生物工程分析的基础知识PPT资料.ppt

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2.半固体样品（如蜂蜜，稀奶油）用采样器从上中下分别取出检样混合后得平均样品。

（四）采样的数量与方法,采样工具,套筒式采样器,3.液体样品液体样品，先混合均匀，用吸法分层取样每层取500ml，装入瓶中混匀得平均样品。

4.小包装的样品对于小包装的样品是连包装一起取（如罐头，奶粉）一般按生产班次取样，取样数为1/3000，尾数超过1000的多取1罐，但是每天每个品种取样数不得少于3罐。

5.不均匀的样品,6.生物活性样品的采集:

（1）生物材料的采集尽可能地接近正常状态下获得组织和器官。

必须快速，及时速冻、低温保存

（2）血样采集用得较多的方法是静脉采血（3）尿样通常取在规定时间内的尿液（4）唾液采样一般是在漱口后15min,收集口内自然流出或舌在口腔内搅动后流出的混合唾液,二.样品的制备,1.样品的制备目的：

使样品充分代表待测样品的性质2.样品的制备（粉碎、混匀和缩分）方法：

摇动或搅拌（液体样品，浆体，悬浮液体）（用玻璃棒、电动搅拌器、电磁搅拌）切细或搅碎（固体样品）研磨或用捣碎机目前一般都用高速组织捣碎机进行样品的制备。

三.样品的保存,防吸水或失水、霉变、细菌等,1.鲜样如不能立即测定，则须放在冰箱中（-5）短期冷藏保存，以抑制其生理变化。

2.新鲜的动物样品取样后，一般采取冷冻保存（20），或采用超低温保存（70），或采用液氮冷冻保存，以防止蛋白质及脂肪发生变化。

2.3样品的预处理,一.预处理目的:

排除测定干扰因素；

浓缩测定物质

（1）提高灵敏度和降低检测限

（2）提高测试精度（3）提高方法的选择性（4）使样品易保存和运输（5）延长测试仪器的使用寿命,二.预处理方法分类：

1.溶解法2.蒸馏法3.有机物破坏法干法灰化避免测定物质的散失，加碱或酸湿法消化4.溶剂提取法溶剂分层法浸泡法盐析5.色层分离法6.其它的生化分离提纯技术,1有机物破碎法用于样品中无机盐或金属离子的测定。

在高温或强烈氧化条件下，使样品中有机物质分解，并在加热过程中成气态而逸散掉。

根据具体操作方法不同，又分为干法灰化和湿法消化两大类。

干法灰化时，样品在灰化炉中（一般550摄氏度）被充分氧化。

为了避免测定物质的散失，往往加入少量碱性或酸性物质（固定剂），通常称为碱性干法灰化或酸性干法灰化。

三.样品的预处理的具体方法,湿法灰化是加入强氧化剂（如浓硝酸、高氯酸、高锰酸钾等），使样品消化，而被测物质呈离子状态保存在溶液中。

由于湿法消化是在溶液中进行，反应也较缓和一些，所以被分析物质的散失就大大减少。

湿法常用于某些极易挥发散失的物质。

干法灰化时间长，常需过夜完成，但无须工作者经常看管。

由于试剂用量少，产品的空白值较少，对挥发性物质的损失较湿法消化大。

湿法消化时间短，而且挥发性物质损失较少，然而其试剂用量较大并须工作者经常看管。

2蒸馏法利用液体混合物中各组分挥发度的不同分离为纯组分的方法叫蒸馏。

（1）常压蒸馏当被蒸馏的物质受热后不发生分解或在沸点不太高的情况下，可在常压进行蒸馏。

加热方法根据被蒸馏物质的特性和沸点来确定，如果沸点不高于90可用水浴；

如果超过90，则可改为油浴、沙浴、盐浴、石棉浴；

如果被蒸馏物质不易爆炸或燃烧，可用电炉或酒精灯一直接火加热，最好要垫以石棉网，使受热均匀且安全。

当被蒸馏物质的沸点高于150度时，可用空气冷凝管代替冷水冷凝器。

（2）减压蒸馏当常压蒸馏容易使蒸馏物质分解，或其沸点太高时，可以采用减压蒸馏。

减压装置可用水泵或真空泵。

（3）水蒸汽蒸馏将水和与水互不相溶的液体一起蒸馏，这种蒸馏的方法就成为水蒸汽蒸馏。

（4）分馏分馏是蒸馏的一种，是将液体混合物在一个设备内同时进行多次部分汽化和部分冷凝，将液体混合物分离为各组分的蒸馏过程。

这种蒸馏方法用于这种混合液体，即它的两种或两种以上组分是可以互溶而且沸点相差很小的。

（5）扫集共蒸馏法扫集共蒸馏法是在成套的专门装置中进行的（如图2-2），可用于农药。

其原理是样品抽提液用注射器从施特勒管的一端注入后，农药便和溶剂在加热的管中化为蒸汽，并借氮气流吹入冷凝管，然后通过微层析柱进入收集器内，而脂肪和色素等杂质则被留在施特勒管和微层析柱中。

用此法净化只需2030分钟，速度快且节省溶剂。

对试样中的色素及脂肪都可分离。

施特,3溶剂提取法在任一溶剂中，不同的物质具有不同的溶解度，利用混合物中各物质的溶解度的不同，将混合物组分完全或部分地分离，此过程叫萃取，也称提取。

（1）溶剂分层法要从溶剂中提取某一组分时，所选用的溶剂必须与溶液中原溶剂互不相溶，而且能大量溶解被提取的物质（或者与提取组分互溶）。

当选用溶剂与溶液混合后，由于某一组分在两种互不相溶的溶剂中的分配系数不同，经多次提取可分离出来。

抽提的仪器可采用各式各样的分液漏斗。

（2）浸泡法从固体混合物或有机体中提取某种物质时，一般采用浸泡法，所以这种方法称为浸提。

所采用的提取剂，应既能大量溶解被提取的物质，又要不破坏被提取物质的性质。

为了提高物质在溶剂中的溶解度，往往在浸取时，要加热。

常用的是索克斯特式提取器（简称索氏提取器）。

（3）盐析法向溶液中加入某一物质，使溶质溶解在原溶剂中的溶解度大大降低，从而从溶液中沉淀出来，这个方法叫作盐析。

4色层分离法柱层析法是净化抽提液中杂质的最通用的方法。

在使用此法时调整吸附剂的活性及选用极性强弱适宜的溶剂是净化成败的关键。

柱层析法有吸附柱层析法和分配柱层析法。

吸附柱层析法常用氧化铝、活性碳和硅胶等作吸附剂；

分配柱层析法常用硅藻土和弗罗里矽土等做担体。

薄层层析实际只包括从点样到样品中被测各组分在薄层板上得到分离的过程。

不同组分在薄层层析上得到分离，是其极性不同的结果,2.4生化产品检验与分析方法的评价,一.分析方法的评价指标在研究一个分析方法的好坏时，通常用精密度、准确度和灵敏度三项指标评定。

此外还考虑线性和线性范围、耐用性等。

1.精密度：

是指对同一样品多次测定，每次测定结果与均值的符合程度。

是表示测定结果中随机误差大小的指标。

表示精密度的指标有标准偏差（S）、变异系数（CV）、平均偏差等。

评价精密度的方法有平行试验和重复性试验。

2.准确度：

指测定值与真值之间的符合程度。

往往以不准确度来衡量，即重复测定的均值与真值之差。

准确度主要受系统误差支配，也受随机误差的影响。

评价准确度的方法有回收试验、干扰实验、对比试验。

3.灵敏度：

是指分析方法所能检出的最低量。

4.特异性：

指分析测定中对某一成分起反应，其他物质对反应无影响或基本无影响。

评价特异性的方法有干扰试验。

5.线性范围：

是指能达到一定精密度、准确度和线性前提下，测试方法所适应的高、低浓度或量的区间。

通过线性试验确定。

6.耐用性:

指在测定条件下有小的变动时,分析相同的样品所测得试验结果的重现程度。

二.实验误差的表示方法,

（1）,（3）变异系数（CV）（相对标准偏差）:

是样本标准偏差与样本均数的百分比值。

用于比较各组数据间的变异情况，不受单位影响，CV值越大，说明测定值离散度越大，精密度越差。

（2）标准偏差（均方根偏差），用S表示。

是表示精密度的较好指标。

（4）数据理论评估标准偏差,质量控制图,在工业生产的质量控制和日常分析测试数据的有效性时,常用质量控制图。

回归曲线,三.提高分析精确度的方法（控制和消除误差的方法）,1.正确选取样品的量2.增加平行测定次数3.对照实验4.空白实验5.回收实验6.校正仪器和标定试剂7.严格遵守操作规程8.水质的要求,continue,3.对照实验:

标样与测样结果对照;

不同人员检验结果对照可检测方法的系统误差4.空白试验：

不加入待测样品，其它的测定过程、方法和试剂均与测定样品相同的试验。

可抵消由于试剂中杂质的干扰等因素造成的系统误差。

回收试验:

目的是衡量分析方法的准确度。

1.方法:

在样品中加入一定量被测物质，然后用同样方法测定，测得值与理论值之比乘以100%即为回收率，合格的回收率应为100%5%。

2.计算,回收浓度分析标本测得浓度基础标本测得浓度,100,%,5.回收实验,back,水质的要求,由于普通蒸馏水含有CO2，挥发性酸、氨和微量元素金属离子等，所以进行灵敏度高的微量元素的测定时往往将蒸馏水作特殊处理，一般采用硬脂全玻璃重蒸一次，或用离子交换纯水器处理。

四.分析方法的选择应考虑的因素:

1.分析要求的准确度、精密度和灵敏度2.分析方法的繁简和速度3.样品的特性4.现在条件,作业题:

1.评价分析方法的好坏标准有哪些?

2.选择分析方法时应考虑哪些因素?

3.名词解释:

精密度准确度回收实验空白实验对照实验变异系数,