安捷伦1260高效液相色谱仪再确认方案解读.docx
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安捷伦1260高效液相色谱仪再确认方案解读
安捷伦12600高效液相色谱仪再确认方案
文件编码
发放编号
颁发部门
总工室
起草人
日期
年月日
审核人
日期
年月日
审核人
日期
年月日
批准人
日期
年月日
执行日期
年月日
历次修订的原因、目的：
分发部门
厂长室[]总工室[]综合办[]生产部[]
质量部[]储运组[]工程部[]制剂车间[]
前提车间[]外包车间[]GMP办[]检测中心[]
集采中心[]
5.内容
5.1安装确认
5.1.1仪器基本信息的确认（见表1）
表1仪器基本信息确认记录
仪器基本信息
仪器名称
Agilent1260高效液相色谱仪
仪器编号
制造商
检测器型号
检测器序列号
购入时间
安装时间
安装地点
维修服务
单位名称
联系电话
地址
联系人
备件供应单位
联系电话
技术资料检查
名称
确认结果
备注
Agilent1260高效液相色谱仪说明书
□有□无
Agilent1260高效液相色谱仪采购合同
□有□无
装箱单
□有□无
计量检定证书（应在计量检定周期内）
□有□无
再确认时应具备
Agilent1260高效液相色谱仪SOP
□有□无
再确认时应具备
按采购合同对装箱单所列内容进行确认
品名
型号及序列号
数量
确认结果
□有□无
□有□无
□有□无
□有□无
□有□无
□有□无
□有□无
□有□无
□有□无
检查人：
日期：
年月日
5.1.2安装环境条件的确认
表2安装环境条件的确认记录
环境条件
要求
检查结果
位置
应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，
排风良好
□符合□不符合
台面
仪器应平稳地放在工作台上，周围无强烈机械震动和电磁干扰源，仪器接地良好。
□符合□不符合
环境
温度
15-30℃
□符合□不符合
湿度
室内湿度在20%一85%RH范围内。
□符合□不符合
空调
有温湿度控制措施
□符合□不符合
排风
通风良好
□符合□不符合
电路
电源
电源电压为（220士22）V，频率为（50土0.5）Hz
□符合□不符合
接地
□符合□不符合
不间断电源
□符合□不符合
检查人：
日期：
年月日
5.2运行确认
严格按《Agilent-1260高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表3
表3运行确认记录
操作步骤
合格标准
检查结果
开机进入系统
□符合□不符合
系统值设置
□符合□不符合
打印机
□符合□不符合
退出系统关机
□符合□不符合
检查人：
日期：
年月日
5.3性能确认
5.3.1试验条件的确认
表4试验条件的确认记录
品名
要求
确认结果
电子分析天平
最大称量不小于100g，最小分度不大于1mg。
计量检定。
□符合□不符合
容量瓶
校验
□符合□不符合
刻度吸管
校验
□符合□不符合
秒表
分度值不大于0.1s
□符合□不符合
数字温度计
测量范围为0～100℃，最小分度不大于0.1℃。
□符合□不符合
标准物质
蒸发光的标准物质氢化可的松
□符合□不符合
其他
色谱甲醇、超纯水、分析纯丙酮、异丙醇等。
□符合□不符合
检查人：
日期：
年月日
5.3.2性能确认的内容及可接受标准
表5性能确认的内容及可接受标准
确认项目
可接受标准
泵流量误差
流量设定值ml/min
0.5
1.0
2.0
测定次数
3
3
3
流动相收集时间/min
10
5
5
泵流量设定值误差SS
5%
3%
2%
泵流量稳定性误差SR
3%
2%
2%
紫外-可见光检测器
基线噪声
不超过5×10-4AU
基线漂移
不超过5×10-3AU/h
最小检测浓度
萘/甲醇溶液的最小检测浓度不大于1×10-7g/ml
整机性能
定性测量重复性（6次测量）RSD6
≤1.5%
定量测量重复性（6次测量）RSD6
≤3.0%
数据处理系统能正常采集、保存、处理数据
1.工作站能正常设置采集方法的参数
2.工作者设置的采集方法能正常保存
3.压力超过限定时工作站能自动报警
4.漏液时工作站能自动报警
5.设置错误的参数时工作站能自动报警
6.修改原有方法后重新保存时有提示
7.工作站能正常编辑样品系列表和单个进样信息
8.点击开始后工作站能正常进行样品分析
9.样品分析的数据能正常保存
10.能使用工作站对保存的数据进行处理
12.能正常打印数据处理结果
5.3.3性能确认检定方法
5.3.3.1泵流量设定值误差SS与泵流量稳定性误差SR的确认
表6泵流量设定值误差SS和泵流量稳定性误差SR的可接受标准
流量设定值ml/min
0.5
1.0
2.0
测定次数
3
3
3
流动相收集时间/min
10
5
5
允许误差
泵流量设定值误差SS
5%
3%
2%
泵流量稳定性误差SR
3%
2%
2%
注:
①最大流量的设定值可根据用户使用情况而定。
②对特殊的、流量小的仪器，流量的设定可根据用户使用情况选大、中、小三个流量，
流动相的收集时间则根据情况适当缩短或延长。
将仪器各部分连接好，以超纯水为流动相，分别设定0.5、1.0和2.0ml/min三个流速，在流动相排出口用事先清洗、干燥并已称重的容量瓶收集流动相，0.5ml/min时用秒表计时收集10分钟，1.0和2.0ml/min时用秒表计时收集5分钟，在分析天平上称重，每个流速测定3次，按式
（1）、式
（2）计算SS和SR，查水的密度表计算，即得。
SS=（Fm平－Fs）/Fs×100%
（1）
SR=（Fmax－Fmin）/Fm平×100%
（2）
式中，
Fm——Fm＝（W2-W1）/（ρt.t）,流量实测值，ml/min；
W2——容量瓶＋流动相的质量，g；
W1——容量瓶的质量，g；
ρt——实验温度下流动相的密度，g/cm；
t——收集流动相的时间，min；
Fm平——同一组测量的算术平均值，ml/min；
Fs——流量设定值，ml/min；
Fmax——同一组测量中流量最大值，ml/min；
Fmin——同一组测量中流量最小值，ml/min；
表7泵流量设定值误差SS和泵流量稳定性误差SR测定记录
Fs
收集时间
（分钟）
W1
W2
Fm
Fm平
Ss
SR
结论
0.5
10
5%
3%
□符合规定
□不符合
10
10
1.0
5
3%
2%
□符合规定
□不符合
5
5
2.0
5
2%
2%
□符合规定
□不符合
5
5
注：
实验温度℃
纯水的密度ρt：
实验温度下超纯水的密度，g/cm
检查人日期：
年月日
5.3.3.2紫外-可见光检测器的检定
5.3.3.2.1基线噪声和基线漂移的检定
选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长选在254nm，检测灵敏度调到最灵敏挡。
开机预热，待仪器稳定后（约60分钟）记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。
（附图谱）
由检测器的衰减倍数和测得的基线峰一峰高对应的记录仪标度，计算基线噪声，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示
Nd＝KB
式中：
Nd——检测器基线噪声；
K——衰减倍数；
B——测得的基线峰-峰高对应的记录仪标度，AU。
基线漂移用1h内基线偏离原点的值（AU/h）表示。
表8基线噪声和基线漂移的检定
确认项目
确认结果
技术要求
是否符合规定
基线噪声AU
≤5×10－4AU
□是□否
基线漂移AU/h
≤5×10－3AU/h
□是□否
检查人日期：
年月日
5.3.3.2.2最小检测浓度
在5.3.3.2.1的色谱条件下，由自动进样器或微量注射器注入10～20ul，浓度为1×10-7g/ml的萘/甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰-峰高，按下式计算最小检测浓度。
（按20ul进样量计算）。
CL＝2NdCV/20H
式中:
CL——最小检测浓度，g/mL；
Nd——基线噪声峰-峰高，mm；
C——标准溶液浓度，g/mL；
H——标准溶液的色谱峰高，mm；
V——进样体积，ul。
表9最小检测浓度确认记录
确认项目
确认结果
技术要求
是否符合规定
最小检测浓度
萘/甲醇溶液
g/ml
≤1×10-7g/ml
□是□否
g/ml
检查人：
日期：
年月日
5.3.3.3蒸发光检测器的检定
5.3.3.3.1基线噪声和基线漂移的检定
选用C18色谱柱，以100%色谱乙腈为流动相，流量为1.0ml/min，漂移管温度设定为45°C，气体流速设定为1.5L/min检测灵敏度调到GAIN=1。
开机预热，待仪器稳定后（约60分钟）记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。
（附图谱）
由检测器的衰减倍数和测得的基线峰一峰高对应的记录仪标度，计算基线噪声，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示
Nd＝KB
式中：
Nd——检测器基线噪声；
K——衰减倍数；
B——测得的基线峰-峰高对应的记录仪标度，AU。
基线漂移用1h内基线偏离原点的值（AU/h）表示。
表10基线噪声和基线漂移的检定
确认项目
确认结果
技术要求
是否符合规定
基线噪声MV
≤0.5MV
□是□否
基线漂移MV/H
≤2MV/h
□是□否
检查人日期：
年月日
5.3.3.3.2最小检测浓度
在5.3.3.3.1的色谱条件下，使用氢化可的松标准品为样品，由自动进样器或微量注射器注入10～20ul，浓度为，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰-峰高，按下式计算最小检测浓度。
（按20ul进样量计算）。
CL＝2NdCV/20H
式中:
CL——最小检测浓度，g/mL；
Nd——基线噪声峰-峰高，mm；
C——标准溶液浓度，g/mL；
H——标准溶液的色谱峰高，mm；
V——进样体积，ul。
表11最小检测浓度确认记录
确认项目
确认结果
技术要求
是否符合规定
最小检测浓度
溶液
g/ml
≤2.5×10-7g/ml（5ng的绝对进样量）
□是□否
g/ml
检查人：
日期：
年月日
5.3.3.4整机性能（定性、定量重复性）的确认
将仪器各部分联接好，选用C18色谱柱，根据仪器配置的检测器，选择流动相和测量参数:
紫外检测器和二极管阵列检测器用100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测波长为254nm，灵敏度选择在0.04左右，基线稳定后由自动进样器注入5～10ul、浓度为1×10-4g/ml的萘/甲醇标准溶液。
蒸发光散射检测器选用C18色谱柱，用85%乙腈为流动相，流量为1.0ml/min，设定漂移管温度为45°C，气体流速为1.5L/min，连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按下式计算相对标准偏差RSD6
计算公式：
式中:
RSD6定性（定量）—定性（定量）测量重复性相对标准偏差;
Xi—第i次测得的保留时间或峰面积;
X—6次测量结果的算术平均值;
i—测量序号
表12、整机性能（定性、定量重复性）的确认记录
标物名称
萘
浓度
1×10-4g/ml
进样量
10ul
波长
254nm
流动相
甲醇
流量
1.0ml/min
灵敏度选择
序号
1
2
3
4
5
6
平均值
RSD6
是否
符合规定
保留时间（min）
□是□否
峰面积
□是□否
标物名称
氢化可的松
浓度
1×10-4g/ml
进样量
10ul
气体流量/温度
45°C1.5L/min
流动相
85%乙腈
流量
1ml/min
灵敏度选择
GAIN=1
序号
1
2
3
4
5
6
平均值
RSD6
是否
符合规定
保留时间（min）
□是□否
峰面积
□是□否
6．确认结果汇总表
表13确认结果汇总表
确认项目
检测结果
*泵流量误差
流量设定值ml/min
0.5
1.0
2.0
测定次数
3
3
3
流动相收集时间/min
10
5
5
泵流量设定值误差SS
（±5%）
（±3%）
（±2%）
泵流量稳定性误差SR
（±3%）
（±2%）
（±2%）
结论
确认项目
可接受标准
确认结果
紫外-可见光检测器
*基线噪声
不超过5×10-4AU
*基线漂移
不超过5×10-3AU/h
*最小检测浓度
萘/甲醇溶液的最小检测浓度不大于1×10-7g/ml
蒸发光检测器
基线噪声
≤0.5MV
基线漂移
≤2MV/h
最小检测浓度
≤2.5×10-7g/ml（5ng的绝对进样量）
*整机性能
定性测量重复性RSD6
≤1.5%
定量测量重复性RSD6
≤3.0%
数据处理系统能正常
采集、保存、处理数据
1.工作站能正常设置采集方法的参数
2.工作者设置的采集方法能正常保存
3.压力超过限定时工作站能自动报警
4.漏液时工作站能自动报警
5.设置错误的参数时工作站能自动报警
6.修改原有方法后重新保存时有提示
7.工作站能正常编辑样品系列表和单个进样信息
8.点击开始后工作站能正常进行样品分析
9.样品分析的数据能正常保存
10.能使用工作站对保存的数据进行处理
12.能正常打印数据处理结果
7.结果的处理
7.1凡带*号的确认项目全部达到规定技术要求的仪器为判为合格仪器，通过确认。
7.2只配一个检测器的仪器，任何一个带*号的项目不合格，该仪器为不合格仪器。
7.3配一个以上检测器的仪器，只要其中一个检测器带*号的检定项目和除检测器外其他带*号的检定项目合格，可注明该检测器的通过确认。
同时注明其他不合格的检测器，暂时限制使用，待经过维修并经计量检定机构检定合格后，才能使用。
8.异常结果的处理
9.再确认周期一年，更换重要部件或对仪器性能有怀疑时，应随时确认。
正常情况下，规定外部计量检定6个月后进行再确认。
10.确认报告
质量控制仪器设备确认报告
确认项目名称
安捷伦1260高效液相色谱仪的确认
报告起草人
确认起讫日期
年月日～年月日
确认结果报告概要：
评估和建议：
结论：
确认小组成员会签：
备注
确认组长签发：
升级会员 