《生物化学》实验课程教学大纲.docx
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《生物化学》实验课程教学大纲
《生物化学》实验课程教学大纲
一、课程基本信息
课程名称：
生物化学实验
英文名称：
BiochemistryExperiment
课程性质：
学科及专业基础课
课程属性：
独立设课
适用专业：
生物科学（本科）
学时学分：
36学时，2学分
开设学期：
第三学期
先修课程：
有机化学
二、课程简介
生物化学实验是生物化学实验原理、方法和技术是生命科学、医药等诸多学科的重要研究手段，是生物科学专业学生必修的基础实验课程。
本门课程主要是通过实验方法了解组成生物体的大分子物质氨基酸、蛋白质、酶、核酸、维生素、脂类等的组成、结构、性质、功能。
三、实验课程目的与要求
学习本门课程的目的：
通过本课程的学习使学生了解生物大分子的分离和纯化方法，糖、蛋白质、核酸及主要次生代谢产物的定性、定量和有关生物化学性质的分析技术，酶活性测定等知识和技能，为专业课的学习和专业技能的培训奠定良好的基础；通过严格的实验要求和管理，培养学生创新思维方法和动手能力，培养严谨的、实事求是作风和与人合作精神，为今后进行后继课程的学习和将来的科学研究工作打下基础。
学习本门课程的要求：
验证生物化学的基本理论知识，加深学生对理论知识的理解；使学生掌握生物化学实验的基本操作技能和实验方法；使学生学会正确使用精密仪器和一些常规仪器。
通过实验课程的学习，养成良好的实验习惯和严谨、实事求是的科学态度。
四、考核方式
1、实验报告成绩：
从实验态度、实验动手能力、实验观察能力、实验报告完成情况四个方面进行考查。
2、出勤占20%，实验报告占40%，实验操作占40%。
五、实验项目、学时分配情况
序号
实验项目名称
实验学时
实验类型
实验要求
1
氨基酸分离鉴定—纸层析法
3
验证性
必做
2
蛋白质及氨基酸的呈色反应
3
验证性
必做
3
蛋白质的沉淀反应、等电点的测定
3
验证性
必做
4
蛋白质的浓度测定-分光光度法
3
综合性
必做
5
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
3
验证性
必做
6
核酸的分离和鉴定
3
综合性
必做
7
酶的特性
3
验证性
必做
8
维生素C的定量测定
3
综合性
必做
9
酪蛋白的制备
3
验证性
选做
10
脂肪碘值的测定
3
综合性
选做
11
总糖的测定-蒽酮比色法
3
综合性
选做
12
血液中转氨酶活力的测定（分光光度法）
4
综合性
选做
13
底物浓度对酶促反应速度的影响——米氏常数的测定
3
综合性
选做
14
脂肪酸的β-氧化
3
综合性
选做
15
小麦萌发前后淀粉酶活力测定
3
综合性
选做
16
同功酶分析
5
综合性
选做
17
离子交换柱层析法分离氨基酸
6
综合性
选做
合计实验个数：
17
合计实验学时数：
57
六、实验内容
实验一、氨基酸的分离鉴定—纸层析法
目的要求：
学习纸层析的基本原理及操作方法
实验内容：
1、平衡层析系统、准备滤纸；
2、点样；
3、展层；
4、显色；
5、鉴定。
主要仪器设备药品：
干燥箱、层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿、新华一号滤纸；正丁醇，醋酸，水合茚三酮，赖氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，亮氨酸
计划时数：
3学时
实验类型：
验证性实验
实验性质：
必做
每组人数：
2人
实验二、蛋白质及氨基酸的呈色反应
目的要求：
1、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理；
2、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法；
实验内容：
1、双缩脲反应；
2、茚三酮反应；
3、黄色反应；
主要仪器设备药品：
磁力搅拌器、天平、水浴锅、试管、酒精灯、试剂瓶；尿素，氢氧化钠，硫酸铜，卵清蛋白，茚三酮，甘氨酸，苯酚，浓硝酸，色氨酸，酪氨酸
计划时数：
3学时
实验类型：
验证性实验
实验性质：
必做
每组人数：
2人
实验三、蛋白质的等电点测定和沉淀反应
目的要求：
1、学习蛋白质等电点的测定；
2、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
实验内容：
1、蛋白质等电点的测定；
2、重金属沉淀蛋白质；
3、有机酸沉淀蛋白质；
4、无机酸沉淀蛋白质；
5、加热沉淀蛋白质；
6、蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的比较。
主要仪器设备药品：
磁力搅拌器、天平、水浴锅、试管、酒精灯、试剂瓶；醋酸，醋酸钠，硝酸银，乙醇，三氯乙酸，硫酸铵，盐酸，碳酸钠，甲基红，氯化钡，酪蛋白
计划时数：
3学时
实验类型：
验证性实验
实验性质：
必做
每组人数：
2人
实验四、蛋白质的浓度测定
目的要求：
了解蛋白质浓度测定的基本原理；学习分光光度计测定蛋白质浓度的操作。
实验内容：
1、紫外吸收法测定蛋白质的含量；
2、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度（标准曲线的制作、蛋白样品浓度测定）。
主要仪器设备药品：
721型分光光度计、离心机；牛血清蛋白，考马斯亮蓝G-250
计划时数：
3学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
必做
每组人数：
2人
实验五、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
目的要求：
1、了解电泳技术的基本原理；
2、学习醋酸纤维薄膜电泳的操作。
实验内容：
1、仪器与薄膜的准备；
2、点样；
3、电泳；
4、染色与漂洗；
5、透明；
6、结果判断。
主要仪器设备药品：
电泳仪、醋酸纤维薄膜、点样器、培养皿、粗滤纸、玻璃板、竹镊、白磁反应板；巴比妥，巴比妥钠，氨基黑，甲醇，冰醋酸，氢氧化钠
计划时数：
3学时
实验类型：
验证性实验
实验性质：
必做
每组人数：
2人
实验六、核酸的分离和鉴定
目的要求：
1、初步掌握从植物中分离核酸的方法；
2、学习核酸的鉴定方法。
实验内容：
1、核酸的分离；
2、RNA的定性鉴定；
3、DNA的定性鉴定。
主要仪器设备药品：
冷冻高速离心机、磁力搅拌器、天平、研钵、布氏抽滤装置、恒温水浴锅；氯仿，CTAB，乙醇，丙酮，高氯酸，氯化钠，Tris，EDTA，异戊醇，β-巯基乙醇，三氯化铁，二苯胺，苔黑酚，浓盐酸，浓硫酸
计划时数：
3学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
必做
每组人数：
2人
实验七、酶的特性
目的要求：
1、掌握pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响及酶作用的专一性；
2、加深对酶性质的认识。
实验内容：
1、酶的专一性；
2、温度对酶活力的影响；
3、抑制剂对酶活力的影响；
4、激活剂对酶活力的影响。
主要仪器设备药品：
电子天平、磁力搅拌器、恒温水浴锅；淀粉，氯化钠，碘化钾，碘，磷酸氢二钠，柠檬酸，硫酸铜，硫酸钠，蔗糖，酵母
计划时数：
3学时
实验类型：
验证性实验
实验性质：
必做
每组人数：
2人
实验八、维生素C的定量测定
目的要求：
1、学习维生素C定量测定法的原理和方法；
2、进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。
实验内容：
1、维生素C的提取；
2、维生素C标准液滴定；
3、样品滴定；
4、数据处理。
主要仪器设备药品：
离心机、组织捣碎机、磁力搅拌器、吸量管、漏斗、微量滴定管、容量瓶。
绿豆芽，盐酸，2，6-二氯酚靛酚，抗环血酸，磷酸，醋酸，偏磷酸
计划时数：
3学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
必做
每组人数：
2人
实验九、酪蛋白的制备
目的要求：
1．掌握蛋白质分离纯化的基本原理；
2．掌握蛋白质分离纯化的主要操作步骤。
实验内容：
1、粗蛋白的提取；
2、抽滤洗涤；
3、风干、称重；
4、计算含量和得率。
主要仪器设备药品：
离心机，抽滤装置，电炉，酸度计，温度计循，环水真空泵；95%乙醇、无水乙醚、醋酸、醋酸钠、牛奶
计划时数：
3学时
实验类型：
验证性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
实验十、脂肪碘值的测定
目的要求：
1、学习测定脂肪碘值的原理和方法；
2、掌握滴定法的基本操作技术。
实验内容：
1、称量花生油或猪油，加入Hanns试剂反应；
2、加入碘化钾放出碘；
3、硫代硫酸钠滴定碘；
4、记录结果，处理分析。
主要仪器设备药品：
碘瓶、碱式滴定管；花生油（猪油）、硫代硫酸钠、四氯化碳、碘化钾、硫代硫酸钠。
计划时数：
3学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
实验十一、总糖含量的测定
目的要求：
1、学习蒽酮法测定糖的原理和方法；
2、进一步熟悉、掌握分光光度计的基本操作技术。
实验内容：
1、葡萄糖标准曲线的制作；
2、植物样品中可溶性糖的提取；
3、分光光度计测定；
4、数据处理。
主要仪器设备药品：
磁力搅拌器、分光光度计、天平、容量瓶、离心机、移液管（或移液器）、土豆（棉花、红薯）、纱布、蒽酮、浓硫酸、乙酸乙酯、葡萄糖
计划时数：
3学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
实验十二、血液中转氨酶活力的测定（分光光度法）
目的要求：
1、了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及在临床诊断中的意义；
2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。
实验内容：
1、标准曲线的制作；
2、血清的制备；
3、酶活力的测定；
4、数据处理。
主要仪器设备药品：
磁力搅拌器、恒温水浴锅、高速离心机、分光光度计；磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，丙酮酸钠，α-酮戊二酸，DL-丙氨酸，氢氧化钠，氯仿，2，4-二硝基苯肼，盐酸
计划时数：
4学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
实验十三、底物浓度对酶促反应速度的影响——米氏常数的测定
目的要求：
1.了解底物浓度对酶促反应的影响；
2.掌握测定米氏常数Km的意义和测定方法。
实验内容：
1、试验；
2、对照；
3、滴定；
4、数据处理。
主要仪器设备药品：
恒温水浴锅，25ml碱式滴定管及滴定台，蝴蝶夹，滴管；酪蛋白溶液，中性甲醛溶液，酚酞-乙醇溶液，标准0.1MNaOH溶液；胰蛋白酶溶液
计划时数：
3学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
实验十四、脂肪酸的β-氧化
目的要求：
了解脂肪酸的β-氧化作用
实验内容：
1肝糜制备
2、保温
3、沉淀蛋白质
4、酮体的测定
5、计算
主要仪器设备药品：
微量滴定管（碱式）、水浴锅、吸管、剪刀、镊子、锥形瓶、漏斗；淀粉、氯化钠、丁酸、氢氧化钠、盐酸、碘、硫代硫酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、三氯乙酸。
计划时数：
3学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
实验十五、小麦发芽前后淀粉酶活力测定
目的要求：
1、学习分光光度计的原理和使用方法；
2、学习测定淀粉酶活力的方法；
3、了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。
实验内容：
1、浸泡，萌发种子；
2、酶液提取；
3、酶活力测定；
4、计算。
主要仪器设备药品：
分光光度计、高速离心机、恒温水浴锅、麦芽糖、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、3，5-二硝基水杨酸、氯化钠
计划时数：
3学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
实验十六、同功酶分析
目的要求：
1、学习和掌握PAGE凝胶的配制及电泳方法；
2、学习利用PAGE法分离过氧化物同功酶、酯酶同功酶的原理和方法。
实验内容：
1、样品的制备；
2、PAGE凝胶的配制；
3、电泳；
4、剥胶；
5、染色、记录结果。
主要仪器设备药品：
高速冷冻离心机、磁力搅拌器、电泳仪、垂直电泳槽、移液器、离心管、培养皿、磁盘、Tris、EDTA、TEMED、过硫酸铵、甘氨酸、硼酸钠、硼酸、丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、溴酚蓝、联苯胺、过氧化氢、冰醋酸、甲醇、蔗糖、坚固蓝RR盐、α-醋酸萘酯、乙醇、丙酮、醋酸、醋酸钠
计划时数：
5学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
实验十七、离子交换柱层析法分离氨基酸
目的要求：
要求学会装柱、洗脱、收集等离子交换柱层析技术
实验内容：
1、预处理；
2、装柱；
3、平衡；
4、加样；
5、洗脱；
6、测定。
主要仪器设备药品：
层析住（1.2*19cm）、恒流泵、收集器、刻度试管、烧杯、732型阳离子树脂、柠檬酸、氢氧化钠、浓HCl、茚三酮、硫酸铜、氨基酸样品Asp、Lys
计划时数：
6学时
实验类型：
综合性实验
实验性质：
选做
每组人数：
2人
七、主要参考书
[1]王秀奇、秦淑媛等编.基础生物化学实验.北京：
高等教育出版社，2003
[2]戴玉锦主编.生物化学（实验部分）.北京：
高等教育出版社，1992
[3]赵永芳主编.生物化学技术原理及应用.北京：
科学出版社，2002
[4]石庆华主编.生物化学实验指导.北京：
中国农业大学出版社，2006
编写者：
罗倩
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