有丝分裂实验的改进Word格式.doc

有丝分裂实验的改进Word格式.doc

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我们用选洋葱和大蒜作为试验材料，在18℃左右的恒温箱中培养，发现洋葱非常容易坏，且生根量极少。

大蒜几乎不坏，且一个蒜瓣的生根量就相当于一个洋葱的生根量，因大蒜的蒜瓣之间有空隙，不易缺氧，避免因缺氧造成的腐烂现象。

另外大蒜的染色体数为16，在观察染色体时候也比较方便。

1.2取材时机：

中午11：

00点～14：

00点时取材较好

本实验对材料的要求是最好用分裂相多的材料作为实验材料。

我们通过对早6：

00点～晚22：

00点之间的不同时段做对比实验得出：

在23～28℃温度下，中午11：

00点时取材最好，观察到的分裂相最多，其它时间段相对较少。

1.3培养时间：

根尖长到0.5-1cm后取材较好

不管用洋葱还是大蒜作为实验材料，等根尖长长到0.5-1cm后就可剪取0.3cm进行实验，这样就能大大缩短培养时间，并且实验效果也好，因为幼根的根尖细胞分裂更加旺盛，并且显微镜下也容易区分。

如果按照书本上的实验，不仅培养时间长，而且根尖的剪取长度也很难把握。

1.4培养温度：

2℃左右效果最好

本人对洋葱和大蒜的根尖分别作了-2℃、0℃、2℃、4℃、6℃、8℃的24h低温根尖培养。

在低温处理中，-2℃或0℃处理后，镜检时发现几乎无细胞分裂现象，2℃时,只有少数细胞处于分裂期，且分裂时期不明显，4℃时，不仅积累了很多前、中、后、末期的细胞，而且染色体比较粗短，典型的分裂相大增，在分生区内，平均每个视野中少则能观察到3～4个分裂相，多则可见十几个分裂相，6℃时分裂期细胞数目减少，8℃时分裂期细胞数目比6℃时更少。

2材料的固定保存

由于受教学进度的限制，不能保证上课时根尖正处于分裂相最多的时期，这就需要把处在细胞分裂旺盛期的根尖随时取下来，进行固定处理。

具体有以下两种操作方法：

方法一：

把剪取的根尖放入盛有固定液（95%的酒精：

99%的冰醋酸=3：

1）的培养皿内固定12～24h，然后取出漂洗，通过用不同体积分数的酒精（70%、95%、无水）漂洗不同的时间，取出用体积分数为70%的酒精漂洗1h以上。

然后把根尖保存在70%酒精中。

方法二：

把剪取的根尖放入卡诺固定液（纯酒精：

氯仿：

冰醋酸=12：

6：

2）中固定1h，然后把根尖保存在70%酒精中。

3解离后的漂洗方法的改进

解离后的根尖，必须漂洗干净，以便能够着色。

而教材中的漂洗时间为10min。

为缩短时间，可以将解离后的根尖放入盛有清水的小烧杯中，用玻璃棒不断搅拌，使根尖上附着的盐酸加速溶解，约2-3分钟后，再将根尖放入另一盛有清水的水洗杯中，漂洗一下即可。

4染色液的改进

我们在实验中发现质量浓度为0.01g/mL的龙胆紫染液易把根尖都染成深紫色，较难观察清楚有丝分裂各时期和染色体行为变化，因此我们将质量浓度为0.01g/mL的龙胆紫染液进行稀释。

因为醋酸能加强细胞核染色体的选择着色，所以我们选择用冰醋酸进行稀释，通过对几种不同浓度的稀释液（50%冰醋酸、20%、10%冰醋酸、4%冰醋酸）进行不同浓度的稀释比较，最后得出：

用10%的冰醋酸以3:

1的比例稀释后染色效果最好。

5压片方法的改进

为了减少细胞重叠，保证压片的质量，对于较粗的根尖不宜让学生直接压片，最好是把较粗的根尖纵切成2～3片再压片。

可以用双面刀片在萝卜上割一个根尖长短相当的缝隙，然后用镊子把根尖放入其中，再用左手压紧，右手用刀片把根尖纵切成2～3片，经纵切后的根尖压片效果非常理想。

不但易于观察，同时也能缩短时间，提高实验效率。

（如果在解离之前纵切还能进一步缩短解离、漂洗、染色、再漂洗的时间，从而进一步提高实验效率。

）

取染好的洋葱根尖，放在载玻片上，滴一滴清水盖上盖玻片，用吸水纸包上整个装片用拇指轻压，使根尖细胞分散充分。

这样不但能将压片过程中渗出来的水吸去，而且更加不容易使根尖和盖玻片移动。