的管理,包括菌种的保存、传代、使用及销毁等。
1菌种的保存
1.1工作用菌种的保存
工作用菌种采用平板低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体培养基上,待菌生长充分以后,转移至2~8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存,并应随时检查其污染杂菌和变异等情况,发现异常情况,经应灭活处理后销毁。
保存时间为1周,超过该期限前挑取单菌落重新于琼脂平板划线活化,若菌落活力下降则从-80℃冰箱中取用甘油冷冻管。
1.2传代用菌种的保存
采用甘油冷冻管保藏法。
1.2.1甘油冷冻管保存法
用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内,置于适宜的培养条件下培养,菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内,再加入等体积的无菌甘油(浓度40%),即为20%甘油菌悬液,轻轻振摇,使内容物充分混合,在-80℃冷冻条件下保存,保存期限为3年。
每个菌株保存至少30个无菌冷冻管。
使用时,取出一支放至室温,接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏,挑取纯菌落传代或工作用。
2菌种的传代
2.1工作用菌种的传代
当工作用菌种代数小于5时,在规定保存期限内,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。
取在冰箱2~8℃保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代,并将新传代的培养物替代原有的菌种,作为工作用菌种。
也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种,进行复苏,直接作为工作用菌种。
菌种每1周传代一次,当超过5代,须用“甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代。
2.2传代用菌种的传代
首先划线接种确认,根据日常检验工作的需要量,挑取纯菌落转接平板,作为工作用菌种;同时,结合菌种的代数和最长保存期限,挑取纯菌落制成菌悬液,按“1.2”的方法制备甘油冷冻管数支,作为传代用菌种。
2.3传代时注意事项
无菌操作,使菌株不死亡,不污染、不丢失。
同时实验人员也要采取有效的预防措施进行自我保护,如工作时必须穿工作服,佩带无菌手套,实验完成以后消毒实验进行的区域、实验仪器和器具。
如发生意外,如菌种泄漏或人员受伤,应立即向主管报告以便及时进行处理。
3菌种的保管
3.1实验室全部菌种都应由菌种负责人记录在册,并输入电脑以电子版形式存档,以便查找。
菌种上应贴上明显的标签,标明名称、培养基、保种人、日期、编号等。
菌种设专人加锁保管,并对所保存的菌种建立《菌种保存、领用登记台账》(附表3)。
3.2菌种的定期检查
在菌种的保存期间,应每天检查保存菌种冰箱的温度、菌种管的塞子是否松动或生霉,如有异常应及时处理。
3.3所保管的菌种,不能随意转让其他单位和个人,需要时应有单位证明和批准手续以及李爱科组长签字方可供应。
4菌种的领用与使用
4.1实验室人员根据实验需要,需到主管领取工作用菌种或传代用菌种,同时填写《菌种领用登记台账》相关内容。
4.2实验室人员从主管领取工作用菌种或传代用菌种,用于日常检验或验证试验,使用后及时填写《菌种使用登记台账》(附表6),以便追踪菌种使用历史。
5菌种(废弃)的销毁
下列情况的菌种或培养物或被污染的器具等,必须采用121℃、45分钟湿热灭活处理:
新一代菌种制备成功后的上一代菌种;使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物;超过有效期的菌种;凡被污染、变异、可疑等异常情况菌种;其他应废弃的菌种。
6附则
附表1:
《检定菌接收记录》
附表2:
《检定菌种传代、分离记录》
附表3:
《检定菌种保存、领用登记台账》
附表4:
《检定菌种观察记录》
附表5:
《检定菌种鉴定记录》
附表6:
《检定菌种使用登记台账》
附表7:
《废弃菌种(物品)销毁处理记录》
菌种资源详细信息(密)
此项信息不对外公布,保存核心成员手中。
菌种登记:
编号+详细名称+来源+特性+动物实验+……,随时补充,留照片。
附表1:
《菌种接收记录》
记录名称
菌种接收记录
代码
页次
1
共页
名称及编号
数量
代数
来源
接收日期
接收人
检查情况
保存条件
附表2:
《菌种传代、分离、保存记录》
记录名称
菌种传代、分离记录
代码
页次
1
共1页
名称及编号
购进(领取)日期
年月日
来源
传代前菌种保存方法
传代用培养基
传代日期
传代用
菌种编号
总数量
传代用菌种
工作用菌种
操作人
数量
编号
有效期
保存
方法
数量
编号
有效期
保存
方法
分离与纯化过程
纯度
检查结果
操作人:
复核人:
附表3:
《菌种使用登记台账》
记录名称
菌种保存、领用登记台账
代码
页次
1
共1页
收到日期
名称及编号
数量
接收人
移交人
领用日期
用途
数量
发放人
领用人
附表4:
《菌种观察记录》
记录名称
菌种观察记录
代码
页次
1
共1页
日期
冰箱温度(℃)
塞子是否松动
是否霉变
处理措施
观察人
附表5:
《菌种鉴定记录》
记录名称
菌种鉴定记录
代码
页次
1
共1页
菌种名称及编号
鉴定原因
开始鉴定日期
鉴定人
复核人
年月日
鉴定项目
菌落形态
革兰染色
显微镜下形态
典型生化反应特征
鉴定结论
日期:
年月日
附表6:
《菌种使用登记台账》
记录名称
菌种使用登记台账
代码
页次
1
共1页
领用日期
名称及编号
数量
使用人
制备菌悬液浓度
(CFU/ml)
用于检验的
产品批号
附表7:
《废弃菌种(物品)销毁记录》
记录名称
废弃菌种(物品)销毁处理记录
代码
页次
1
共1页
日期
被处理菌种(物品)名称
销毁原因
处理方式
批准人
操作人
监督人
备注:
废弃菌种要标明编号、数量(支)